Изобретение относится к получению D-глюкозы, меченной тритием в положении 1, которая находит широкое применение в биохимии, а также используется в качестве исходного тритийсодержащего реагента в синтезе различных меченных тритием производных D-глюкозы, олигосахаридов, полисахаридов, глюкозидов и других биологически активных соединений.
Цель изобретения - повышение молярной активности D-(1-3H) глюкозы.
Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.
П р и м е р 1. 4,5 мг (25 мкмоль) D-глюкозы растворяют в 0,5 мл 0,1 М боратного буфера, рН 8,1. В раствор вносят 50 мг окиси палладия, осажденной на окиси алюминия, с массовой долей Pd 5%. Смесь перемешивают магнитной мешалкой в атмосфере 3H2 при давлении 0,1 МПа при комнатной температуре в течение 5 ч. По окончании реакции изотопного обмена отфильтровывают катализатор, пpомывают его водой (2х3 мл). Фильтрат и промывные воды объединяют и обрабатывают 3 мл смолы Дауэкс 1˙8 в ОН-форме.
Смолу отделяют на фильтре Шотта и промывают водой (2 х 3 мл).
В объединенных фильтрате и промывных водах определяют массовую концентрацию D-(1-3H)глюкозы, объемную активность и радиохимическую чистоту меченного соединения.
Определение массовой концентрации D-(1-3H)глюкозы, основанное на цветной реакции с орто-толуидиновым реагентом, проводят по методике, описанной в работе (А.И.Усов, С.В..Яроцкий. Известия АН СССР, сер.хим., 1964, т.4, с.877).
Молярную активность D-(1-3H)глюкозы вычисляют на основании известных величин объемной активности раствора и массовой концентрации по формуле
Aмол= 
M, где М - молекулярная масса D-глюкозы,
Амол D(1-3H)глюкозы 740 ТБк/моль (20 кКн/моль).
Радиохимическую чистоту D-(1-3H)глюкозы определяют с помощью тонкослойной хроматографии на силуфоле в системах растворителей А : диоксанаммиак-вода (6: 1: 4), Rf 0,55±0,02; Б: бутанол-уксусная кислота-вода (5:2:3), Rf 0,42±0,02.
Радиохимическая чистота не менее 95%. Выход 80%.
П р и м е р 2. В том случае, когда радиохимическая чистота D-(1-3H)глюкозы, полученной способом, описанным в примере 1, менее 95%, проводят очистку целевого продукта от радиохимических примесей с помощью хроматографии на колонке размерами 1100 х 17 мм со смолой Дауэкс 50W˙2 в К+-форме.
Раствор D-(1-3H)глюкозы упаривают на ротационном испарителе при 40оС до объема 1 мл и вносят в колонку. После впитывания раствора проводят элюирование водой со скоростью 0,96 мл/мин, осуществляя контроль элюата по радиоактивности. Собирают фракцию D-(1-3H)глюкозы, освобожденной от радиохимических примесей, в объеме 115-165 м.
Определяют молярную активность и радиохимическую чистоту D-(1-3H)глюкозы, как описано в примере 1.
Выход после хроматографической очистки 80-90%.
Таким образом, предложенный способ получения D-(1-3H)глюкозы позволяет повысить молярную активность целевого продукта по сравнению со способом-прототипом в 4-5 раз.
Повышение молярной активности D-(1-3H) глюкозы существенно увеличивает чувствительность, точность и эффективность биохимических исследований за счет уменьшения количества используемого меченого препарата.
Изобретение касается меченных тритием кислородсодержащих веществ, в частности получения D-(1-3H) глюкозы, и может быть использовано в биохимии. Цель - повышение молярной активности целевого продукта. Его синтез ведут обработкой D-глюкозы газообразным тритием на Pd-катализаторе в боратном буферном растворе с последующим пропусканием смеси с боратным комплексом D-(1-3H) глюкозы через анионит в OH- - форме. Способ позволяет повысить в 2 - 10 раз молярную активность целевого продукта, что в свою очередь увеличивает чувствительность, точность и эффективность биохимических исследований.
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ D-(1-*993HГЛЮКОЗЫ), включающий гетерогенный изотопный обмен D-глюкозы с газообразным тритием на палладиевом катализаторе в буферном растворе, отличающийся тем, что, с целью повышения молярной активности целевого продукта, изотопный обмен ведут в боратном буферном растворе с последующей обработкой реакционной смеси, содержащей полученный меченый боратный комплекс D-(1-3H) глюкозы, анионитом в OH- форме.
| E.A.Evans, H.C.Sheppard, J.C.Turner, D.C.Warrell | |||
| A new approach to specific | |||
| labelling of organic compounds with tritiums catalysed exchange in solution with tritium gas | |||
| - J.Labelled Compounds, 1974, v.10, N 4, p.569-587. |
