Способ получения овечьего пепсина Советский патент 1988 года по МПК C12N9/64 

оо

Изобретение относится к биотехнологии и мясной промьшшенности.Цель изобретения - улучшение качества целевого препарата и повышение его выхода. Способ после экстракции предусматривает проведение ферментации в течение 1,5-2,0 ч путем внесения в экстракт грибной /з -галактозидазы в количестве 0,40-0,50 мг/л при рН 3,5-4,0. 4 табл.

00

vl

Изобретение относится к биотехнологии и мясной промъшшенности.

Цель изобретения - улучшение качества целевого продукта и повышение его выхода.

Одной из основных характеристик качества пищевого пепсина является, наряду с молокосвертывающей активностью, содержание в нем нерастворимого осадка. Значительное содержание нерастворимого остатка ведет, с одной стороны, к значительному перерасходу препарата из-за его неполного растворения, с другой - нерастворимая часть препарата захватывается сгустком и переходит в сьфную массу, где оказывает отрицательное влияние на ход биотехнических и микробиологических процессов.

Разрушение слизистых веществ в процессе производства пепсина способствует повьш1ению его качества:

-за счет ускорения процесса фильтрации в значительной степени сокращаются рост и развитие вредной микрофлоры;

-разрушаясь, слизистые вещества способствуют, во-первых, высвобождению пепсиногена (предшественника пепсина) , что улучшает доступ к нему активизирующих ионов водорода, ускоряется также автолитический процесс, во-вторых, отшитые от гликопротеинов углеводные фрагменты (,моно и олиго- сахариды) способствуют повышению атакуемости пепсиногена активизированными молекулами пепсина при понижении рН до 2,0.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Замороженные сычуги овец измельчают на волчке, заливают раствором соляной кислоты и экстрагируют пепсин, причем в начале экстракции реакционную смесь перемешивают. После рН жидкой части экстракта доводят до 3,5-4,0 раствором едкого натра и добавляют /5-галактозидазу, вьщелейную из Alternaria tenuis, из расчета 0,4-0,5 мг/л и выдерживают в течение 1,5-2,0 ч. Затем экстракт фильтруют, охлаждают и доводят рН смеси до 2,0 соляной кислотой.. Концентрирование экстракта проводят добавлением хлористого натрия. Концентрат отстаивают в течение 4 ч, после чего собирают и обезвоживают под нагрузкой 0,022 кг/см до достижения 1/3 исходного объема. Полученный концентрат высушивают в вакуумной сушилке, измельчают на шаровой мельнице до порошка тонкого помола, просеивают через шелковое сито № 32 и нормализуют хлористым натрием до получения стандартной активности.

Слизистые вещества представляют

собой прочные химические соединения белков и углеводов. Причем углеводные фрагменты всегда имеют разветвленную структуру и покрывают более половины белковой части соединения

короткими цепями, что придает веществу устойчивость и слизистый характер. При ферментации происходит частичное разрушение гликозидных связей в углеводной части и соединение теряет слизистые свойства.

Оптимальность параметров процесса ферментации установлена экспериментально в зависимости от содержания слизистых веществ в экстракте после

ферментации. О количественном содержании слизистых веществ судят по относительной вязкости экстракта, которую определяют путем сравнения вязкости экстракта до и после процесса

ферментации.

Результаты экспериментальных исследований представлены в табл. 1-3. Основным условием, обеспечивающим нормальное протекание процесса ферментации, является рН среды.

Как видно из табл. 1, слизь в большей степени разрушается при рН 3,5-4,0. При рН менее 3,5 количество

слизистых веществ практически не изменяется, а увеличение рН до 4,5 также не приводит к их заметному уменьшению. При принятых значениях рН 3,5- 4,0 пепсин проявляет максимальную

устойчивость и менее чувствителен к изменениям окружающей среды.

Оптимальное количество вносимого фермента также установлено по степени разрушения слизистых веществ и

расходом фермента (табл. 2). При внесении менее 0,4 мг/л /i-галактозида- зы в экстракте содержится большое количество слизистых Веществ, а добавление более 0,5 мг/л -гапактозидл- зы не приводит к сокращению содержания слизистых веществ,.

Как видно из табл. 3, при ферментации экстракта менее 1,5 ч разрушается незначительное количество слизистых веществ, о чем свидетельствуе повышенное значение относительной вякости экстракта, а при увеличении времени выдержки более 2 ч снижение содержания слизистых веществ не наблюдается.

