Способ определения подвижности неферментирующих грамотрицательных микроорганизмов Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

(21)4103384/28-13

(22)07.08.86

(46) 23.03.88. Бюл.№ 11

(71)Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф.Ф.Эрис- мана

(72)Г.М.Трухина, Н.Б.Комзолова и Г.П.Калина

(53)576.8.093(088.8)

(56)Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований.- М.: Медицина, 1978,

с.350, 60.

(54)СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОДВИЖНОСТИ НЕФЕРНЕНТИРУМЦИХ ГРАМОТРИЦАТЕЛЪНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

(57)Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть применено при диагностике заболеваний, обусловленных бактериями группы неферметируюгчих грамотрицательных

микроорганизмов (НФГОМ) в патологическом материале, при гигиенических и эпидемиологических исследованиях окружающей среды. Цель изобретения - повьциение точности способа. Способ характеризуется использованием в бактериологических чашках двухслойной среды, в которой нижний слой состоит из 1,2-1,8 мас.% агара в дистиллированной воде, а верхний слой - из 1,2-1,8 мас.% агара на мясном настое с добавлением 0,8-1,2 мас.% пептона, 0,75-1,25 мас.% хлорида натрия, 0,00018-0,00022 мас.% кристаллического фиолетового. При посеве уколом 12-18 испытуемых штаммов в одной чарже и инкубации при комнатной температуре 1-2 сутJнеподвижные виды растут в виде небольшой колонии в месте укола диаметром 1 - 3 мм, а подвижные - в виде широких бляшек диаметром 12-20 ммо 2 табл.

i

(Л

00 00

ю

00 СП

20

25

11382850

Изобретение относится к медицин- |.кой микробиологии и может быть не- тользовано при диагностике заболе- аний, вызванных неферментирующими рамотрицательными микроорганизмами. Целью изобретения является повышение точности способа.

Пример 1.В лростерилизован |иую бактериологическую чашку с двои- ю Ной крышкой (бумажной и стеклянной) вливают 20-25 мл среды (нижний слой), родержахчей, маСс%: агар 1,5; вода дистиллированная остальное, простери- ртизованной при 1 атм 20 мин. После 15 |застывания среды под бумажной крьш1- 1кой заливают верхний слой среды. Верхний слой готовят следующим обра- зом. Пептон (1,0 мас.%)5, агар (0,35 мас.%), NaCe (1,0 мас.%) вно- сят в мясной настой, доводят объем среды до 1 л, стерилизуют при 1 атм 20 мин. Отдельно готовят 0,01%-ный раствор кристаллического фиолетового в дистиллированной воде и вводят в верхний слой из расчета 0,0002 на 1 л среды.

Полученную питательную среду в количестве 20-25 мл наслаивают на застывший нижний слой. После застывания среды производят посев исследуемых культур или колоний с плотных сред уколом до дна чашки. На одной чамке можно одновременно производить посев до 12218 штаммов. После посева 5 чашку закрывают поверх бумажной крьшки стеклянной. Инкубируют посевы при 20-22 С 12-18 ч (предварительный учет) и дополнительно 20-22 ч (окончательный учет). Затем определяют 30-40 ну Посева.

, Положи тельный результат: зона роста вокруг посева уколом в виде венчика диаметром от 12 мм и более.

Отрицательный результат: неболь- шого размера колония или точечный рост в месте укола (диаметр 3 мм и менее),

Подвижность микроорганизмов показана в табл.1,

Приме р 2. Осуществляют способ в соответствии с примером 1, но компоненты среды берут в следующих

30

45

50

соотношениях, мас,%: нижний слой - агар 1,2, дистиллированная вода - до 1 л; верхний слой - агар 0,3; пептон 0,8; NaC 0,75; кристаллический фиолетовый 0,00018, мясной настой до 1 л.

Пример 3. Осуществляют способ в соответствии с примером 1, но компоненты среды берут в следующих соотношениях, мас.%: нижний слой - агар 1,8; дистиллированная вода - до 1 л, верхний слой - агар 0,4; пептон. 1,2; NaCP 1,-5; кристаллический фиолетовый 0,00022; мясной настой до 1 л.

Сравнительные данные по определению подвижности у неферментирующих грамотрицательных бактерий приведены в табл.2.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить точность определения подвижности неферментирующих грамотрицательных бактерий.

Формула изобретения

Способ определения подвижности не- ферментирую1цих грамотрицательных микроорганизмов путем посева исследуемой культуры уколом в питательную среду, содержащую мясной настой, пептон, МаСб , агар, с послед пощим инкубированием посевов и определением подвижности по характеру роста микроорганизмов, о. т л и ч а ю - щи и с я тем, что, с целью повышения точности способа, используют питательную среду, состоящую из двух слоев, при этом дополнительный нижний слой содержит, мас.%:

Агар1,2-1,8

Дистиллированная

водаОстальное

а верхний слой дополнительно содержит кристаллический фиолетовый при следующем количественной соотношении

компонентов, мас.%:

Агар0,3-0,4

Пептон0,8-1,2

NaCfi0,75-1,25

Кристаллический

фиолетовый 0,00018-0,00022 Мясной настой Остальное инкубирование посевов проводят при . 20-22 С, а подвижность бактерий определяют по наличию 1инроких бляшек диаметром от 12 до 20 мм в месте укола.

Вид бактерий

Citrobacter spp.

Enterobacter spp

E.coli

PS. aeruginosa

Klebsiella pneumonia

Klebsiela ozenae Str. faecalis

Acihetobacter caleoaceticus

Таблица 2

Правильный ответ.

Вид бактерий Количе- „ ,.

% для способа

ство

предла- штаммов известного

iss rs

1 сут 2 сут 1 сут 2 сут

Pseudomonas

aemginosa80ОО96 100

Acinetobacter spp. 320ОО100 100

I

Составитель А.Завадская Редактор Н.Гунько Техред Л.Олийнык Корректор И.Эрдейи

Заказ 1263/22 Тираж 520Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

Таблица 1

Неподвижность

+ +

+ + +