СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ Советский патент 1996 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической иммунологии для определения иммунодефицита по оценке функционального состояния популяции двойных нейтрофилов периферически крови человека при воспалительных заболеваниях.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом. В силиконизированную пробирку на 6 мл смеси фиколлауротраста плотностью 1,070-1,073 г/мл и 1,080-1,083 г/мл наслаивают 3 мл цельной крови и центрифугируют 15-30 мин при 0-4^о и 1000-1500 об/мин. Образуются две границы раздела: первая между плазмой и смесью плотностью 1,073, вторая между смесями в разными плотностями. В результате получают две чистые взвеси клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. Взвесь нейтрофилов переносят в две пробирки в каждой из которых соединяют 3х10⁶ клеток в 0,1 мл с 0,1 мл 1-2 млрд взвеси золотистого стафилококка (штамм Лепин). Первую пробирку с этой смесью инкубируют при температуре ниже 12^оС в течение 30 мин, вторую в течение 120 мин. Дополнительно перемешивают покачиванием каждые 10 мин. Затем взвесь переносят на предметные стекла, сушат, фиксируют метанолом 3-5 мин.

Определяют содержание лейкоцитов (L) в 1 мкл, подсчитывают содержание (l) нейтрофилов среди всех лейкоцитов в мазке крови. Зная процентное содержание нейтрофилов, высчитывают их абсолютное содержание N
N
В аппарате подсчитывают процент D-розеткообразующих нейтрофилов (D= POH-а), зная относительное содержание D=POH вычисляют их абсолютное содержание М.

M
В препаратах 2 и 3 просчитывают процент фагоцитирующих клеток (б-30 мин, в 120 мин инкубации). Вычисляют абсолютное их количество (P,F)
P F
Фагоцитарный индекс (ФИ) среднее число фагоцитированных бактерий одним двойным нейтрофилом в препарате 2 и 3 для каждого в отдельности.

Абсолютный фагоцитарный показатель (АФП) ФИхР или F.

Индекс завершенности фагоцитоза ИЗФ
ИЗФ
П р и м е р 1. Определение фагоцитарной активности двойных нейтрофилов у практически здорового человека.

В иммерсионной системе микросокпа в 6-7 разных полях зрения в препарате 1 получено 4% D= POH, в препарате 2 (инкубация 30 мин) 58% фагоцитирующих клеток, содержание лейкоцитов в 1 мкл крови (L) 6550, процентное содержание нейтрофилов в формуле крови (l) 58. В препарате 3 (инкубация 120 мин) 42% фагоцитирующих клеток. Подставив в формулы цифровые значения, получают
N 3799 в 1 мкл
M 151,9 в 1 мкл
P 88,2 в 1 мкл (30 мин)
F 63,8 в 1 мкл (120 мин)
Фагоцитарный индекс (ФИ).

Количество фацитированных D-нейтрофилами бактерий:
через 30 мин (б) 275
через 120 мин (в) 182
ФИ (через 30 мин) 4,7
ФИ (через 120 мин) 4,3
Абсолютный фагоцитарный покаазатель (АФП):
АФП (через 30 мин) 4,7х88,2 414,5 в 1 мкл;
АФП (через 120 мин) 4,3х63,8 274,3 в 1 мкл
ИЗФ 1,25
П р и м е р 2. Определение фагоцитарной активности двойных нейтрофилов (D=POH).

Разделение клеток крови производят наслаиванием на градиент фиколла-уротраста плотностью 1,070-73 и 1,080-83 г/мл. Центрифугируют смесь при 0-4^оС со скоростью 1000-1500 об/мин. Получают две чистые популяции клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. Соединяют 0,1 мл (3х10⁶клеток в 1 мл) с 0,1 мл 1-2 млрд. взвеси стафилококка (штамм Лепин) в двух пробирках, в каждой из них. Инкубируют смесь в первой пробирке в течение 30 мин, во второй в течение 120 мин при температуре ниже 12^оС.

Определяют наличие рецепторов двойных нейтрофилов по способу.

Для определения фагоцитарной активности субпопуляции двойных нейтрофилов по определению наличия на нейтрофилах рецепторов дополнительно проводят соединение взвеси двойных нейтрофилов с микроорганизмом, инкубацию субпопуляции двойных нейтрофилов с микроорганизмом в течение 30 мин, инкубацию двойных нейтрофилов с микроорганизмом в течение 120 мин, инкубацию при температре ниже +12^оС.

