Способ определения активности лейкоцитов мочи Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи,

Цель изобретения - повышение ности способа.

Способ осуществляют следуклдим о(5- разом.

Лейкоцитарную суспензию получают путем:центрифугирования 50-100 мп мочи средней порции, (50 мп мочи может быть использовано для получения осадка у больных со значительной лейкоци турией) в центрифужных пробирках в течение 8-10 мин при 1500 об/мин, Надосадочную жидкость удаляют, сливают в одну пробирку. После дву: кратного отмывания лейкоцитов физиот логическим раствором или раствором Хенкса лейкоциты осаждают центрифу гированием (10 мин, 1500 об/мин), надосадок удаляют, осадок ресуспен- дируют в питательной среде, напри- мер, . 199 с добавлением 0,1-0,5% жа;аа тина, в среде с целью умейьшения потери клеток вследствие оседания их на стенках посуды до конц ентрации I lO лейкоцитов в 1 мл.

Формулу и количество лейкоцитов подсчитывают известными методa зи. Полученную суспензию инкубируют в термостате в течение 30-45 мин при 36-37 С, В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк или кишечную палочку. Использование в ка честве объекта фагоцитоза кишечной палочки обусловлено ее ведущей ролью в этиологии пиелонефрита. Бактерии

ОПСОНИЗИРУЮТ донорской плазмой (в .

равных количествах от пяти здоровых доноров забирают плазм после отстаивания крови в течение 1 ч, смегпива- ют, разливают в пробирки по I мл и хранят при -70 ).

ОпСонизацию осуществляют следующим образом: на 1 мл добавляют 0,1 мл бактериальной взвеси 1 2 миллиардной культуры пригото:влен- ной с использованием ФЭК, инкубируют в термостате при 36-37°С в течение 15-30 мин. Затем бактерии осаждают, центированием (10 мин, 1500 Об/мин) надосадок удаляют, а бактерии ресуспендируют в физиологи- ческом растворе или растворе Хенкса до концентрации 1-10 бактерий в . 1 МП методом расчета разведения, учи.тьшая концентрацию исследуемой лейкоцитарной взвеси.

Составление вза модействующих смесей осуществляют в иммунологических планшетах при лейкоцитарно-микробном соотношении 1:100 (0,1 мл лейкоцитарной взвеси и О,1 мл микробной взвеси) инкубируют в термостате в течение 30-45 мин при 36-37°С. Готовят мазок методом мазка - капли. Высушивают, фиксируют метанолом 5-7 мин, окрашивают по Романовскому-Гимза (азур 11 эозин) 20-25 мин. Подвергают микроскопии с иммерсией известным способом. Подсчитывают количество фагоцитирующих лейкоцитов на 100 клеток (ФИ) и среднее количество фагоцитирующих г-шкробов на один фагоцит (ФЧ), по которым судят об активности лейкоцитов мочи.

Пример 1. Больной С., г 25 лет, поступил в клинику с жалобами на частые головные боли, быструю утомляемость, повьппение АД до 160/100 мм рт.ст., иногда незначительные боли в области поясницы. Считает себя больным в течение последних 4-°5 лет, когда стало отмечаться повышение АД, при исследовании мочи патологии не выявлялось. При обследовании больного в клинике патологии со стороны общих анализов крови и мо чи не выявлено. При посеве мочи ис- тинной бактериурии не выявлено. По данным рентгеноло-гического исследования мочевой системы выявлена умеренная деформация чашечно-лоханочной системы обеих почек. При определении функциональной активности лейко1щтов мочи ФИ 50%, ФЧ 4j25 (нормативные показатели - доверительный интервал здоровых ФИ - от 60 до 90%, ФЧ - от 9 до 16)в Таким образом, наличие у патдаента выявленных рентгенологически изменений почек свидетельствует в пользу хронического пиелонефрита. Отсутствие изменений со стороны общих анализов крови и мочи позволяет думать о фазе ремиссии. Однако снижение показателей активности лейкоцитов мочи (полученные результаты не вписываются в доверительньй интервал здоровых) может свидетельствовать о готов- нсоти к обострению пиелонефрита или о наличии скрытого воспалительного процесса„ Больному показан курс про- тиворецидивного лечения, включая им- Г Гуностимуляторы. После курса лечения

10

31409929

(иммуномодуляция гемодезом, ФИ 72%, ФЧ 9) данные результаты вписываются в доверительный интервал ,. здоровых.

