Индикаторная среда для определения оксидазной активности AeRococcUS VIRIDaNS Советский патент 1987 года по МПК C12Q1/04 C12Q1/04 C12R1/01 

1,1

Изобретение относится к медицине кой микробиологии и может быть ис пользовано для идентификации бакте- рий Aeroсоecus viridans.

Цел. изобретения - повьпиение точ- ности определения за счет стабилиэа ции цветной реакции.

Среду готовят следующим образом.

Для приготовления ростового слоя в 1 л холодной воды последовательно растворяют компоненты, смесь гично перемешивают и расплавляют.Ств рилизуют при 1 ат 30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри со сформированным индикаторным слоем по 10 мл. При застывании смесь фор- мирует ростовой слой синтетической индикаторной среды для Aerococcus viridanr. Смесь для ростового слоя может храниться в рефрижераторе в течение 4-8 нед.

Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют ком™ поненты, смесь энергично перемешива™ ют и расплавляют. Стерилизуют при 1 ат 30 мин о Стерильную смесь разли- вают в чашки Петри по 10 мл. При зас тьшании смесь формирует индикаторный слой среды Смесь для индикаторного слоя может храниться в рефрижераторе при 4°С в течение нед.

Пример 1. Для приготовления индикаторной среды вначале г ртовят смесь для индикаторного слоя и форми руют индикаторный слой разливанием расплавленной стерильной смеси по 10 14Л в чашки Петри. После застыва™, шш индикаторного слоя на него нас- лаивают расплавленную .стерильную смесь для ростового слоя в количест ве 10 ь-ш. После застывания ростово го слоя среда готова к использованию

Дпя приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют, г:

20,0 0,4

10,0 12,0

Смесь энергично перемешивают и расплавляют 5 стерилизуют при 1 ат 30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри по 10 мл. Чашки Петри экспонируют при комнатной температу

5

0

g 0

0

5

ре вплоть до полного застывания ни- дикаторног-о слоя.

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последователь но растворяют, г:

Аммоний

хлорид3,0

Аммоний нитрат - 0,6

Натрий сульфат 1,4

Калий водородфосфат2,2

Калий диво-

дородфосфат0,6

Магний сульфат 0,06

Марганец

глицерофосфат

Натрий хлорид

Грамурин

ЭтоНИИ Никотиновая кислота Биотин Ка 1ьций панто™

тенат

Ри б о 3 о-З-фо с-

фат

L-Глутаминовая кислота

DIr-Валин

Инозит

Глюкоза

Агар- агар

0,3 12,5 0,025 0,001

0,04 0,0008

0,8 0,008

0,4

0,0005 0,01 0,01 12,0

Смесь энергично перемешивают и расплавляют, стерилизуют при 1 ат 30 мин. Стерильную смесь по 10 мл наслаивают на готовый индикаторный слой в чашках Петри. Чашки Петри экспонируют при комнатной температуре вплоть до полного застывания росто- вого слоя.

На поверхность готовой среды про- изводят посев суспензии суточной культуры Aerococcus viridans (bfyco- coccus hyperoxydans) GK308v.o. из расчета 20-50 колониеобразующих еди

ниц на 1 чашку со средой. Посевы ин- кубируют в термостате при 37°С. Че рез 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Aerococcus viridans (МусососCUS hyperoxydans) GK308v.o.

П р и м е р 2. Среду готовят в соответствии с примером 1.

. Дпя приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллирован-

НОИ воды последовательно растворя ют, г:

26,0 0,5

15,0 15,0

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последователь но растворяют, г:

Аммоний хлорид 4,0 Аммоний нитрат 0,6 Натрий сульфат 1,6 Калий водород- фосфат2,4 Калий диводородфосфат0,8

Магний сульфат 0,08 Марганец

глицерофосфат 0,4 Натрий хлорид 15,0 Грамурин0,03

Никотиновая

кислота0,05

Биотин0,0008

Кальций панто- тенат1,0

Рибозо-5-фосфат 0,01 Ij-Глутаминовая кислота0,5

DL-Валин0,001

Инозит0,02

Глюкоза0,02

Агар-агар13,0

На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Aerococcus viridans (Мусо- COCCUS hyperoxydans) GK308v.o. из расчета 20-50 колониеобразующих единиц на 1 чашку со средой. Посевы инкубируют в термостате при 37°С. Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Aerocoecus viridaлs (Мусосос- CUS hyperoxydans) GK308v.o.

