Способ определения аминопроизводных ксантеновых красителей в их изотиоцианатах Советский патент 1988 года по МПК G01N21/64 

СХ) 00

Изобретение относится к анализу органических веществ люминесцентным способом и предназначено для определения аминопроизводных родаминов, а именно тетраэтип-4-аминородамина (4-ТЭАР) в тетраэтил-4-чзотиоциана- те родамина- (4-РИТЦ), тетраэтил-5- аминородамина (5-ТЭЛР) в тетраэтил- 5-изотиоцианате родамина(5-РИТЦ), цикло-4-аминородамина (4-ЦАР) в 4- изотиоцианате циклородамина (4-ИЦР) И цикло-5-аьшнородамина (5-ЦАР) в 5-изотиоцианате циклородамина (5-ИЩ).

Целью изобретения является повышение чувствительности определения.

При определении в качестве растворителя используют бинарную смесь диметилформамида (ДМФА) и бензола в соотношении 1:1.

В зависимости от качества красителя навеску растворяют в ДМФА таким образом, что полностью переводят краситель в лактонную форму, для чего ДМФА добавляют постепенно до полного обесцвечивания раствора. С целью увеличения квантового выхода люминесценции аминопроизводиой в полученный раствор красителя добавляют бензол в количестве, равном использованному количеству ДМФА, т.е. соотношение ДМФА : бензол должно быть -равным 1:1. Увеличение в смеси количества ДМФА до 1,5 сопровождается уменьшением чувствительности определения в 1,3 раза из-за уменьшения квантового выхода люминесценции. При увеличении содерания бензола до 1,5 также наблюдается уменьшение чувствительности определения в 1,2 раза из-за разбавления анализируемого раствора.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску анализируемого образца изотиоцианата родамина помещают в мерную колбу и растворяют в ДМФА. В три цилиндра вместимостью 15 мл помещают по 3 мл раствора образца. Затем во второй и третий цилиндры прибавляют 0,5 и 1,0 мл раствора, содержащего 0,5 мкг/мл определяемого аминородами- на. Если растворы окрашены, то в третий цилиндр добавляют по 0,5 мл ДМФА до полного исчезновения окраски. Отмечают количество добавленного ДМФА и добавляют такое же количество в третий и второй цилиндры. Б три пробирки отбирают по 1,5 МП раствора из

ранее приготовленных растворов в цилиндрах, прибавляют по 1,5 мп бензола и перемешивают. Растворы поочередно помещают в кварцевую кювету и измеряют интенсивности флуоресценции на спектрофлуориметре при . 490 нм и gp36 - 320 нм, используя в качестве холостой пробы ДМФА. Количество примеси аминородамина вычисляют по формуле

У Б(1исп-1хоА 150-}007, С(17ГГ-1 J )3 .

Дов

исп

15

где С - навеска испытуемого образца, г; g - добавка определяемого амина, г;

0

5

0

5

0

5

0

5

«СП

ДОб

-ход

интенсивность флуоресценции

раствора испытуемого образца;

интенсивность флуоресценции

раствора испытуемого образца

с добавкой;

интенсивность флуоресценции

холостой пробы. Время определения 15-20 мин. Результаты определения аминопроиз- водных ряда красителей предлагаемым способом приведены в таблице. Правильность определения аминопроизвод- ных подтверждена методом введено- найдено.

Пример 1. Определение 4-ЦАР в 4-ИЦР.

0,025 г 4-ИЦР взвешивают с точностью до 0,0002 г, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мп и растворяют в ДКЙ А. Готовят раствор 4-ЦАР О,1 мг/мп в ДМФА. В три мерных цилиндра вместимостью 15 мл помещают по 3 мл раствора исследуемого образца, затем во второй и третий цилиндры добавляют соответственно 0,5 и 1,0 ми раствора аминородамина. Если растворы окрашены, в третий цилиндр добавляют ДМФА порциями по 0,5 мл, тщательно перемешивая после каждой добавки, до полного исчезновения окраски. Отмечают добавленное количество ДМФА. Затем в первый и второй цилиндры добавляют отмеренное количество ДМФА и тщате льно перемешивают. В три пробирки помещают по 1,5 мл каждого из полученных в цилиндрах растворов, добавляют по 1,5 мл бензола и перемешивают. Растворы поочередно помещают в кварцевую кювету и измеряют интенсивность флуоресценции, используя в .ачестве холостой пробы ДМФА, при Я(рд 490 нм и возр 320 нм. Ко314083

личество примеси вычисляют по приведенной формуле

С 0,025 г, g « 3,010 г

Ййп 2,9%.

71, Г.

-joe Приме

1, X

Ййп 2,9%.

14J, ХОА -,-...

р 2. Определеиие 2-ТЭАР А-РИГЦ.

Определение проводят по примеру 1, пользуя в качестве добавки раствор

4-ТЭАР. С 0,025 г, g 3,0-10 г

мв

185, I,

ХОЛ

1, X

1исп - . 10,2.

Указанные изотиоцианаты ксантено- вых красителей используются в качестве люминесцентных метчиков белка, при этом изотиоцианаты, взаимодействуя с белком, образуют люминесцирующие соединения, по интенсивности свечения которых судят о количестве белка. При наличии в указанных красителях амино- производных, создающих люминесцирую- щий фон, определение меченого белка становится невозможным. При получении красителей в промышленных условиях контролировать его качество практически невозможно и вопрос о его п:ригодности выясняется только при использовании потребителем. В связи с

83

10

152о

25

74

этим задача оценки качества нарабатываемых красителей по содержанию в них люминестщрующих примесей приобретает особую важность.

Таким образом, способ позволяет, лимитируя содержание этих примесей, получить красители гарантированного качества и исключить возможность появления некачественного продукта путем повьппения чувствительности определения до 0,01-0,02%.

Формула изобретения

СпЬсоб определения аминопроизвод- ных ксантеновых красителей в их изо- тиоцианатах, включающий добавление в анализируемый раствор растворителя, возбуждение и регистрацию люминесценции полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности определения, в качестве растворителя используют смесь диметилформамида бензола в соотношении I:1, возбуждение проводят при длине волны 1 320 им, а регистрацию - при 7ч 90 нм.

Изобретение относится к анализу органических веществ и предназначено для определения 4(5) аминопрризводных родаминов в соответствующих изо- тиоцианатах. Целью является повышение чувствительности. В качестве растворителя используют бинарную смесь диметилформамид/бензол в qooT- ношении 1:1. Измерения флуоресценции бесцветной лактонной формы аминорода- минов проводят при , 490 им. Длина волны возбуждающего света 320 нм. 1 табл.S сл