П р и м е р 3. Больной К. поступил в клинику с диагнозом: стриктура уретры, двусторонняя гидронефротическая трансформация почек, осложнившаяся хроническим пиелонефритом, нефункционирующая левая почка, гнойный цистит, гнойный уретрит. 2.07.84 больной оперирован по поводу апостематозного пиенилонефрита. Произведена нефростомия, декапсуляция левой почки. В послеоперационном периоде состояние крайне тяжелое с явлениями уремической и гнойной интоксикации, что потребовало проведения сеансов гемодиализа (03, 05 и 09.07.84), 05.07.84 дополнительно с дезинтоксикационной целью проведен сеанс гемосорбции. Состояние оставалось тяжелым. Больной предъявлял жалобы на резкую слабость, сухость во рту. Печень выступала из-под края реберной дуги на 3 см.

12.07.84 Состояние больного тяжелое. Температура тела 38,3^оС. Лабораторные показатели. Анализ крови: лейкоциты 12,7х10⁹/л, п-23, п-56, л-19, м-2. Анализ мочи: удельный вес 1017, реакция щелочная, белок 0,33% эритроциты покрывают все поля зрения. В посеве мочи смешанная микрофлора (кишечная палочка + коккобациллы). Креатинин крови 0,5, мочевина 21,5 ммоль/л. Иммунологические ис-следования. Содержание D=POH 3320,1 в 1 мкл (42%), процент фагоцитирующих клеток: через 30 мин 92; через 120 мин 92. Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин 3054,5 в 1 мкл, через 120 мин 3054,5 в 1 мкл. Фагоцитарный индекс: через 30 мин 11,3; через 120 мин 9,6. Абсолютный фагоцитарный показатель через 30 мин 34515,7 в 1 мкл; через 120 мин 25966,7 в 1 мкл.

Индекс завершенности фагоцитоза
ИЗФ 1,2
Таким образом, наличие апостематозного пиелонефрита, сопровождающегося гнойной и уремической интоксикацией, вызывает увеличение в периферической крови в 20 раз содержания двойных нейтрофилов, в 2 раза фагоцитарного индекса, в 34 раза абсолютного числа фагоцитирующих клеток и 83 раза абсолютного фагоцитарного показателя для двойных нейтрофилов. При сравнении с показателями практически здоровых лиц фагоцитоз также имеет завершенный характер.

После проведения курса антибактериальной терапии, сеансов гемосорбции и гемодиализа нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические данные.

П р и м е р 4. Б-й Р. 56 лет. Поступил в отделение с диагнозом: аденома предстательной железы, камень мочевого пузыря. Впервые острая задержка мочи год назад. Представительная железа при ректальном обследовании увеличена в 1,5 раза, плотно-эластической консистенции, безболезненная, срединная бороздка не выражена.

На нисходящей цистогорамме определяется дефект наполнения по нижнему контуру мочевого пузыря.

13.03.86 произведена трансуретральная резекция аденомы предстательной железы, цистолитотрипсия. В послеоперационном периоде подъем температуры обусловлен воспалением в шейке мочевого пузыря.

24.03.86 Иммунологическое иссоледование. Содержание D=POH 166,3 в 1 мкл (11%), процент фагоцитирующих клеток: через 30 мин 46; через 120 мин 52. Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин 76,5 в 1 мкл; через 120 мин 86,5 в 1 мкл. Фагоцитарный индекс: через 30 мин 2,8; через 120 мин 2,4. Абсолютный фагоцитарный показатель: через 30 мин 214,2 в 1 мкл; через 120 мин 207,5 в 1 мкл.

Индекс завершенности фагоцитоза
ИЗФ 1,0
Таким образом, у больного наблюдается снижение ФИ, абсолютного числа фагоцитирующих клеток, АФП в среднем в 3 раза D=POH звена нейтрофилов. Следовательно, антигенный стимул при хроническом пиелонефрите недостаточен для того, чтобы активизировать двойные нейтрофилы.

Таким образом, способ позволяет более точно определить иммунодефицитное состояние при воспалительном процессе, поскольку блокада фагоцитоза двойных нейтрофилов является обязательным условием иммунодефицитного состояния и перехода острого воспаления в острый сепсис.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической иммунологии для определения иммунодефицита. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что определяют количество двойных розеткообразующих нейтрофилов, несущих рецепторы к эритроцитам барана и С-фрагменту комплекта, и фагоцитарную активность двойных нейтрофилов при температуре 12^oС и ниже, и при снижении количества и фагоцитарной активности двойных нейтрофилов на 50% и ниже при незавершенном характере фагоцитоза определяют иммунодефицитное состояние при воспалительном процессе по выявлению блокады фагоцитоза двойных нейтрофилов.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У БОЛЬНЫХ С ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ путем исследования количества розеткообразующих нейтрофилов крови и их фагоцитарной активности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют количество двойных розеткообразующих нейтрофилов, несущих рецепторы к эритроцитам барана и С-фрагменту комплемента, и фагоцитарную активность двойных нейтрофилов при температуре 12^oС и ниже и при снижении количества и фагоцитарной активности двойных нейтрофилов на 50% и ниже при незавершенном характере фагоцитоза определяют иммунодефицитное состояние.