Питательная среда для идентификации и межродовой и внутриродовой дифференциации бактерий @ - @ Советский патент 1983 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к микробио логии, в частности к санитарной микробиологии. Известна питательная среда для индентификации грамотрицательных микроорганизмов, позволяющая одновременно ВЫЯВЛЯТЬ шесзть бирхимических признаков l. Известна также питательнаясреда для определения уреазной активности и продукции индола 2J. Известна также питательная среда для одновременного определения фенилаланин-деаминазы и гидролиза малоната натрия 3}. Однако известные среды не позво ляют одновременно выявлять все биохимические признаки, необходимы для идентификации и меЛродовой и внутриродовой дифференциации бакте рий, Proteus-Providencial. Цель изобретения создание питательной среды для идентификации и межродовой и внутриродовой диффере циации бактерий Proteus-Providenci Цель достигается тем, что созда питательная среда для идентификации и внутриродовой дифференциации бактерий Proteus-Providenciae,. зак лючающийся в том, что она содержит .два слоя, при. этом в верхнем слое она содержит агар, NaCl, Na{NH4)HP тиосульфат натрия, DL-триптофан, дрожжевой зкстракт жидкий, дрожжевой экстракт сухой и воду, а в ниж нем слоев - агар, NaCl, К НРОд/ , глюкозу, пептон, мочевину, нейтральный красный и воду при сле дующем количественном соотношении ингредиентов, мас.%: Верхний слой: Агар0,5-0,9 Nad0,4-0,6 Na(NH4)HPa 0,08-1,2 Тиосульфат натрия 0,05-0,15 DL-триптофан 0,1-0,3 Дрожжевой экстракт жидкий 3,0-27 ,0 Дрожжевой экстракт сухой0,2-0,4 ВодаОстальное Нижний слой Агар0,4-0,8 Nad0,4-0,6 К2 НРОф 0,06-0,14 КН2РО4 0,04-0,08 Глюкоза 0,1-0,2 Пептон 0,05-0,15 Мочевина 0,08-1,2 Нейтральный красный 0,002-0,0 Вода... Остальное Пример.. Приготовление среды. Ингредиенты нижнего слоя, к ме мочевины, стерилизуют при С ,5 атм 15 мин, прибавляют 50%-ный одный раствор мочевиныi (самостеилизуется после i-3 сут. выдержиания при комнатной температуре, азливают асептично по 3 мл в проирки, охлаждают в вертикальном полоении., ; Ингредиенты верхнего слоя, кроме риптофана и тиосульфата натрия, терилизуют при 0,5 атм 15 мин, приавляют аиптофан и тиосульфат натия, растворенные и прокипяченные в ебольшом количестве воды, смешиват, разливают поверх нижнего слоя о 6 мл, охлаждают в .положении, ри котором образуется столбик ысотой, равной высоте столбика ижнего слоя, и небольшая скошенная оверхность. П р и м е р. Использование среды и учет результатов. Посев свежей (суточной культуры испытуемого микроба или колонии с чашки с питательной элективной средой осуществляют штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик до дна пробирки. После, посева между пробкой и стенкой пробирки вставляют реактивную бумагу на индол, инкубируют при 35-37С 18-20 ч. Учитывают в нижнем слое расщепление мочевины ( окрашивание в желтый или оранжевый цвет; , образование газа в виде пузырьков в толще среды или разрывов среды (ферментация клюкозы с образованием газа видом Провиденция алкалифациенс: представители рода Протеус газ в этих условиях не образуют за.счет интерференции ферментации глюкозы и уреазной активности ; учитывают реакцию на индол ( красное окрашивание реактивной бумаги). Затем осторожно по стенке пробирки, противоположной скошенной поверхности, наливают 0,5 мл раствора - хло- . рида железа ( Hi ) (ГеС1з)3,0 соляной кислоты 1,3, остальное - вода. Положительная реакция на триптофан-деаминазу проявляется в первоначально оранжевом, а затем вишневекрасном окрашивании смеси конденсациооной жидкости с реактивом и подлежащего слоя среды, наиболее интенсивно у Пр. мирабилис, менее интенсивно у Пр. вульгарно и Провиденция и ввиде оранжевого окрашивания остается у Пр. моргании и Пр. реттгери. Отрицательная реакция у прочих представителей семейств энтеробактерий, вибрионов, псевдомонад - желтое окрашивание, почти незаметное в подлежащем слое среды. Окрашивание наступает сразу после прибавления реактива, полной силы набирает после 2-3 ч пребывания при комнатной температуре. Для ускорения появления окрашивания можно поместить среду в термостат при ЗТС на 1-1,5 ч, В это время, а при комнатной температуре через 3-4 ч в столбике, образованном верхним слоем, непосредственно под началом скошенной поверхности в результате диффузии хлорида железа в толщу агара появляются вначале небольшие (точечные) участки черного цвета, переходящие в Серпообразные полоски, переходящие через 4-5 ч в кольца значительной ширины. Но уже по образованию первичной узкой черной полосы можно судить о продукции. .

Для выявления деамииазы и сероводорода используется модицифирован.ный реактив Singer Vqlcani,о содержащий MajC.%: хлорид железа (Ш 13,0} соляная кислотв 1,3; вода остальное,

Для выявления продукции индола используется полоска бумаги, пропитанная модифицированным реактивом Gillies, мас.%: пара-диметиламинобензальдёгид 7,7; opfoфocфopнaя кислота 15,3} остальное изоамиловый спирт. Раствором пропитывают фильт0ровальную бумагу, подсушивают при комнатной температуре, нарюзгиот на полоски 0,5-5,0 см,

Данные по идентификации и диффе5ренциации приведены в таблице.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ И МЕЖРОДОВОЙ И ВНУТРИРОДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЙ БАКТЕРИЙ PROTEUSPROViClENCiA, заключающаяся в том, что она содержит два слоя, при этом в верхнем слоев она содержит агар, Nad, Na (NH , тиосульфат натрия, В1,-триптофан, дрожжевой экстракт ГГ/ЧИ/П ГР.в ,- -... ..,-- i/J ,- jr.. ГД ------ I жидкий, жрожжевой экстракт сухой, воду, в нижнем слое - агар, NaCl, К 2. НРОд ,КН 2. РО4 глюкозу, пептон, мочевину, нейтральный красный, воду |при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас.%: I Верхний слой: Агар0,5-0,9 Nad0,4-0,6 Na(N44.)HP04 0,08-1,2 Тиосульфат .йатрия0,05-0,15 DL-Триптофан 0;1-0,3 Дрожжевой экстракт жидкий 3,0-27,0 фожжевой экс0,2-0,4 тракт сухой Остальное Вода Нижний слой: .0,4-0,8 Агар Nad 0,4-0,6 0,06-0,14 0,04-0,08 KH,jPO 0,1-0,2 Глюкоза 0,05-0,15 Пептон 0,8-1,2 Мочевина Нейтральный : :л 0,002-0,01 красный Вода Остальное о. э: :л