(46) 23.08.90. Бнш. Vf 31
(21)3834086/28-14
(22)27.12.84
(71)Московский научно-исследовательский онкологический ннститут им. П. А. Герцена н Московский научно-исследовательский институт эпидеаднологии и микробиологии им. R Г. Габричевского
(72)В. А. Алешкин, Л. И. Новикова и Т. Н. Алешкина
(53)615.373(088.8)
(56)iJ. Immunol. Meth. 1975, 9, 141.
(54)СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕ- ЦИФИЧЕСКОП АНТИСЫВОРОТКИ К ОРОЗОМУКОИДУ ЧЕЛОВЕКА
(57)Изобретение относится к иммунологии, точнее к иммунодиагностике. Цель изобретения - упрощеиие способа. Для этого к 100 мл донорской сыворотки добавляют сухой полиэтиленгликоль до 22% хонцентра- ции, рН 5, 6 доводят с помощью 0,1%-но- го р-ра ацетата натрия, тщательно перемешивают иа магнитной мешалке 24 ч, центрифугируют 3000 g в течение 30 мин. Супер- натант сифоннзируют: фракция супериатанта
дает с антисывороткой к сывороточным белкам крови человека в иммунофорезе 5 дуг преципитации, соответствующих альбумину, оро- зомукоиду, tti - антитрипсину, гаптоглоби- иу и трансферину. Для идентификации линии преципитации, соответствующей орозо- мукоидозу, в лунку диаметром 1,5 мм з&ли- вают 5 мкл 1,5%-ного раствора лектина из проростков пшеницы. При электрофоре- тнческом разделении над лункой происходит торможение лнннн преципитации, соответствующей орозомукоиду. Для получения мо- иоспецифической аитисыворотки к орозому- коиду вырезают полосу геля, содержащую соответствующий преципитат, многократно отмывают забуференным физнологическим раствором (0,15 М NaCI, растворенный в 0,01 М фосфатном буфере 7,2). Отмытую полоску агарозы солюбизируют в 0,5 мл 6М р-ра йодистого калия. После растворения 0,25 мл полученной суспензии смешивают с равным объемом полного адъюванта Фрейда. Полученная аитисыворотка в иммунном электрофорезе дает по одной полосе преципитации, соответствующей орозомукоиду, т.е. является моиоспецифической.
i
(Л
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ С1-ИНАКТИВАТОРА ЧЕЛОВЕКА | 1992 |
|
RU2068693C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ОНКООВАРИАЛЬНОГО АЛЬФА-1-ГЛОБУЛИНА | 1990 |
|
RU2022559C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПОНЕНТА CЗ КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА | 1996 |
|
RU2144365C1 |
| Способ получения моноспецифических антител к лактоферрицину человека | 2022 |
|
RU2795322C1 |
| Способ диагностики диабетической микроангиопатии | 1988 |
|
SU1564553A1 |
| СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АУТОАНТИТЕЛ К ЛИПОПРОТЕИДАМ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ | 1997 |
|
RU2137134C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕТА-2-ГЛОБУЛИНА МЕКОНИЯ ПЛОДОВ ЧЕЛОВЕКА | 1992 |
|
RU2110276C1 |
| ИММУНОСОРБЕНТ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ АНТИСЫВОРОТКИ К ТРАНСТИРЕТИНУ ЧЕЛОВЕКА | 1995 |
|
RU2088937C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИСЫВОРОТОК К АНТИГЕННО РОДСТВЕННЫМ БЕЛКАМ | 2001 |
|
RU2215294C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К БЕЛКАМ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК | 2008 |
|
RU2410395C2 |
со
00
ОС
Изобретение относится к иммунологии, в чвсткости X иммунодиагностике,
Целью изобретения является упрощение спосоСа.
К 100 мл донорской сыворотки добавляют сухой полиэтилен гликоль до 22% концентрации, рН доводят до 5,6 с помощью 0,1 %-ного растворв ацетата натрия, тщательно перемешнвают на магнитной мешалке в течение 1 ч при комнатной температуре, центрифугируют при 3000 g в тече- иие 30 мии. Супернатаит сифонизируют и используют дальше. Фракция супернатаита дает с антисывороткой к сывороточным белкам крови человека в иммунофорезе 5 дуг преципитации, соответствующих альбумину, орозомукоиду, Огантитрнпсину, гап- тоглобину и трансферниу. В дальнейшем фракцию, содержащую перечисленные выше белки, используют в линейном иммуиоэлегсг- рофорезе (который проводят в веронал-меди- наловом буфере с молярностью 0,06 и рН 8,6 при напряжении 2 В/см), где белки указанной фракции с антисывороткой ко всем сывороточным белкам человека образуют 5 линейных полос преципитации, расположенных на разном удалении от базнсной линии. Для идентификации линяй преципитации, соответствующей орозомукоиду, в лунку диаметром 1,5 мм, находящуюся на удале- НИИ 5 мм от полоски геля, содержащего антиген, заливают 5 мкл 1,5%-ного раствора лектина из проростков пшеницы (любого вида). При электрофоретическом разде0
Ленин над лунной с лектнном лронсходнт торможение линии преципитации, соответствующей ороэомуконду. Для получеиня мо- иоспецифнческоЙ антисыворотки к ороэому- коиду вырезают полосу геля, содержащую соотв)етсгвующий преципитат, многократно отмывают забуферениым физиологическим раствором (представляющим собой 0,15 М хлористый иатрий, растворенный в 0,01 М фосфатном буфере рН 7,2), отмытую полоску агарозы солюбилизируют в 0,5 мл 6 М раствора йодистого калия. После полного растворения 0,25 мл полученной суспензии смещнвают с равным объемом полного адъю- ваита Фрейда. Цикл иммунизацнн кроликов состоит из трех подкожных инъекций по 0,5 мл суспензии с интервалом в Ш дней. Забор крови производят иа 10-й деиь после последней иммуннзацни.
Полученная таким образом аитисуворотка в иммунном электрофорезе дает по од0 ной полосе преципитации, соответствующей
орозомукоиду, т.е. является моноспецифи
ческой.
5
25
30
I Формула изобретения
Способ получения моноспецифической антисыворотки к орозомукоиду человека путем иммунизации животного иммунным комплексом, содержащим орозомукоид, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, используют иммунный комплекс, реагирующий с лектийом, полученным из про- DOCTKOB пшеницы.
