Способ определения иммунодефицитного состояния при воспалительных заболеваниях Советский патент 1987 года по МПК G01N33/53 

1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической иммунологии для диагностики дефицита функции Е- роэеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН) при определении иммунодефицитных состояний.

Целью изобретения является повышение точности определения иммуно - дефицитных состояний при воспапитель ных заболеваниях- за счет исследования фагоцитарной активности Е-РОН.

Способ осуществляют следующим образом,.

У пациента берут кровь и выделяют субнопуляцию фагоцитирующих Е-РОН за счет того, что разделение клеток кро ви производят наслаиванием 3 мл цельной крови на двухступенчатый градиент фиколл-уротраста с плотностью 1,077-1,083 г/мл и 1,095-1,005 г/мл с последующим центрифугированием при со скоростью 1000-1500 об./ /мин в течение 20-30 мин. Получают две чистые популяции клеток: лимфо- цитарную и нейтрофильную. Соед1 -1няют 0,1 мл нейтрофилов (З-10 в 1 мл) с 0,1 мл 1 млрд, взвеси золотистого стафилококка (штамп Lepin). Первую пробирку с этой смесью инкубируют - при 4 С 30 мин, вторую в течение 120 мин. Дополнительно перемешивая покачиванием каждые 10 мин. Делают мазки, сушат, фиксируют метанолом 3-5 мин, красят азур-эозином 3 - 5 мин.

Подсчет, Определяют содержание лейкоцитов в 1 мкл (L), а также подсчитывают процентное содержание нейт рофилов (l) среди всех лейкоцитов в мазке крови. Зная процентное содер жание нейтрофилов, высчитывают их абсолютное содержание

N

L 1

Too

в препарате просчитывают процент Е-розеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН) (а), а зная относительное содержание Е-РОН вычисляют их абсолютное количество „ N . а

Тоо

В препаратах 2 и 3 про.считывают процент фагоцитирующих клеток (б и в). Вычисляют абсолютное их количесво (Р, F)

М б

Too

F

.М.в

с 5

ь- 10

3597452

Фагоцитарный индекс (ФИ) - среднее число фагоцитирующих бактерий на 1 нейтрофил.

Абсолютный фагоцитарный показатель (АФП) ФИ X Р,

Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ)

ИЗФ

Смесь А: фиколл г; уротраст 60 % 20 мл; дистиллированная вода 100 мл. Плотность раствора 1,095 - 1,005 г/мл.

Смесь В: фиколл 7,2 г; уротраст 60% 20 мл; дистиллированная вода 100 мл. Плотность раствора 1,077 - ,085 г/мл.

Аналоги: Урографин, верографин,

Пример 1, Расчет показателей фагоцитарной активности у практически здорового челоЁека,

В иммерсионной системе микроскопа в 6-7 разных полях в препарате

1получено 35,5% Е-РОН, в препарате

2(инкубация 30 мин) - 48% фагоцитирующих нейтрофилов, в препарате

3(инкубация 120 мин) - 27% фагоцитирующих клеток. Содержание лейкоцитов в 1 мкл крови 6850, процентное содержание нейтрофилов в формуле крови 6 I,

Подставив в формулы цифровые значения получаем

„ 6850.61 , ,-70 г ,

N 4178,5 в 1 мкл;

4178,5-35,5 .,„,. , . М IJ TT--- 1483,4 в 1 мкл;

1483,4- 48 7.„ - YQQ /1

в 1 мкл;

100

400,5 в 1 мкл.