Предлагаемый способ характеризуется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1. Замороженные сычуги овец измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм. Сычуги заливают раствором соляной кислоты (уд.вес 1,19) в количестве 2,5 л при рН 2,0 и экстрагируют пепсин при 26°С в течение 4 ч. Причем первые 30 мин производят перемешивание реакционной смеси. После этого рН жидкой части экстракта доводят до 3,5 1 н.раствором едкого натра, добавляют /д -галак тозидазу из расчета 0,5 мг/л и выдерживают в течение 1,5 ч. Затем экстракт фильтруют, охлаждают до и доводят рН смеси до 2,0 соляной кислотой. Концентрирование экстракта проводят добавлением 200 г хлористого натрия. Затем концентрат отстаивают в течение 4 ч, после чего сливают маточный раствор. Полученный концентрат обезвоживают прессованием (0,022 кг/см) и высушивают в вакуумной сушилке при 35°С. После этого сухой концентрат измельчают на шаровой мельнице до порошка тонкого помола, просеивают через шелковое сито № 32 и нормализуют сухим хлористым натрием до стандартной активности. Содержание нерастворимого остатка в гото- вом препарате 2,0%.

П р и м е р 2. Замороженные сычуги овец измельчают на волчке с диаметром решетки 5 мм. Сычуги заливают раствором соляной кислоты (уд.вес 1,19) в количестве 2,5 л при рН 2,0 и экстрагируют пепсин при 26°С в течение 4 ч. Причем первые 30 мин про- изводят перемешивание реакционной смеси. После этого рН жидкой смеси экстракта доводят до 4,0 1 н.раство

3,0

2,180

Примечание. Доза фермента 0,40 мг/л, продолжительность ферментации 2 ч.

ром едкого натра, добавляют ,/}-галак тозидаэу из расчета 0,4 мг/л и выдерживают в течение 2 ч. Затем охлаждают до 20° С и доводят рН смеси до 2,0 соляной кислотой. Концентрирование экстракта проводят добавлением 200 г сухого хлористого натрия. Затем концентрат отстаивают в течение 4 ч, после чего сливают маточный раствор. Полученный концентрат обезвоживают прессованием (0,22 кг/см ) и высушивают в вакуумной сушилке при 35-40 С. После этого сухой концентрат измельчают на шаровой мельнице до порошка тонкого помола, просеивают через шелковое сито № 32 и нормализуют сухим хлористым натрием до стандартной активности. Содержание нерастворимого остатка в готовом препарате 2%.

Данные сравнительных экспериментальных исследований представлены в табл. 4.

Как видно из табл. 4, предлагаемый способ получения пепсина по сравнению с известным способом повьш1ает активность экстракта, увеличивает выход сухого пепсина, уменьшает содержание нерастворимого остатка. Кроме того, сокращается длительность процесса получения сухого пепсина на 8 ч.

Формула изобретения

Способ получения овечьего пепсина, предусматривающий подготовку животного сьфья, кислотную экстракцию при оптимальных условиях ведения процесса, фильтрацию полученного экстракта, концентрирование, обезвоживание вы- сола, сушку, измельчение и стандартизацию сухого препарата, отличающийся тем, что, с целью улучшения качества целевого продукта и повьш1ения его выхода, перед концентрированием полученный экстракт подвергают ферментации /5 -галактозидазой при рН от 3,5 до 4,0 до достижения максимальной активности фермента.. Таблица 1

4,0

4,5

1,926 1,835 1,827

513701376

Таблица 2

Доза фермента, мг/л 0,3 О,А 0,5 0,6

Относительная

вязкость2,090 1,926 1,87А 1,872

Примечание. рН -3,5, продолжительность ферментации 2 ч.

I

Таблица 3

Продолжительность

ферментации, ч О 1,0 1,5 2,0 2,5

Относительная

вязкость экстракта 2,334 2,068 2,034 1,926 1,926

Примечание. Доза ферментации 0,4 мг/л, рН 3,5.

I

Таблица 4

СпособОтноси- Актив- Выход Содержа- Длительтельная ность сухого ние не- ность вязкость экстрак- пепсина, раство- техноло- экстракта та, в г римого гического 1 млн.ед.остатка, процесса,

ч

Предлагаемый1,926 166 17,8 2,0 16-18

Известный2,344 154 8,5 3,5 24-26

Составитель И.Привалова Редактор М.Недолуженко Техред М.ДидыкКорректор И.Эрдейи

Заказ 372/23Тираж 520Подписное

ВНШ1ПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Проиэподственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4