Способ получения фотосинтетически активных тилакоидных мембран хлоропластов Советский патент 1989 года по МПК C12N9/00 C12N9/98 

1 .

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения первичных продуктов фотосинтеза и экзогенных восстановителей.

Целью изобретения является повышение активности фотосинтетического аппарата хлоропластов за счет искусственного увеличения размера фотосинтетических единиц фотосистем 1.и 2.

Пример 1. Листья бобов Vicia faba L. гомогенизируют при О - +2°С в среде для выделения,

содержащей, мМ: сахароза 200; КС1 100; трис-НС 25, рН 7,9. Гомогенат пропускают через ткань (6-8 слоев батиста), чтобы отделить суспензию хлоропластов от разрушенных клеточных фрагментов, и центрифугируют при 800 g в течение 7-8 мин. Осадок, содержащий хлоропласты,ресуспенди- руют в инкубационной среде до концентрации по хлорофиллу 10 мкг/мл. Среда для инкубации содержит. мМ: сахароза 100, КС1 100; MgClg 5; трис-HCl 20, рН 7,9 и хромофор рода0-ч -Ч Ч

Ј

Нин-Б-диолеоилглицерин (РДБ) кон- Нентрации 2 мкМ. Инкубацию мембран с ЩБ проводят в темноте на холоду в течение 30 мин на магнитной мешалке. После этого мембраны отмывают от остатков хромофора в буферной среде, центрифугируют при 800 g и ресуспен- дируют в инкубационной среде без хромофора. Снимают спектры абсорбции и спектры флуоресценции полученной суспензии хлоропластов. В присутст- ствии РДБ на спектрах абсорбции ти- л коидных мембран появляется дополнительный максимум в области 560 нм, в три раза превышающий уровень абсорбции контрольных мембран. На спектрах флуоресценции хлорофилла при возбуждении монохроматическим светом 560±5 нм интенсивность флуоресценции хлорофилла в области максимума 6&5 нм в присутствии РДБ увеличивается в 1,75-2 раза по сравнени с контролем.

Пример 2. Получают суспензию хлоропластов (пример 1) с Концентрацией хлорофилла 100 мкг/мл и РДБ 10 мкМ. Снимают индукционные кривые флуоресценции хлорофилла б-ез и со встроенным в мембраны РДБ при освещении суспензии светом с 560 t 5 нм и регистрации кинетики флуоресценции при Д 685 ± 10 нм. Анализ кривых показывает, что скорость нарастания и уровень флуорес0

5

0

5

0

5

ценции в присутствии РДБ увеличиваются в два раза по сравнению с контролем.

Пример 3. Получают суспензию хлоропластов (пример 1) с концентрацией хлорофилла 20 мкг/мл и РДБ 2 мкМ. В суспензию хлоропластов вносят 0,4 мМ феррицианида калия в качестве акцептора электронов. Суспензию освещают светом с А 5601. ± 20 нм разной интенсивности. Измеряют скорость выделения кислорода в микромолях 0 на 1 мг хлорофилла в час. Анализ кривых зависимости скорости выделения кислорода от интенсивности света показывает, что скорость выделения кислорода в присутствии РДБ в 1,5 раза выше по сравнению с контролем.

Формула изобретение

Способ получения фотосинтетически активных тилакоидных мембран хлоропластов, включающий получение суспензии хлоропластов, отделение их от клеточных элементов, отмывку в буферных растворах, отличающийся тем, что, с целью искусственного повышения фотосинтетической активности, суспензию хлоропластов дополнительно подвергают инкубированию в среде, содержащей родамин-Б- диолеоилглицерин в концентрации 2-10 мкМ.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения продуктов фотосинтеза. Целью изобретения является повышение активности фотосинтетического аппарата хлоропластов за счет искусственного увеличения размера фотосинтетических единиц фотосистем 1 и 2. Для этого хлоропласты инкубируют в среде, содержащей липидорастворимый хромофор (в частности родамин-Б-диолеоилглицерин). В процессе инкубирования молекулы хромофора встраиваются в тилакоидные мембраны хлоропластов и тем самым увеличивают перенос энергии на молекулы пигментных матриц, фотосинтетических единиц и далее - к реакционным центрам фотосинтеза.