Способ консервации мицелия макрогрибов Советский патент 1988 года по МПК C12N1/04 C12N1/00 

ее эо

3

о

ел

со

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности технологии хранения Чистых культур, а именно мицелия макрогрибов, а также для получения посевного материала производственных штаммов.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности грибов.

Пример 1. Мицелий высшего ба- Q жизнеспособности.

зидиального гриба Pleurotus ostrea- Контролем 1 для всех примеров яв- tus (lacq. Fr) Kummer штамм HMBF-1300 из коллекции Института ботаники им. Н.Г.Холодного АН УССР культивируют в чашках Петри на плотной пита- is тельных средах, которую хранят при тельной среде в течение 7 сут. Дегид- +4°С, а контролем 2 - мицелиальная ратацию мицелия проводят в масса, дегидратирования аналогично

5, 7,5 и 15°С в вакуумном эксикаторе При влажности мицелия 10% проводят замораживание со скоростью 300 - 320°С МИН до -196°С, Отогрев проводят со скоростью 40-50°С мин в водяной бане при 38-40°С. После отогрева мицелий высевают на такую же культу- ральную среду для определения его

ляется мицелиальная масса тех же дву штаммов базидиального гриба, культивируемая, на твердой или жидкой питавакуумном эксикаторе при +15 С на протяжении 5 сут. При достижении влажности мицелиальной массы 5% его 20 замораживают путем погружения флаконов в жидкий азот. Скорость снижения температуры 280-320 С-мин . Отогрев мицелия проводят в водяной бане со скоростью 60-80°С-мин . Мицелий пе- 25 ресевают на свежую культуральную среду для определения скорости роста и жизнеспособности материала.

П р и м е р 2. Мицелий высшего базидиального гриба P.ostreatus штамм 30 ИБК-540 из коллекции Института ботаники им.Н.Г.Холодного АН УССР культивируют на плотной питательной среде на протяжении 7 сут, затем дегидратируют над CaClj. в вакуумном эксикаторе при 5 и 7,5 С на протяжении В сут. При достижении влажности 13% проводят замораживание мицелия путем прямого погружения в жидкий азот.

35

режимам, описанным в примерах 1 и 3 и в дальнейшем хранившаяся при +4 С.

Скорость роста двух штаммов базидиального гриба Pleurotus ostreatus (lacq. Fr) Kummer после криоконсер- вации с использованием предлагаемого способа приведена в табл.1.

Сравнение жизнеспособности мице- ЛИЯ штаммов базидиомицета Р.ostrea- tus после криоконсервации по предлагаемому и известному способам дано в табл.2.

Как следует й$ табл.1, наилучшие результаты получают при криоконсерва ции мицелиальной массы штаммов ШВЕ- 1300 и ИБК-540, которые перед погружением S азот дегидратируют до влажности 10% при 5 и 7,5°С. Скорость роста этих двух штаммов после консер вации мало отличается от контроля.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет поддерживать длительСкорость замораживания 290-340 С-миьГ.. 40 ное время высокую жизнеспособность Размораживание проводят со скомицелиальной массы базидиальных. гри бов, а также упростить процедуры криоконсервации по сравнению с изве стным способом.

ростью 20-30 С-мин в воздушном термостате при 37-40 С. После полного отогрева мицелий высевают на свежую культуральную среду для определения его жизнеспособности.

Примерз. Проводят исследования влияния режимов консервации на жизнеспособность и скорость роста базидиального гриба P.ostreatus штаммов HMBF-1300 и ИБК-540, культивируемых йа жидкой питательной среде на протяжении 7 сут. Избыток среды удаляют декантированием)После чего мицелий дегидратируют над CaClj при

5, 7,5 и 15°С в вакуумном эксикаторе. При влажности мицелия 10% проводят замораживание со скоростью 300 - 320°С МИН до -196°С, Отогрев проводят со скоростью 40-50°С мин в водяной бане при 38-40°С. После отогрева мицелий высевают на такую же культу- ральную среду для определения его

Контролем 1 для всех примеров яв- тельных средах, которую хранят при +4°С, а контролем 2 - мицелиальная масса, дегидратирования аналогично

ляется мицелиальная масса тех же двух штаммов базидиального гриба, культивируемая, на твердой или жидкой пита05

0

5

режимам, описанным в примерах 1 и 3 и в дальнейшем хранившаяся при +4 С.

Скорость роста двух штаммов базидиального гриба Pleurotus ostreatus (lacq. Fr) Kummer после криоконсер- вации с использованием предлагаемого способа приведена в табл.1.

Сравнение жизнеспособности мице- ЛИЯ штаммов базидиомицета Р.ostrea- tus после криоконсервации по предлагаемому и известному способам дано в табл.2.

Как следует й$ табл.1, наилучшие результаты получают при криоконсерва ции мицелиальной массы штаммов ШВЕ- 1300 и ИБК-540, которые перед погружением S азот дегидратируют до влажности 10% при 5 и 7,5°С. Скорость роста этих двух штаммов после консервации мало отличается от контроля.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет поддерживать длительное время высокую жизнеспособность

мицелиальной массы базидиальных. грибов, а также упростить процедуры криоконсервации по сравнению с известным способом.

Формулаизобретения

Способ консервации мицелия макро- грибов, предусматривающий его погружение в жидкий азот, отличающийся тем, что, с целью . повьшения жизнеспособности грибов в процессе хранения, перед погружением в жидкий азот мицелий грибов подвергают дегидратации при 5-15 С до содержания влаги 5-15%.

Таблица I

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, в частности к технологии хранения чистых культур, а именно мицелия макрогрибов. Целью изобретения является повышение жизнеспособности грибов в процессе хранения. Способ заключается в следующем. Мицелий макрогрибов подвергают дегидратации при температуре 5-J5 c до влажности 5-J5%, затем погружают в жидкий азот. 2 табл.

Без обработки (контроль 1)

Дегидратированный до влажности 10% (контроль 2)

После дегидратации и замороженный до -196°С, дегидрата- ция

при +5° С

при +7,5° С

при И5°С

Этапы технологии

Мицелиальная масса

без обработки (общий роль)

дегидратированная до ности 10%

Инкубация с криопротекторами

Программное замораживание до -35° С

Криоконсервация при -196 Си хранение в жидком азоте на протяжении

1 сут

30 сут

6,5±0,3 5,9JbO,7

6,3±0,2 6,6tO,4 5,9±0,7

Таблица 2 Жизнеспособность, %, по способу

540

известному

т;

ИМВР-1300 ИБК-540

100

100

100

100

Не предусматривает 98 97

Не предусматривает

98

97

100 100

98 98

97 97

Жизнеспособность, %, по способу

Этшш тахволопш

предлагаемому

И fflF-IЗOO

270 сут 2 лет

Продолжение табл.2

известному

ИВК-540

HbfBF-1300

|иВК-540

100 100

96 95

96 95