Средство для определения @ - @ -Галактозидазы Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

со со со

со ГчЭ ГО

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам для определения энзимов, в частности к средству для определения /5-П-галактозидазы.

Цель изобретения - повышение чувствительности средства - достигается тем, что предлагаемое средство, содержащее активное вещество и водный буферный раствор с величиной рИ 3,5- 8,5, в качестве активного вещества содержит соединение общей формулы

3222

Приведенные в табл.1 новые соединения получают способами, известными из химии углеводородов.

Так например, их можно получать за счет того, что соединение общей формулы

(II)

15

в которой ,

20 значения.

имеют указанные подвергают взаимодействию

с соединением общей формулы

Изобретение относится к медицине, точнее к средствам для определения .энзимов, в частности p-D-ra- лактозидазы. Цель изобретения - повышение чувствительности средства - достигается тем, что средство, содержащее активное вещество (0,001-5) И водный буферный р-р с рН 3,5-3,8 (до 1 мл), в качестве активного вещества содержит соединение, включающее следующие компоненты: водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппу, дополнительную аминогруппу, алкил или метоксигруппу, галоген, гидрокси- и/или карбоксильную группы, протон, ион лития, натрия, кальция, тетраметиламмония, трибеизил- аммония или бензилдиэтиламмония4 табл, СП

де RI, R

R,

RS, К0

водород, фтор, хлор, бром или нитрогруппа; как R.f или дополнительно аминогруппа; водород, фтор, хлор, бром;

водород, хлор, бром, С ,-С 5-алкил или мето- ксигруппа; t fo водород, галоген,

С -С j-алкил, нитрогруппа, гидроксильная, карбоксильная или ме- токсильная группа; водород, хлор, бром, С 1-е 5-алкил или мето- ксигруппа; водород, иод, хлор, бром, .-алкил, нитрогруппа; М - лротон, ион лития,

натрия, кальция, тет- раметиламмония, три- бензиламмония или бензилдизтиламмония при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Соединение формулы (1) 0,001-5 Водный буферный раствор рН 3,5-8,5 До 1 мл

R,

R-,. R

17

11

Предлагаемое средство получают путем смешивания активного ве1чества с водным буферным раствором в указанном соотношении.

„ ..С Н130/-0.

F)

Л

OR 13

(III)

0

5

0

5

0

5

группы

в химии

обычно

углегде X - галоген; R - защитные

применяемые водородов,

с последующим удалением защитных групп известными приемами.

Пример 1. 1000 мкл водного оксиэтилпиперазинэтансульфокислого буфера с рН 7, содержащего 0,001 или 0,1 мае.% указанного в табл.2 активного вещества, смешивают с 35 мкл водного раствора / -В-галактозидазь. из E.coli (0,08 ед/мл) и при фотометрическим путем определяют при 578 нм активность средства за счет измерения изменения миллиэкстинкции в минуту ( 1 мэкс/мин) . При этом ход процесса характеризуется окраской в красный или красно-фиолетовый (согласно изобретению) или в желтый (согласно прототипу) цвет, рая становится все интенсивнее. В сравнительном опыте используют средство, содержащее в качестве активного вещества соответствуюр(ий п-нитрофе- нил- (b-D-галактозид, фотометрическое изменение осуществляют при А05 нм.

Результаты опытов сведены в табл.2.

Сравнение данных по мзкс/мин свидетельствует о том, что предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень определения /ь-В-гала тозидазы, чем известное средство,

П р и м е р 2, Повторяют пример 1 с той разницей, что используют 1000 мкл водного раствора натриево- фосфатного буфера с рН 8,5, содержащего 1 или 5 мас.% указанного в табл.3 активного вещества.

Результаты опытов сведены в табл

Сравнение данных табл.3 свидетельствует о том, что и при более высоком содержании в средстве активного вещества предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень определения /ъ-В-галактозидазы, чем известное средство.

II р и м е р 3. Повторяют пример 1 с той разницей, что используют водный -буферный раствор с рН 3,5 ил 4,О,содержащий 0,5 мас,% указанного в табл.4 активного вещества. При этом в случае рН 3,5 используют /ь-D-галактозидазу из бобов (опыт I а в случае рН 4,0 - из AspergiHus niger (опыт II).

Результаты опытов сведены в табл.4.

Сравнение данных табл.4 свидетельствует о том, что и при исполь- зовании средства с буферным раствором с кислой величиной рН предлагаемое средство обеспечивает более высокую степень определения энзима, чем известное средство.

Формула изобретени

Средство для определения )5- -D- галактозидазы, содержащее активное вещество и водный буферный раствор, отличающееся тем, что, с целью повьшения чувствительности средства, в качестве активного вещества используют соединение общей

снгон

де R. и К.

R.

Rj и Kg

R, и к

10

R2

-водород, фтор, хлор,

бром или нитрогруппа}

-как R или дополнительно аминогруппа;

-водород, фтор, хлор, бром;

-водород, хлор, бром, -алкил или метоксигруппа;

-водород, галоген.

К Q и К

С -С5-алкил, нитрогруппа, гидроксиль- ная, карбоксильная или метоксильная группа;

водород, хлор, бром, С ,-С 5-алкил или метоксигруппа;

R-, и 1Ц, - водород, иод, хлор, бром, С -Сд-алкил, нитрогруппа;

М - протон, ион лдития, натрия, кальция, тетраметиламмония трибензиламмония или бензилдиэтиламмония,

ри следующем соотношении компоненте

он, мас.%:

Соединение указанной формулы0,001-5 Водный буферный раствор рН 3,5-8,5 До 1 мл.

т а в л н ц а 1

ЯМР eOOjJ - it): 3,1-3,9 (м.бН), 4,1-5,3 (к,4Н), 4,95 (n,J 7 ГЦ, IH), 6,2-6,6 (м,1Н)6,8-7,6 (м, 8Н), 7,8-8,0 (м, 1И).

Таблица2

& МЭКС/МИН при 0,001/0,1 мас,%

2

65/66 68/70 66/68 68/70 70/72 71/72 52/54 74/75 76/79 85/88

Пр одолже ние та бл.2

1

XI

XII

XIH

XIY

XY

XYI

XYII

XYIII

XIX

XX

XXI

XXII

80/83

88/90

105/106

98/101

102/105

123/124

118/119

102/104

115/116

98/100

96/99

120/121

Продолжение табл.2

Продолжение табл.3