Пример 2. Больная М,, 48 л., поступила в клинику с жалобами на боли в пояснште, изменение цвета мочи, слабость, утомляемость, суб- фебрильную температуру. Больна в течение 10 лет. Диагноз хронического пиелонефрита подтвержден рентгенологическими и лабораторными исследованиями. Рецидивы заболевания возникают 2-3 раза в год. При определении активности лейкоцитов мочи ФИ 22%, ФЧ ФЧ 6,82. Показатели не вписываются в доверительный интервал здоровых (ФИ - от 60 до 90%, ФЧ - от 9 до 16). Проведён курс антибактериального и иммуностимулирующего лечения. При вы- Ниске из клиники показатели общего анализа крови и мочи, пробы Нечипо- ренко - в пределах нормальных. Общее

десятидневньй курс лечения спленином. Показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ 67%, ФЧ 8,99), Показатели вписываются в доверительный интервал здоровых, что может свидетелвствовать о наступлении иммунологической ремис- ,сии и уменьшении вероятности рецидива заболевания. Вероятно частые рецидивы заболевания как раз и обусловлены снижением защитных сил организма против инфекции мочевого тракта.. Для профилактики рецидивов можно рекомендовать курсы иммуномоделирующей 15 терапии (показатели активности лейкоцитов мочи после лечения вписываются в доверительный интервал здоровых/.

20

Формула изобретен.и я

Способ определения активности лейкоцитов мочи путем исследования ее осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности

способа, из концентрированного осадка состояние больной удовлетворительное, 25 вьщеляют лейкоцитарную суспензию, иноднако снижены показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ 50%, ФЧ 7,12), Показатели не вписываются в доверител1 ный интервал здоровых.

десятидневньй курс лечения спленином. Показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ 67%, ФЧ 8,99), Показатели вписываются в доверительный интервал здоровых, что может свидетелвствовать о наступлении иммунологической ремис-; ,сии и уменьшении вероятности рецидива заболевания. Вероятно частые рецидивы заболевания как раз и обусловлены снижением защитных сил организма против инфекции мочевого тракта.. Для профилактики рецидивов можно рекомендовать курсы иммуномоделирующей терапии (показатели активности лейкоцитов мочи после лечения вписываются в доверительный интервал здоровых/.

Формула изобретен.и я

Способ определения активности лейкоцитов мочи путем исследования ее осадка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности

кубируют в питательной срйде.рН 6,5- 7,1 в течение 30-45 мин после чего добавляют в пробу опсонизированные бактерии, окрашивают мазок-каплю,.

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, предназначено для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи. Цель из Обретения - повышение точности спо-. соба. Для этого из концентрированного осадка мочи выделяют лейкоцитарную суспензию. Полученную суспензию ин - кубируют в термостате 130-45 мин при 36-37 0. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк или кишечную палочку. Бактерии опсонизи- руют донорской плазмой. Затем бактерии осаждают центрифугированием (Ю мин при 1500 об/мии), надосадок удаляют, а бактерии ресуспендируют в физиологическом растворе Хенкса до концентрации 1 х 10 бактерий в 1 мл. Затем окрашивают мазок-каплю определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и по этим значениям определяют степень активности лейкоци- , ТОВ MO4Hi,. (Л

что явилось показанием для продолже- 30 определяют фагоцитарный индекс и факия курса иммуностимулирующей терапии (наступление клинической ремиссии не сопровождалось ремиссией иммунологической). Дополнительно проведен

гоцитарное число и при значении.первого менее 60% -к второго MeHjee 9 микробных клеток определяют пониженную активность лейкоцитов мочи.