П р и м е р 3, Среду готовят в соответствии с примером 1.

Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированно воды последовательно растворяют,г: Калий йодид 32,0 Натрий селенит 0,6 Крахмал растворимый20,0 Агар-агар17,0

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последователь но растворяют, г:

5

0

5

0

5

0

5

Аммоний хлорид Аммоний нитрат Натрий сульфат Калий водо- родфосфат Калий диводород- фрсфат

Магний сульфат Марганец глицерофосфатНатрий хлорид Грамурин Этоний Никотиновая кислота Биотин

Кальций панто- тенат

Рибозо-5-фосфат 1г-Гл ут ами нов ая кислота DL-Валин Инозит Глюкоза Агар-агар

5,0 1,0 1,8

2,6

1,0 0,1

0,5 17,5 0,035 0,003

0,06 0,0012

1,2 0,012

0,6

0,0015 0,03 0,03 14,0

На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Aerococcus viridans ( coccus hyperoxydans) GK308v.o. из расчета 20-50 колониеобразующих еди- ниц на 1 чашку со средой. Посевы инкубируют в термостате при З7 с, Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на осидазную активность Aerococcus viridans (l Jycococ- cus hyperoxydans) GK308v.o.

Сравнительная характеристика цветной реакции известной и предла- гаемой сред на оксидазную активность Aerococcus viridans (Мусосос- CUS hyperoxydans) GK308v.o. приведена в таблице.

Использование индикаторной среды для оценки оксидазной активности Aerococcus viridans позволяет получить более раннюю цветную реакцию (через 8-12 ч инкубации культуры вместо 24-48 ч при использовании из - вестной среды), получить цветную ре- акцию у 85-97% выросших колоний вместо 50-60% при использовании известной среды, уменьшить колебания

5,1

цветной зоны вокруг колоний, дости- гающей 46 мм вместе О , мм при ис пользовании известной среды, удлинить срок сохране}-шя оксидазной ре- акции при инкубации культур в термостате и при их хранении при комнат- ной температуре до сут вместо сут при использовании известной среды.

Формула изобретения

Индикаторная среда для определе™ ния оксидазной активности Aerococcus viridans 5 содержащая в нижнем каторном слое растворим1 ш крахмал, иодид калия, селенит натрия, агар-- агар и дистиллированную воду, в верХ нем рост-овом слое - глюкозу, этоний, хлорид натрия, агар-агар источник азЪта и-дистиллированную воду, от- личающая ся тем, что, с целью повышения точности определе1тя оксидазной активности за счет стаби- лизации цветной реакции среды,верх НИИ ростовой слой дополнительно со- держит сульфат натрия, однозамещен ный фосфат калия J двузамещенный фос-™ фат калия, сульфат магния, глицеро™ фосфат марганца, грамурин, биотин, пантотенат кальция рибозо- З- фосфат, инозит, никотиновую кислоту, в каче стве источника азота -- хлорид аммо- imHj .нитрат аммония 5 С1г валин и L- глутаминовую кислоту при следующем соотношении компонентой, г/.

Индикаторный слой; Иодид калия20 -32

Селенит натрияOjA- O S

8

овой

ия

ия

я

я

°

я

1СЬ20 12-17

1 л слой

3-5 0,6-1 1,4-1,8

2,2-2,6

0,06-0,1

0,3-0,5

0,025-0,035

0,0008-0,0012

058-)52

Оз008-0,012 0,01-0,03

О,04-05Об О р 0005- 0,0015

0,4-0,6

0,01-0,03

0,001-0,003

12,,5 12-14

1 л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентафикации бактерий AerococcuSj viridans. Цель изобретения - повышение точности определения за счет стабилизации цветной реакции. Индикаторная среда состоит из двух слоев: первый слой - индикаторный, содержащий калий йодид, натрий селенит, крахмал и агар-агар; второй слой - ростовой, содержащий набор минерсшьных солей, витамины, аминокислоты, селективные агенты, глюкозу и агар. Компоненты индикаторной среды перемешивают в 1 л дистиллированной воды, расплавляют, стерилизуют и разливают в чашки Петри.После застывания на индикаторный слой наслаивают ростовой слой в количестве 10 мл. Ростовой слой готовят аналогично индикаторному. После зас- тьшания среду засеивают исследуемыми микроорганизмами. Цветную раакцию учитывают через 18-22 ч, диаметр цветной зоны 4-6 мм, срок сохранения цветной реакции 7-14 сут. 1 табл. с е (Л 00 СП ;О ОО