Способ диагностики псориаза Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со о

о

СП

О)

Изобретение относится к медицине, в частности к дерматологии, и может быть использовано для диагностики псориаза.

Цель изобретения - снижение трав- матичности и повышение точности способа за счет определения содержания полиаминов в суточной моче больного

Пример 1.Из суточной мочи больного В. (1250 stn) 3 мл наливают в , добавляют равный объем 6 н. НС1, заливают ампулу и содержимое подвергают гидролизу в течение 16 ч в термостате с температурой 120°С. Параллельно обрабатывают две пробы и соответствующие контрольные пробы с мочой здоровых людей и пробу с . После гидролиза пробы обрабатывают 3 мл н-бутанола, интенсивно встряхивают и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин. Нижнюю водную фракщтю количественно переносят в бюкс и содержимое при помощи сначала 10 н. NaOH, а затем 0,1 Hi, NaOH доводят рН до 10. Добавляют 6 мл н-бутанола и 2 г солевой смеси и встряхивают пробы в течение 2 ч на шюттель-аппарате. Затем пробы переносят в пробирку и центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/ми Отбирают при помощи шприца количественно верхнюю бутаноловую фракцию, переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н. НС1 и выпаривают бутанол на водяной бане, ток растворяют в 0,2 мл В небольшой части этого ределяют количественное полиаминов методом электрофореза на бумаге.

. Сухой оста- 0,1 н. НС1. раствора оп- содержание

Дпя этого 20 мкл полученного раствора переносят при помоищ микропипетки на полосу хроматографической бумаги (FN-I, Niederschlag, ГДР или Ленинградская быстрая) размером 4 см х X 40 см, помещенную предварительно В прибор для электрофореза.

Электрофорез проводят в лимоннокислом буфере рН 3,6 при напряжении 480 Б и силе тока 50-100 мА в течение 40 мин. Электрофореграммы затем высушивают в термостате при , обрабатывают нингидриновым красителем (ацетат кадмия, ацетон, нингидрин, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода), помещают в термостат с температурой 70 С на 20 мин, для проявления окраски. Поли

амины обнаруживают на электрофоре- грамме в виде розовато-фиолетовых пятен. Для идентификации на электро- фореграмме пятен, соответствующих путресцину, спермидину и спермину в исследуемой моче, сравнивают профиль пятен с электрофореграммой стандартных полиаминов. Окрашенные пятна, соответствующие индивидуальным полиаминам, вырезают, мелко нарезают, помещают в пробирки и заливают 5 мл элюирующего раствора (ацетат кадмия, этанол, концентрированная уксусная кислота, дистиллированная вода). Пробирки затем ставят в темное место на 5 мин. Измерение величины поглощения раствора производят на спектрофотометре при длине волны 505 нм. При расчете количества полиаминов учитывают указанные разведения, а также возможные примеси любых аминов в реактивах, дпя чего проводят контрольный опыт с дистиллированной водой. Относительная ошибка определения

S7

/о .

Концентрацию полиаминов, содержащуюся в 20 мкл нанесенной на электро- фореграмму жидкости, рассчитывают по

калибровочным графикам, построенным для каждого амина на спектрофотометре и вьфажают в миллиграммах в суточной моче.

Расчет концентрации индивидуаль35 ных полиаминов в суточной моче производят по формуле

3

X Q

(1)

где А - количество полиаминов в суточной моче;

а - определенная по калибровочному графику концентрация полиамина в 20 мкл жидкости, использованной для электрофореза, мкг;

Q - суточный объем мочи, мл; 3 - количество миллилитров мочи,

взятое для анализа. Расчет содержания полиаминов в суточной моче.

Отсчеты на спектрофотометре, соответствующие отдельным фракциям полиаминов, равны путресцина 0,476, спермидина 0,162 и спермина 0,075. По калибровочному графику находят, что эти данные оптической плотности соответствуют 4,8 мкг путресцина, 2,0 мкг спермидина и 0,87 мкг спер

мина. Умножают эти числа на 10, поскольку сухой остаток растворяют в 0,2 мл, а на электрофоретическую бумагу наносят 20 мкл. Полуг1енные цифры соответствуют содержанию полиаминов в 3 мл мочи, взятой для анализа. Рассчитывают содержание фракций полиаминов в суточной моче (объем мочи у данного больного составлял 1250 мл) по формуле (1): путресцин i 20,0 мг; спермидин 8,4 мг; спермин 3,6 мг.

, 47 лет, Обост- прог

Суммарное содержание полиаминов в суточной моче больного В. составляет 32,0 мг, что соответствует диагнозу псориаз.

П р и м е р 2. Больной Н Болеет несколько лет (5-6). рение около 2-х месяцев; рессирующая стадия болезни.

Процесс характеризуется не обильными высьтаниями папулезных элементо с локализацией на верхних и нижних конечностях. Папулы розоватого цвета овальных очертаний с серебристо-белыми чешуйкаки на поверхности, размером до 2-х копеечной монеты. По периферии папул-венчик гиперемии.

0

5

0

5 Q

Отмечается появление свежих высыпаний, положительный феномен Кёбнера, псориатическая триада. Исходная концентрация полиаминов в суточной моче - 15,72 мг.

На 6-7-й день лечения появления свежих высыпных элементов не отмечается. Отсутствует венчик гиперемии по периферии.

Использование предложенного способа в медицинской практике позволит повысить точность диагностики псориаза в 2-3 раза по сравнению с известным. Способ прост в исполнении, время проведения анализа сокращено с 72 до 38 ч.

Формула изобретения

Способ диагностики псориаза путем клинического обследования и определения содержания полиаминов в биологической жидкости больного, отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности и повышения точности способа, определение проводят в суточной моче и при уровне 15 мг и более диагностируют псориаз.