Способ получения производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров Советский патент 1990 года по МПК C07D265/38 A61K31/538 

Изобретение относится к способу получения новых производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров, которые являются исходными соединениями для получения новых производных гликозидсодержащего резазурина или

резоруфина, которые находят примене- качестве средства для обнаружения гликозидаз.

Целью изобретения является создание новых полупродуктов для синтеза

о

новых индикаторных ферментов для обнаружения гликозидаз на основе производных гликозидсодержагоего реэаэу- рина или резоруфина, обладающих по- вышенной эффективностью.

Пример 1. Метиловый эфир резоруфин-1-карбоновой кислоты.

5б г нитрозорезорцина,53,3 г метилового эфира 3,5-диоксибензойной кисло- ты и 28,0 г пиролюзита смешивают с 500 мл метанола. При охлаждении льдом при С прикапывают 34,3 мл концентрированной серной кислоты. После удаления ледяной бани продол- жают перемешивать епте 2 ч. Затем при охлаждении добавляют 200 мл водного раствора аммиака. Выпавший осадок отфильтровывают через стеклянный Фильтр. К фильтрату добавляют порция- ми при 5-10 С 10 г цинкового порошка. При комнатной температуре перемешивают до окончания процесса восстановления (контроль с помощью тонкослойной хроматографии, уксусный эфир:ме- танол 4:1 в качестве растворителя, аремя реакции 1,5 ч). На ротационном испарителе при температуре бани 25°С концентрируют до 1/3 объема. Путем подкисления концентрированной соляной кислотой до изменения окраски и высушивания в вакууме над хлоридом кальция получают метиловый эфир резоруфин-1-карбоновой кислоты. Выход 30,9 г (30% от теории). ( ДМСО), а : 3,98 (синглет,ЗН), 6, (дуплет, J 2,2 Гц, 1Н){ 6,85-6,95 (мультиплет, 2HJ; 7,09 (дуплет, J « 2,2 Гц,1Н); 7,60 (дуплет, J 9,6 Гц

1Н).

Флуоресценция при абсорбпии макс Ь70 нм, при эмиссии дшкс 588 нм.

Аналогичным образом получают следующие производные резоруфина:

резоруФин-1-карбоновая кислота с УО (видимая область, 0,1 м калиево- фосфатный буфер, рН 7,5) Л ма)с - 569 нм;

метиловый эФир-4-метоксирезору- фин-1-карбоновой кислоты с УФ (видимая область, 0,1 F калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) 7k мако 592 нм, метиловый эфир 8-бром-4-метокси- резоруФин-1-карбоновой кислоты с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-фос- фатный буфер, рН 7,5)/XMOIKC 569 HM

метиловый эфир 8-бром-4-метокси резоруфин-t-карбоновой кислоты с УФ

,

JQ15 - 20 . 2530рд ц,

40

, - MJ

5741734

(видимая область, 0,1 N калиево-Фос- фатный буфер, рН 7 ,5) л,акс 588 нм

1-нитрорезоруфин с УФ (видимая область, 0,1 У калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) Л макс 578 нм,

резоруфин-1-сульфокислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-фосфатный буфер, рН 7 ,5) 7i М0цсе 570 нм;

1-метилрезоруфин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,2 М калиево-фосфатлый буфер, рН 7,5) ллсис 571 нм1,

морФолидрезоруфин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-фосфатный- буфер, рН 7,7) мане- 575 нм.

ЯМР- н( - ДМСО), о : 3,3-3,8 (мультиплет, 8Н); 6,50 (дуплет, J 2 Гц, 1Н), 6,64 (дуплет, J 10 Гц, 1Н); 6,76 (двойной дуплет, J 10 и 2 Гц, 1Н); 7,44 и 7,51 (каждый раз дуплет, J 10 Гц, 2Н).

Пример 2. Резоруфин-4-кар- боновая кислота.

1,60 г (10,5 ммоль) нитрозорезорцина, 1,55 г (10,0 ммоль) 2,6-диок- сибензойной кислоты и 0,86 г (10 ммоль)

35

45

50

55

пиролюзита поглощают в 20 мл метанола и охлаждают до О С. К получаемой так&м образом смеси прикапывают 1,06 мл концентрированной серной кислоты. Продолжают перемешивать еще 2 ч без охлаждения. Выпавший осадок красного цвета отфильтровывают, промывают метанолом и высушивают. Выход 2,3 г (85% от теории). УФ (видимая область, 0,1 М калиево- фосфатный буфер, рН 7,5) макс 614 нм (5 48 см ), после2 подкисления макс 522 нм (Ј 32 см х х ) .

Пример 3. Резоруфин-4-карбо- новая кислота.

2,3 г резоруфин-4-карбоновой кислоты, полученной по примеру 2 растворяют в 20 мл воды и 5 мл 25%-ного аммиака. К раствору синего цвета при охлаждении льдом добавляют 5 г цинковой пыли, а затем удаляют охлаждение льдом, так что раствор постепенно нагревается до комнатной температуры. За восстановлением можно легко следить по изменению окраски от синей до темно-фиолетовой и с помощью тонкослойной хроматографии (растворитель: метанол/уксусный эфир, 1:1). Избыточный цинковый порошок отфильтровывают. Реакционный раствор подкисляют

5 мл ледяной уксусной кислоты и концентрированной соляной кислоты.Осадив- шийся продукт отфильтровывают, промывают разбавленной соляной кислотой и высушивают в вакууме над хлоридом кальция. Выход 1,8 г (82% от теории), УФ (видимая область, 0,1 У калиево- фосфэтный буфер, рН 7,5): А макс 579,4 нм ( Ј 48,6 см моль 1 );

после подкисления макс 485,9 нм, (Ј 34, 7 см2 ) .

