Способ определения устойчивости растений к вирусу желтой мозаики фасоли Советский патент 1988 года по МПК A01H1/04 

IИзобретение относится к сельскому : :озяйству и может быть использовано

IIселекции сельскохозяйственных растений на иммунитет.

Цель изобретения - ускорение и 5 прощение способа.

Пример, Растения гороха в ijospacTe 4-6 недель двух различных по устойчивости к вирусу желтой мо- EiaHKH фасоли сортов Рамонский (вос- гриимчивый) и Перфекшн. (иьмунный) выдерживают в темноте не менее 24 ч. 1истья с растений измельчают в ступке или гомогенизаторе в среде следующего составаS г/л: сорбит 66, Иерез 11,92, ЭДТА 0,756, MgCl , ИаС1 бычий сывороточный альбумин 1-5 рН 7 ,,8, Соотношение листьев и среды 1г10„ Все операции выполняют при 4 Со. Гомогенат фильтруют через два слоя капрона или нейлона и центрифугируют при 3000 об/мин. Осадок хпоропластов ресуспендируют в среде вьделения мягкой кисточкой в 1/5 or первоначального объема среды и еце раз осаждают при тех же условиях Рвсуспендируют в том же объеме среды в:ьщеления без альбумина Определяют сэдержание хлорофилла в суспензии х.1оропластов по Арнону и доводят его &зедой до 60 мкг/мл. Затем суспензию х-юропластов одного сорта гороха делят пополам и в одну часть приливают С спензию вируса S в другую - равный о(5ъем раствора, в котором вирус ре- суспендирован (на 1 мл раствора берут сорбита ббуО MFj Hepes-NaOH 11,92Mrj, глицерина IjO мл рН 8,5).

Конечная концентрация вируса в c ;j cneH3HH хлоропл:астов 100 мкг/мл. 11(|)ЛУ ченные смеси инкубируют в темно- Tst в течение 2 ч при 4°С5 перемеши- вфя на магнитной мешалке, установлен- нфй на минимальной скорости. Затем зсг оропласты осаждают при 3000 об/мин и промывают один раз средой вьщеле0

5

0

5

0

5

0

5

ния без альбумина повторным центрифугированием. Определяют хлорофилл в каждой суспензии. Для определения скорости выделения кислорода содержание хлорофилла 60 мкг/мл. Скорость вьщеления кислорода определяют на полярографе ОН-105 с использованием электрода Кларка В суспензию хлоро- пластов вводят 6 мг феррицианида калия KjFeCCN) и фиксируют скорость выделения кислорода на свету (20 тыс.лк). Результаты выражают в микромолях кислорода на 1 мг хлорофилла в 1 ч. Расчет ведут, учитывая скорость вьщеления кислорода за вторую минуту от начала выделения.

Устойчивые сорта по сравнению с контролем быстрее выделяют кислород, чем хлоропласты восприимчивых.

Предложенный .способ значительно ускоряет и упрощает оценку вирусо- устойчивости при создании непоражаемых сортов и гибридов.

Формула изобретения

Способ определения устойчивости растений к вирусу желтой мозаики фасоли, включающий вьщеление изолированных хлоропластов к измерение показателей, корреляционно связанных с вирусоустойчивостью, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, в качестве показателя используют выделение хло- ропластами кислорода на свету в присутствии феррицианида калия, при зтом вьщеление изолированных хлоропластов «осуществляется с получением суспензии хлоропластов с концентрацией хлорофилла 60-120 мкг/мл, которую перед измерением инкубируют, перемешивая с очищенным вирусным препаратом с концентрацией вируса 50- 200 мкг/мл в течение 1-2 ч в темноте при 2-4 С,

Изобретение относится к сельскому хозяйству и позволяет ускорить и упростить способ. Вьщеляют изолированные хлоропласты с получением суспензии хлоропластов с концентрацией хлорофилла 60-120 мкг/мл. Суспензию инкубируют, перемешивая с очищенным вирусным препаратом с концентрацией вируса 50-200 мкг/мл в течение 1-2 ч в темноте при 2-4 С. Измеряют вьщеле- ние хлоропластами кислорода на свету в присутствии феррицианида калия. Устойчивые сорта по сравнению с контролем быстрее ввделяют кислород, чем восприимчивые к вирусу. (О