Штамм бактерий RноDовастеR SрнаеRоIDеS-продуцент убихинона Q @ Советский патент 1988 года по МПК C12N15/00 

4

О Од

ф

00

л-

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к штаммам, используемым для биосинтеза убихинона Q ,0

Цель изобретения - получение ново го штамма, обладающего повьшенной биосинтетичебкой активностью.

Для получения такого штамма исходный дикий штамм Rhodobacter sphaeroi- des 2R обрабатывают нитрозогуанидином с последующей селекцией клонов с пониженной скоростью роста в условиях азотфиксации.

Штамм Rhodobacter sphaeroides 2R № 122 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером 1593Д и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физи- олого-биохимическими признаками.

На агаризованной (1,2% Difco-arap) безазотистой среде через 5 сут культивирования образует мелкие светЛо- розовые сзгхие колонии правильной округлой формы диаметром 0,7-1,0 мм, , на среде со связанньш а зотом - колонии сухие красной окраски диаметром 2-3 мм.

Клетки представляют собой короткие палочки, не отличающиеся от клеток дикого типа.

Относится к группе грамотрицатель- ных бактерий.

Факультативный анаэроб.

Способен к азотфиксации.

Имеет активную нитрогеназу при инкубировании на среде, содержащей (NH4)2S04.

Отношение к источникам углерода: используют малат Na, лактат Na, глюкозу.

Отношение к источникам азота: хорошо усваивает (NH4) аминокислоты: глутамин, аланин, пролин, глута- мат.

Оптимальные условия роста: температура 30-32°С, освещенность 1500- 2000 лк, рН .7,0.

На.среде Ormedor при росте на свету при через 72 ч инкубирования концентрация клеток составляет 2-4 X 10 клеток на 1 мл.

Для выращивания штамма Rhodobacte sphaeroides 2RN ,122 используется среда Ormerod следующего состава, г/л

MgS04-7H O 0,200

CaCli 2HiO 0,075

5

20

.-

.

25

30

5

40

х

r :

50

FeS04 7HzO0,011

ЕДТА0,020

Микроэлементы1 мд

,900

KHjPO 0,600

(NH4)jS041,250

d51-мaлaт Na4-6

Витамины1 мл

Состав микроэлементов, г/л:

H BOa2,860

ZnS04 7HiO .0,240

Си(КОз)г- ЗНгО0,040 .

MnS04 4Н,0 2,100

,200,750

Состав витаминов, мкг/л:

Биотин100

Никотиновая кислота 100

Тиамин100

I

Ц р и м е р 1. Для получения штамма трехсуточную культуру бактерий Rhodobacter sphaeroides 2R (2 -10 кл/ /мл) отмьшают от культуральной жидкости и ресуспендируют в 0,01 М К- фосфатном буфере, рН 6,8. Затем к суспензии добавляют нитрозогуанидин до конечной концентрации 100 мкг/мл и вьщерживают при комнатной температуре в темноте в течение 60 мин. Отмытые от мутагена клетки высевают в жидкую среду с 0,125% сульфата аммония и инкубируют на свету в течение 3 сут. Для истощения внутриклеточного фонда источников азота клетки отмывают и выдерживают 1 сут в безазотистой среде. С целью обогащения популяции мутантами суспензию клеток инкубируют 20 ч с пенициллином (2 мг/ /мл), затем высевают на агаризованную среду с 0,01% (Ш)804И подращивают в условиях азотфиксации - в атмосфере N при освещенности 1500- 2000 лк. Через 8-10 сут выделяют мелкие колонии диам етром 0,1-0,5 мм и проверяют эти клоны на способность к росту в среде без источников связанного азота и на средах с 0,125% (N114)-2.SO4 с 10 мМ глутамата натрия, ,10 мМ глутамина, аланина, пролина.

П р и м е р 2. Для получения биомассы, содержащей убихинон Q , в качестве посевного материала используют 4-суточную культуру, выращенную на агаризованной среде. Клетки выращивают на жидкой среде при 30-32 С и освещении 1500 лк до стационарной стадии роста.

314061634

По сравнению с исходным выход це-Формула изобретения левого продукта, обеспечиваемый штаммом 2R № 122, составляет 6,9 мг наШтамм бактерий Rhodobacter aphae1 г сухгос клеток против 2,4 мг/г со-roides ВКМ В-1593Д - продуцент убихиответственно.нона Q .

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к штаммам для биосинтеза убихино- на . Целью изобретения является, получение нового штамма - продуцента убихинона, обладающего повьппенной биосинтетической активностью. Штамм 2R № 122 получают после обработки клеток Rhodobacter sphaeroidas 2R нитрозогуанидином с последующей селекцией клонов с пониженной скоростью роста в условиях азотфиксадии. Ну- тантный штамм обеспечивает выход целевого продукта в количестве 6,9 мг на 1 г сухих клеток, что вдвое превышает продуктивность исходного штамма. i (Л