Фагоцитарный индекс (ФИ). Количе ство фагоцитированных бактерий 0 рофилами: через 30 мин - 207; через 120 мин - 105. 209

ФИ (через 30 мин) -TO

чо

ФИ (через 120 мин) - - 3,8,

АФП (через 30 мин) 4,3712 3061,6 в I мкл; АФП (через 120 мин) - 3,8-400,5 1521,9 в 1 мкл;

ИЗФ

. . J.3

- l27 3,8j

2 1,H31

П p- и M e p 2. Больной H, 72 ro- да. Поступил с диагнозом Аденома предстательной железы, хронический простатит в фазе ремиссии. ХПН ла™ тентная стадия. На экскреторных уро- граммах функция почек сохранена, пас саж контрастного вещества не нарушен, на нисходящей цистограмме дефект наполнения, характерный для аде™ номы простаты,

Ректально железа увеличена в 1,5 раза туго эластической консистенции. Лабораторные данные без отклонений от нормы. Иммунологические исследо вания (17.07,84 г): L 4750 в 1 мкл; сегментоядерные нейтрофилы 2802,5 в мкл (54%); эозинофилы 237,5 в 1 мкл (5%); лимфоциты 1662,5 в I мкл (35%); моноциты 285 в 1 мкл (6%); Е-РОН 1317,1 в 1 мкл (47%).

Процент фагоцитирующих клеток че- рез 30 мин 76; через 120 мин - 50,

Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин - 1000,9 в 1 мкл; через 120 мин - 658,5 в 1 мкл,

ФИ через 30 мин - 4,6; через 120 мин 3,9; через 30 мин -. 4604,1 в 1 мкл; через 120 мин - 2041,3 в 1 мкл.

ИЗФ

Г 7б 4,б 1 По 3,1 J

1,5,

Иммунологические показатели в пределах нормы. 01,08.84, произведе- на аденомэктомия, В послеоперационном периоде осложнений не бьшо. Рана зажила первичным натяжением.Боль™ ной в удовлетворительном состоянии выписан домой.

Пример 3. Больной К. 25 лет, Поступил 13,07,84 г, с диагнозом: хронический простатовезикулит5 хрони ческий уретрит неясной этиологии.

Жалобы на боли в области промеж ности, появление мутного отделения из уретры после ночного сна, ослабление эрекций, раннюю эякуляцию, гоно рею, явления уретрита, В посевах об- наружен гонококк. Прошел полный курс лечения гонореи с применением гоно- вакцины. Отмечено клиническое и лабо раторное выздоровление,

- с е™

3597454

В течение последних двух месяцев появились явления уретрита. Болезнен™ ность в области промежности, появле- ние отделимого из уретры после ноч ного сна.

Анализ крови (05,07 .84г, ) : лейко ° циты 6, зозинофилы4%; палочко™ ядерные нейтрофилы 13%; сегментоядер 10 ные нейтрофилы 49; лимфоциты 20%;: моноциты 5%.

Анализ мочи: удельный вес 1020; белок отсутствует; лейкоциты 12- 15

5

0

5

в поле зрения.

Секрет простаты: во всех полях зрения клетки переходного эпителия в состоянии выраженного атипизма. В цитологическом отделении из уретры секрета простаты Естречаются клетки переходного эш тешгя Б состоя- НИИ выраженного атипизма Атигагзм клеток в мазке из уретры скорее все- го связан с деструктивным процесса- ми эпителия уретры, тела простаты и семенных пузырьков. Больному прово дились многократные курсы ат-ггибакте- риальной терапии и можно предполо жить иммунодефицитное состояние.

Иммунологические исследования; лейкоциты 4650 в 1 мкл; сегментоядер- ные нейтрофклы 1906,5 в i мкл (41%); лимфоциты 2325 в 1 мкл (50%); ыо- ноциты 325,5 в 1 мкл (7%); содержание Е-РОН 953,2 в 1 мкл (50%),

Процент фагоцитирующих кейтрофи- лов: через 30 мин через 120 мин - 12,

Абсолютное количество фагоцитирую- 0 щих нейтрофилов: через 30 мин - 190,6 в 1 мкл; через 120 мин - 144,4 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин - 2,2; через 120 мин - 2,8,

0

5

5

АФП через 30 №ш - 419 ,3 в 1 через 120 мин - 320,3 в 1 мкл. Г 20 2,21

МКЛ|

ИЗФ

ГТ29 8 i ,. - 7

-I 5 /- .