Пример 4. 8-Хлоррезазурин- -4-карбоновая кислота.

1,83 г 4-хлор-6-нитрозорезорцина, 1,56 г 2,6-диоксибензойной кислоты, 0,86 г пиролюзита и 1,06 мл серной кислоты подают в 20 мл метанола и перемешивают 2 ч при 0°С, а также

14 ч при комнатной температуре. Получают осадок красного цвета, который отфильтровывают и высушивают.

Выход искомого продукта 2,45 г (80% от теории). УФ (видимая область 0,1 N калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) мокс 621 ,5 нм.

Аналогичным образом получают следующие соединения:

6-Метилрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) мам 612 нм,

8-метилрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 М калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) макс 618 Mi

I

8-бромрезазурин-4-карбоновая кислота с УФ (видимая область, 0,1 У. калиево-фосфатный буфер, рН 7,5) макс 609 нм.

Пример 5. 8-хлоррезоруфин- -4-карбоновая кислота.

2г 8-хлоррезазурин-4-карбоновой кислоты, полученной по примеру 4, растворяют в 20 мл воды и 5 мл 25%- ного аммиака. При охлаждении льдом добавляют цинковый порошок, вплоть

до полного изменения окраски до красно-фиолетового цвета. Избыточный цинк отфильтровывают. После подкисления продукт отфильтровывают и высушивают в вакууме при 40 С над хлоридом кальция. Выход искомого продукта 1,5 г (79% от теории). УФ (щадимая область, 0,1 М кэлиево-фосфатный буфер, рН 7,5) Ъ макс 585,5 нм.

Аналогично примерам 1-5 получают еще соединения, сведенные в таблице..

Структура и спектры производных резазурина или резоруФина в виде та- утомеров формулы (I) приведены в таблице.

Формула изобретения Способ получения производных ре- 1 зазурина или резоруФина в виде тау- томеров общих формул

10

R

15

v U)

20

5

где

4иВ К9иК4

водород,галоген,

0

5

С,-С5-эл- кил, С -Сд-алкоксикарбо- нил, СЧ-С -алкоксил или карбоксил; водород, галоген или

алкил

водород, галоген, кил, С,-С5-алкоксикарбонил, С,,-С5-алкоксигруппа, каРбо ксигруппа или СО-морФоли- ногруппаЈ

водород, галоген, карбоксил, С1-С5-алкил, С1-С5-алкокси- карбонил, С,-С5-алкоксигруп- па, нитрогрупга, сульфогруп- па или группа формулы

-СО

-0-С,4Р4-ОС Н5 или

0

Y о т л и ч

-со-ин-(с4ну),

азот или группа N0, причем радикалы одновременно не водород, если Y - азот, а ю щ и и с я тем, что сое

динение общей формулы 1

к

(II)

50

где R,,-R3 имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы

55

(III)

где имеют указанные значения,

в присутствии пиролюзита и серной кислоты в спиртовой среде при температуре от 0ЙС до комнатной с получением целевого продукта общих формул (I) , где Y - группа N0, или его обрабатывают

порошкообразным цинком в водной среде в присутствии аммиака при температуре от 0°С до комнатной с получением целевого продукта общих формул (I), где Y - азот.

Изобретение касается гетероциклических соединений и, в частности, способа получения производных резазурина или резоруфина в виде таутомеров общих формул @ где R₁ - H, галоген, C₁-C₅-алкил, C₁-C₅-алкоксикарбонил или C₁-C₅-алкоксил

R₂ и R₅-H, галоген или C₁-C₅-алкил, R₃ и R₄ - H, галоген, C₁-C₅-алкил, C₁-C₅-алкоксикарбонил, C₁-C₅-алкоксигруппа, карбоксигруппа или CO-морфолиногруппа

R₆ - H, галоген, карбоксил, C₁-C₅-алкил, C₁-C₅-алкоксикарбонил, C₁-C₅-алкоксигруппа, NO₂, сульфогруппа или группа формулы - C(O)O-C₂H₄-O-C₂H₄-OC₂H₅ или -C(O)-NH(C₂H₅)

Y - азот или группа NO, причем все радикалы от R₁ до R₆ одновременно не водород, если Y - азот, - полупродуктов для синтеза новых индикаторных ферментов для обнаружения гликозидаз. Цель изобретения - создание новых полупродуктов для синтеза новых активных веществ. Синтез целевых веществ ведут реакцией соединений общих формул R₁C=C(NO)-C(OH)=CR₃-C(OH)=CR₂ и R₆C=CR₅-C(OH)=CR₄-C(OH)=CH, где R₁-R₆ - см.выше, в присутствии пиролюзита и серной кислоты в спиртовой среде при 0-20°С. Целевой продукт выделяют непосредственно при Y - группа NO, или его обрабатывают порошкообразным ZN в водной среде в присутствии NH₃ при 0-20°С с выделением целевого продукта при Y - азот. Способ позволяет получать целевые продукты с выходом 30-85%. 1 табл.

УФ (ввдимая область; калиево-фосфатный буфер с рН 7,5).