Питательная среда для культивирования LeGIoNeLLa рNеUморнILа Советский патент 1987 года по МПК C12N1/20 

11359297

относится к медицинераши ду ре

кой микробиологии и касается питательной среды, которая может быть использована для культивирования Ь.рпеглпо- phila с целью накопления вирулентных микроорганизмов, а также для получения вакцинных препаратов для специфической профилактгики болезни легионеров у людей.

Цепь изобретения - повышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования.

Питательную среду готовят следующим образом.

Шгредиенты среды, кроме L-цистеи- на, растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипения и .кипятят 2-3 мин, проверяют реакцию среды и

при необходимости корректируют извест-2о нокислотный гидролизат рыбной кормо- ньм способом. Среду разливают во фла- вой муки 8,0j .однозамещенный фосфорнокислый- калий 0,8| двузамещенный фосфорнокислый калий 0,7; L-гцистеин вор L-цистеина НС1 стерилизуют фильт« рованием через мелкопористые фильтры

коны, стерилизуют в автоклаве при 121 С в течение 15 мин. Водный растсолянокислый 0,2; вода дистиллирован- 25 ная 1л.

(0,22|И ) и стерильно добавляют к го- И р и м е р 2. Готовят среду,как товой среде. В данной среде содержа- описано выше, но компоненты берут в

следу1ош 1х соотношениях, г/л: сернокислотный гидролизат рыбной кормовой 30 муки 10,0; однозамещенньй фосфорно- кисльй калий J,2; двузамещенньй фосфорнокислый калий J,0; L-цистеин солянокислый 0,4; вода дистиллированная 1л.

П р и м е р 3. Готовят среду,как вьш1е, но компоненты используют в следующих соотношениях, .г/л: сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки 9,0; однозамещенньй фос- окончании процесса гидролиза получен- 40 форнокисльй калий J,0; двузамещенный ный гидролизат охлаждают до 60-70 С фосфорнокислый калий 0,85, L-цисте- и фильтруют на пресс-фильтрах через ин 0,3; вода дистиллированная л. бельт;1нг.Пчр и м е р 4. Определение активI кости роста L;pneumophila.

Отфильтрованный гидролизат подвер- 45 испытания в качестве посевно- гают деионизации в колонках с аниони- том ЭДЭ-10П. Деионизированный гидроние аминного азота составляет 55мг-%, рН 6,9-7,0.

Сухой сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки готовят следующим образом.

Основой для производства сухого препарата является сернокислотньш гидролизат рыбной кормовой муки. Процесс гидролиза рыбной кормовой муки осуществляют в эмалированных реакторах в 10%-ном водном растворе серной кислоты при 132+2°С в течение 2 ч. По

го материала используют 48-часовую культуру легионелл, вьфащенных на угольно-дрожжевом агаре.

лизат должен удовлетворять следующим требованиям:

Внешний вид

Жидкость темно-коричневого цвета

Не более 1,5

3,0-4,5 Не ниже 1000 Не менее 600

Деионизироваиный гидролизат об- рабатьшают активным углем из расчета 20-30 г/л, фильтруют через картонные фильтры и сушат в распылительной сушильной установке при температуре воздуха на входе J90-J95°C, температуре воздуха на выходе 90-95 С.

Полученный гидролизат - мелкодисперсный порошок светло-желтого цвета хорошо растворим в воде, гигроскопичен. Хранится в герметической упаковке 2 года без потери свойств. %-tibrii водный раствор сухого гидроли- зата содержит 55,0±5,0 мг-% аминно- го азота.

Пример , Готовят среду, как описано вьппе, используя компоненты в следующим крнцетрациях, г/л: сер испытания в качестве посевно

го материала используют 48-часовую культуру легионелл, вьфащенных на угольно-дрожжевом агаре.

Культуру, смытую физраствором,вносят в объеме 2 мл в 50 мл испытуемых сред. В качестве контроля используют среду с протеозопептоном. Посевы культивируют при 37°С на качалке при

скорости вращения 250 об/мин. Учет результатов проводят через каждые ГО ч. При этом определяют концентрацию клеток в 1 мл (КОЕ) по стандартной методике, а также изучают морфо313592971

логические культуральные свойства вы- При использовании среды с опти- росших легионелл.мальными концентрациями компонентов

выход биомассы за 32-36 ч составляет

В таблице представлены средние riHbie 5 дельно).

10

1.10 КОЕ/МЛ (на известной среде за

данные 5 опытов (для каждой среды от- ДО-42 ч выход биомассы (1,2+0,3)-10

КОЕ/МЛ),

Концентрация белковой основы, %

Посевная доза, КОЕ/МЛ

Время культивирования, ч

Максимальный выход биомассы, КОЕ/МЛ

Использование предлагаемой питаг тельной среды позволяет ускорить процесс накопления биомассы в среднем на 6 ч при одновременном повьппении выхода биомассы в среднем на Ю КОЕ/МЛ. .

Ф ормула изобретения

Питательная среда для культивирования Legionella pnemophila, содержащая питательную основу, Ь цистеин, однозамещенный фосфорнокислый калий, двузамещенный фосфорнокисльй калий и дистиллированную воду, отличаю щ а я с я тем, что, с целью повьшеРедактор И.Рыбченко

Составитель Г.Смирнова ТехредМ.Моргентал Корректор М.Демчик

Заказ 6601Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4.

10

а

0,6

0,6

Ю - 10

10

44

36

1,8.10

1,3,JO

10

ния выхода биомассы -и сокращения вре- - мени культивирования, в качестве питательной основы она содержит серно- „Р кислотньм гидролизат рыбной кормовой муки при следующем соотношении компонентов, гУл:

Сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки8-10

L-цистеин0,2-0,4

Однозамещенный фосфорнокисльй калий 0,8-1,2 Двузамещенный фосфорнокислый калий 0,7-1,0 Дистиллированная вода J л.

Изобретение относится к медицин- -ской микробиологии. Цель изобретенияповышение выхода биомассы и сокращение времени культивирования. Для приготов-- ления питательной среды для культивирования Legionella pneumophila в 1 л дистиллированной воды растворяют сернокислотный гидролизат рыбной кормовой муки 8-10 г, однозамещенный фосфорнокислый калий 0,8-1,2 г, двузаме- щенный фосфорнокислый калий 0,7-1,0 г, нагревают до кипения и кипятят 2-3 мин стерилизуют при 15 мин. Раствор L-цистеина стерилизуют фильтрацией и в количестве 0,2-0,4 г добавляют к готовой среде, рН среды 6,9- 7,0. За 32-36 ч роста выход биомассы составляет 1.10 КОЕ/мл, 1 табл. (Л С со ел со э