50

5

По иммунологическим показателям у больного относительная степень им- мунодефицита количества Е-РОН звена нейтрофилов, однако имеется глубо-- кий дефицит относительного и абсо- лютного числа фагоцитирующих Е-РОН, ФИ и А.ФП, т„е. показателе более на 50% ниже контрольных велич11Н, Больному назначена антибактериальная тераПИЯ в сочетании со стимулирующей (перагинал 1000 МДЦ - 1300 -- 2000 - 3000, ел едневное пувьшение дозы). Иммунологические исследования; лей коциты 6550 в 1 мкл; сегмеитоядерные нейтрофилы 3864,5 в 1 мкл (59%); эо зииофилы 77,2 в 1 мкл (2%); палочко- ядерные нейтрофилы 77,2 в 1 мкп (2%); лимфоциты 2096 в 1 мкл (32%)j моноциты 193,2 в 1 мкл (5%); Е-РОН 1185,4 в 1 мкл (48%).

Процент фагоцитирующих нейтрофи- лов: через 30 мин - 46; через 120 мин - 26.

Абсолютное количество фагоцитирук щих через 30 минут - 580,8 в 1 мкл; через 120 мин - 330,8 в мкл,

ФИ через 30 мин 4,6; через 120 мин - 3,6.

АФП через 30 мин - 2671,7 в мкл; через 120 мин - 1190,8 в 1 мкл,

ИЗФ

46 4,б1 26 376J

1,4.

По иммунологическим показателям количество , а также показатели, характеризующие функцию Е-РОН звена после проведенного курса мулирующей терапии, повысились до контрольных величин. 10.07.84 г.Состояние больного удовлетворительное. Явления баланопастита и уретрита стихают. 17.07.84 г. Больной в удов- летворительном состоянии выписан мой.

Таким образом, л/ больного хрони- ческий воспалительный процесс, по поводу которого неоднократно полу- чал курсы антибактериальной терапии, однако эффект в лечении был относительный. В результате проведенных иммунологических исследований выявлен относительный дефицит количест- ва Е-розеткообразующих нейтрофилов, а также глубокий (более 50%) дефицит функции звена. Это потребовало назначения стимулирующей терапии. После проведенного курса стцмулирую- щей терапии в сочетании с антибактериальной нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические данные. Больной в удовлетворительном

состоянии выписан домой,

П р и м е р 4. Больная М., 32 г о- да. Поступила в клинику в связи с

0

5

0

обострением хронического пиелонефрита. Температура тела , озноб, болезненность в области правой поч- . ки. Симптом Иастернацкого положительный. Уменьшение суточного диуреза до 300 мл. На экскреторных урограммах функция правой почки сохранена, пассаж не нарушен.

Анализ крови: лейкоциты 25 х X 10 в 1 мкл; эозинофилы 2%; палоч- коядерные нейтрофилы 10%; сегменто- ядерные нейтрофилы 54%; лимфоциты 29%; моноциты 7%.

Анализ мочи: удельный вес 1020; белок 0,099%; лейкоциты сгустками до 100 в поле зрения микроскопа; эритроциты 10-15 незначительные, В посеве мочи роста микрофлоры не обнаружено. Заключение: У больной обострение хронического пиелонефрита.

Иммунологические исследования: лейкоциты 7000 в 1 мкл; сегменто- ядерные нейтрофнлы 3220 в 1 мкл 5 (44%); эозинофилы 140 в 1 мкл (2%); лимфоциты 3290 в мкл (47%); моноциты 490 в 1 мкл (7%); содержание Е-РОН I127 в 1 мкл (35%).

Процент фагоцитирующих нейтрофи- лов через 30 мин - 30; через 120 мин - 27.

