Питательная среда для выявления вирулентных и авирулентных клеток в популяции чумного микроба Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

(21)4060532/28-13. :

(22)07.02.86

(Аб) 07.05.88. Бюл.№ 17

(71)Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири

и Дальнего Востока

(72)М.П.Маевский, З.И.Васильева, Г.А.Воронова, А.С.Марамович, А.А.Мохрякова и М.Е.Верхозина

(53)576.8.093(088.8)

(56) Higuchi К,, Smith О.L. Studies on the nutrition and physiology of Past, pestis. VI. A differential platting mediim for the estimation of the mutation rate to avirulence.- J.:BacteriolH961, 81, 4, p. 605-608.

(54)ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНЫХ И АВИРУЛЕНТНЬК КЛЕТОК В ПОПУЛЯЩШ ЧУМНОГО МИКРОБА

(51 Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при дифференциации вирулентных и

; авирулентных культур чумного микроба. Цель изобретения - упрощение среды с сохранением ее дифференцирутощих и ростовых свойств. Среда включает следующие компоненты, г/л агар 6,0- 8,0; гидролизат казеина 11,0-13,0; глюкоза 1,0-2,0; лимоннокислый натрий 9,9-1,1; фосфорнокислый двуэа- мещенный натрий 7,0-8,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 2,3-2,7; . пиросернистокислый натрий 0,4-0,7; хлористый магний 3,5-4,5; кристаллический фиолетовый 0,0015-0,0035. Навеску среды растворяют в 1 л дистиллированной воды, нагревают до растворения компонентов, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри. Среда более стандартна, не требует добав- ления крови, обеспечивает хорошие ростовые и дифференцирующие свойства по тесту потребления ионов кальция. 1 табл.

с &

оо со со

00

ий

со

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может использоваио при дифференциации вирулентных и авирулентных культур чумного микроба .

Цель изобретения - упрощение среды с сохранением ее дифференцирующих и ростовых свойств.

Пример I, Для приготовления л среды смегаивают сухие компоненты г/Л, агар (порошок) 6з,0| гидролизат казеина lljO; глюкоза 1,0;. лимонно кислый натрий 0,9, фосфорнокислый двузамещенный натрий 7,0 фосфорнокислый однозамещенный калий 2s3| пиро- сернистокислый натрий 0,4; хлористый магний Зз5; кристаллическш фиолето- вый О,0015„

Навеску среды растворяют в 1 л стерильной дистиллированной воды, тщательно размешивают, нагревают на медленном огне до полного расплавления, кипятят в течение 2-3 мин, разливают в стерильные флаконы, охлаждают до 45-50 С. Готовую среду разли вают в стерильные чашки Петри.

Пример 2, Для приготовления 1 л дифференциальной среды смешивают сухие- компоненты, г/л: агар (порошок) 7s,0; гидролизат казеина 12,0; глю-- коза 1 ,5| .лимоннокислый натрий 1 ,.0; фосфорнокислый двузамещенный натрий 7,55 фосфорнокислый однозамещенньм калий 2,5| пиросернистокислый натрий Оэ55; хлористый магний 4jOj кристаллический фиолетовый - 0,0025

Далее среду готовят в соответствии с примером 1,

Пример 3. Для приготовления 1 л среды смегаивают сухие компоненты, г/л: агар (порошок) 8,0; гидролизат казеина 13,0; глюкоза 2,0; лимоннокислый натрий 151; фосфорнокислый двузамещенный натрий 8,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 2,7; пиро сернистокислый натрий 0,7; хлористый магний 4,5; кристаллический фиолетовый 0,0035.

Полученные навески растворяют з 1 л стерильной дистиллированной во- ды, тщательно размешивают, нагревают на медленном огне до полного расплавления, кипятят 3 течение 2-3 мин

На две гиагаки с приготовленной средой и две с питательным агаром

рН 7,2, который служит контролем,засевают односуточную агаровую культуру возбудителя чумы в дояе 200 микробов. Колонии iiepBoro порядка подсчитыва

Q 5

0 5

О

д д

„

J

5

ioT чере з 42-48 ч инкубации при 37 С, колонии второго порядка - через 20- 24 ч дополнительной инкубации при той же температуре и колонии третьего порядка через 42-48 ч дополнительной инкубации при 28 С, При 37°С культивирования вырастают колонии из авирулентных клетокр т.е. кальцийнезависи- мые, при 28°С - вирулентные клетки, зависимые от ионов кальция

При изучении клеточного состава различных гатаммов по потребности в - ионах кальция на приготовленных по примерам 1-3 средах вырастает почти одинаковое количество колоний. Коле баняя в числе коло ний, вырастающих на этих вариантах среды, существенно не разл1гчаются, Р 0,01 во всех случаях (таблица) о

Результаты определения клеточного состава гатаммов чумного микроба по потребности в ионах кальция приведены в таблице,

.Из таблицы видно, что в популяции высокови:рулентных культур (И-2638, 2638/n532s И-3610) содержится большее число кальцийзависимых клеток, т.е., колоний третьего порядка. У субкультур (2638/11317, 3160/207, 3160/ /217) параллельно снизились количест- во колоний третьего порядка и вирулентность этих культур для лабораторных животных. Культуры (2638/ /П58, 2638/11316, И-2377), состоя- щие только из кальцийнезависимых клеток (колоний I, II порядка), ави- рулентны для белых мышей.

Использование изобретения позволяет изучить клеточный состав популяций различных штаммов чумного микроба по потребности в ионах кальция с большей достоверностью, так кнк питательная среда более стандартна по составу, не требует добавления крови, Кроме того, среду готовят из отечественных ингредиентов, что удешевляет способ,

Формула изобретения

Питательная среда для выявления вирулентных и авирулентных клеток в популяции чумного микроба, содер- жащая питательную основу, источник углерода, минеральные соли, агар и дистиллированную воду, о т л и ч а3139

ю щ а я с я тем, что, с целью упрощения среды с сохранением ее дифференцирующих и ростовых свойств, она дополнительно содержит кристалли- ческий фиолетовый, в качестве питательной основы она содержит гидро- лизат казеина, в качестве источника углерода - глюкозу и лимоннокислый натрий, в качестве минеральных солейхлористый магкий, фосфорнокислый двузамещенный натрий, фосфорнокислый однозамещенный калий и пиросернисто- кислый натрий при следующем количественном соотношении компонентов, г/л: Гидролизат казеина 11,0-13,0 Глюкоза1,0-2,0

Номер втамма чумяого мякроПа

Несто вцаелепня

Тувинский 5 Природный очаг

169

То же 36 118 - - J64 25

159 173Горво-Алтай- 175 екий прярод- яый очлг

То «в 9179

- - 39137

- - 968

ый

вода

0,9-1,1 3,5-4,5

7,0-8,0

2,3-2,7

0,4-0,7 6,0-8,0

0,0015- -0,0035

1 л

171 9

167 12 164 32

Высоковк- рулентный

177 II 181 8

173 63

Вь соко- вирулентный

13 45 135 37 121 63, |« Вирулент 10 miti

SQ 99 83 71 77 I-10 Слявовярупент-ныЛ