Способ количественного определения витамина Д @ в растительных кормах Советский патент 1987 года по МПК G01N30/06 

Изобретение относится к аналитической химии и может быть исйользова но для количественного определения витамина D в природных соединениях методом колоночной хроматографии.

Цель изобретения - повьшение чувствительности и сокращение времени анализа.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец гидролизуют спиртовым раствором щелочи, осуществляют экстракционное выделение неомыленной фракции и отделяют примеси на хроматографических колонках. Предварительное отделение каротиноидОв осуществляют на колонке с окисью алюминия. Фракцию, содержащую витамин D,, отбирают по времени выхода вита- мина D из колонки, растворяют в гексане, .подают в микроколонку с си- ликагелем и элюируют смесью 40-60%-н го раствора гексана в хлороформе. Выделенный на второй колонке витамин D,j детектируют в УФ-спектре.

Пример 1. Определение витамина D в искусственных растворах с добавками и без добавок эргостерина5 каротина, витаминов А и Е,

50 мл стандартного раствора витамина Dj с добавками и без добавки эргостерина, каротина, витаминов А и Е пропускают через колонку с окисью алюминия (длина колонки 500 мм, диаметр 8 мм). Колонку промывают 50 мл гексана и элюируют витамин Dj 1,5%-ным раствором изопропанола в гексане. Фракцию, содержащую витамин D,отбирают по времени выхода вита- мина D из колонки, упаривают досуха в атмосфере инертного газа и растворяют в 500-1000 жл гексана. 200- 300 мкл пробы вводят в микроколонку с селикагелем жидкостного хроматографа высокого давления Милихром и элюируют витамин D 40-60%-ным раствором гексана в хлороформе.

Детектирование ведут в УФ-спектре при 226 нм. Чувствительность опреде- ления витамина D 0,5 мкг (20 ИЕ) в .литре; определению не мешают эргосте рин, каротин, витамины А и Е в значи тельных избытках. Расчет содержания витамина D ведут по площади хромато Графического пика с учетом степени концентрирования его на хроматографи ческой колонке.

r 0 5

0

д

5

5

Результаты определения витамина D в искусственных растворах () приведены в табл. 1.

Пример 2. Определение витамина Dj в сене люцерновом и злаковом.

Навеску корма 25 г заливают 100 мл этилового спирта, добавляют 25 мл 50%-ного раствора гидроокиси калия и ведут гидролиз в течение 40 мин при в атмосфере инертного газа, Витамин П экстрагируют гексаном (дважды по 20 мл) из гидролизата, разбавленного водой до 40% эталона, отмывают водой от щелочи, сушат с сернокислым натрием и пропускают через колонку с окисью алюминия. Колонку промывают 50 мл re:.сана и элюируют витамин Dg 1,5%-ным раствором изо- пропана в г.ексане. Фракцию, содержащую витамин D , отбирают по времени выхода витамина D из колонки, упари-. вают досуха в атмосфере инертного газа и растворяют в 500-1000 мкл гексана. 200-300 мкл пробы вводят в микроколонку с силикагелем жидкостного хроматографа высокого давления Милихром и элюируют витамин D 40-60%-ным раствором гексана в хлороформе. Детектирование ведут в УФ-спектре при 266 нм.

Результаты определения витамица D2 в сене люцерновом и злаковом () приведены в табл. 2.

Аналогично определяют витамин D в других растительных кормах, при этом относительное стандартное отклонение не превышает 0,05.

Формула изобретения

Способ количественного определе- 1-щя витамина Dj в растительных кормах, включающий гидролиз образца спиртовым раствором щелочи, экстракционное выделение неомыляемой фракции, многократное отделение примесей на хроматографических колонках в потоках органических элюентов и спект- рофотометрическое детектирование выделенного витамина Dj, отличающий с я тем, что, с целью повы-; шения чувствительности и сокращения времени анализа, выделенную при пер-; . вом разделении фракцию витамина D растворяют в гексане, а последующее .- отделение примесей осуществляют в потоке 40-60%-ного раствора гексана в хлороформе.

Составитель А. Толстых Редактор И. Рыбченко Техред А.Кравчук Коррректор Г. Решетник

6397/33

Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. А/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Таблица 1

Таблица 2

Изобретение Относится к аналитической химии и может быть использовано для определения витамина D в природных соединениях методом колоночной хроматографии. Целью изобретения является повышение чувствительности и сокращение времени анализа. Исследуемый образец гидролизируют спиртовым раствором щелочи, .осуществляют экстракционное выделение неомьшенной фракции и отделяют примеси на хроМа- тографических колонках. Предварит ель- ное отделение каратрнидов осуществляют на колонке с окисью алюминия. Фракцию, содержащую витамин 0, отбирают по времени выхода витамина Dj из колонки, растворяют в гексане, подают в микроколонку с силикагелем и злюируют смесью 40-60%-ного раствора гексана в хлороформе. Вьщеленный на второй колонке витамин 0 детектируют в УФ-спектре, . табл. S С/) со 05 со о О5