Абсолютное число фагоцитирующих Е-РОН: через 30 мин - 338,1 в 1 мкл; через 120 мин - 304,3 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин - 1,4; через I20 мин -2,6,.

АФП через 30 мин - 473,3 в 1 мкл; через 120 мин - 791,1 в 1 мкл. 30 J,4 27 2,6

0

5

0 г ИЗФ

0,8,

Таким образом, несмотря на то, что у больной количественное содерание Е-РОН в пределах нормы, тем не менее выявлен глубокий дефицит функции данног о звена относительного и абсолютного количества фагоци- тирующих Е-РОН, ФИ, АФП, а также фагоцитоз имеет незавершенный харак- тер.

Больной показана стимуляция Е-РОН звена продигизаном на фоне антибактериальной терапии в связи с вялотекущим воспалительным процессом в почке,

Икмунологические исследования: содержание Е-РОН 1188 в 1 мкл (36%), Процент фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин - 38; через 120 мин-21,

Абсолютное количество фагоцитиующих Е- РОН через 30- мин - 51,4 в 1 мкл; через 120 мин - 249,5 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин - 4,8; через 120 мин - 5,5.

АФП через 30 мин - 2166,7 в 1 мкл; через 120 мин - 1372,2 в 1 мкл,

4,8 -575 2

ИЗЛ

Г 38

liii:

8.06.84 г. у больной нормализо- вался диурез, увеличился до-1000 мл, уменьшилась интенсивность болей.Однако в связи с тем, что дефицит фа- гоцитируюощх Е-РОН и АФП сохраняется, рекомендован повторный курс стимулирующей терапии. Проведен курс продигнозана.

Иммунологические показатели: содержание Е-РОН 1823,3 в 1 мкл (37%).

Процент фагоцитирующих нейтрофи- лов через 30 мин - 48; через 120 мин 29.

Абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин - 875,1 в 1 мкл; через 120 мин - 528,7 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин - 4,5; через 120 мин - 3,5.

АФП через 30 мин - 3937,9 в мкл; через 120 мин - 1850,4 в мкл.

Г 48 , 4,5 1 Г29- -375-J

ИЗФ ----- ±Z± d 1,4.

Таким образом, перед поступленив клинику у больной в течение

Редактор Т.Парфенова

Составитель Н.Хрусталева Техред Л,Сердюкова

Заказ 6151/48Тиразк 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

трех месяцев отмечался субфибрилн- тет (до 38 с), периодические приступы болей в правой.поясничной облас-

ти, снижение суточного диуреза до 300 мл. При поступлении анализ мочи: лейкоциты до 100 в поле зрения; анализ крови: лейкоциты 25.000; палоч- коядерные нейтрофилы 10%; сегменте-

ядерные нер1трофилы 54%; лимфоциты 29%; моноциты 7%,

Мочевина крови 5,2 мм/л, креати- НИН 0,12 мм/л. На обзорных рентгенограммах теней конкриментов в проек-

Ции почки и мочевыводящих путей нет. На серии урограмм функция почки своевременная.

Ренография: секреторная и эвакуа- тарная.-функция правой почки умеренно

снижена, дефицит очищения 30%.

Иммунологические ксследования выя вили у больной вялотекуш;ий воспалительный процесс, обусловленный дефицитом функции Е-РОН эвена. В резуль-

тате первого курса стимулирующей терапии продигиозаном в сочетании с ан- тибактериальной терапией у больной улучшились клинические и лаборатор- ные данные, однако, по иммунологи-

ческим показателям сохранился дефицит фагоцитирующих Е-РОН. и АФП, что потребовало повторного курса стиыули рующей терапии продигиозаном,

В результате второго курса стиму-

лирующей терапии в сочетании с антибактериальной терапией у больной нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические показате- ли. Больная в удовлетворительном сое-

тоянии выписана домой.

Корректор С.Черни Подписное