Способ количественного определения органических дисульфидов Советский патент 1988 года по МПК G01N21/78 

to ел

ел

N5

UD

;1142

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам коли. чественного определения органических соединений, содержапщх дисульфидную группу.5 таких, как алифатические дисульфиды, дисульфиды ряда аминокислот цистин, окисленной формы глутатиок

Целью изобретения является повышение точности и чувствительности спо-

Iсоба,

i Пример 1с, Определение диалi ди с ул ьфид о в „

Навеску дисульфида растворяют в

I этаноле в мерной колбе на 25 мл. PacT-fS на и тлутатиона окисленного.

соляной кислоте. Раствор устойчив при хранении в темной склянке при температуре +Д С в течение не менее 6 мес.

Готовят 4%-ный раствор хлорида железа (III) в 1 н, растворе соляной- кислоты. Раствор -устойчив.

Хромогенный реагент готовят в день анализа путем смешивания трех объемов 0,2%-ного раствора М,К-диметил-п-фе- нилендиамина в концентрированной соляной кислоте и одного объема 4%-ного раствора FeClsB 1 н. НС1.

Пример 2. Определение цисти

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к количественному определению органических дисульфидов. Цель - повышение точности и чувствительности способа. Определение ведут обработкой анализируемой пробы сначала pacTsoi oM нитрата или ацетата ртути (2+), затем М,Ы-диме- тил-п-фенилендиамимом в присутствии хлорида железа () и НС1. Полученное окрашениое соединеяне подвергают спектрофотометрироваяию. Чувствительность определения диметилдисульфида - 2,5 мкг, диэтилдисупьфида 5,0 мкг дибутилдисульфида 7,0 мкг, глутатиона окисленного и цистина 20 мкг в 9,5 мл фотометрируемого раствора, 8 табл. (О

; вор разбавляют этанап.ом до концентра- Iции порядка 100 мкг/мп, 052-2,0 мл :анализируемого.раствора помещают в iпробирку с пришпифованной пробкой, ДОВОДЯТ до 2-мл этанолом, приливают

0)5 МП 5%-ного раствора ацетата ртути :и дистиллированную воду до объема

9,0 МП. Через 30-60 с в пробирку до бавляют 0,5 мл хромогенното реаген- ;та (смесь 0,2%-ного раствора N5N-ди метил-п-фенилендиамяна гидрохлорида или сульфата в концентрированной ;соляной кислоте и 4%-ного раствора |хлорида железа (III) в 1 н-. раство- jpe соляной кислоты, ВЗЯТЬЕС в соот- 1ношении 3:1), Раствор перемешивают fj через 15 мин измеряют оптическзто плотность при длине волны 500 нм в |кювете с толщиной слоя 2 см относи- :Тельно контрольного раствора с

Содержание алкипднсульфида находят по уравнению градуирозочного графика. Для построения градуировоч- ного графика в серию пробирок, содер ащих по 0,5 мл 5%-ного раствора аде тата ртути, вносят стацдартный раствор алкилдисульфкда в этаноле с концентрацией 50 мкг/мл в количестве .О, 0,1, 0,2„,,,250 МП5 доводят объем до 2,5 мл этанолом и далее обрабатывают и фотометрируют аналогично пр-о - бе.,

Данные для построения градуировоч ного графика для определения первого гомолога ряда алифатических дисуль- фидов диметшхдисульфида (ДЬ ЩС) (при -п 5), приведены в табл. i,

Результаты определения дналкнлди- сульфидов представлены в табл, 2„

Приготовление хромогенного реаген та.

Готовят 0,2%-ный раствор Н Ьдиме тил-п-фенилендиамина солянокиспого 1Щ1И сернокислого в концентрированной

Навеску глутатиона (0,1000- 0,2000 г) растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе емкостью 1 л. Навеску цистина 154,6 мг растворяют

в 3 мл 5%-ного раствора соляной кисоты и переносят количественно в мерную колбу на 1 Л5 доводя объем до метки водой.

1 мл раствора вещества вносят в

пробирку добавляют 2 ми 5%-ного раствора ацетата нитрата или ртути, воу до объема 9,0 мл, после чего про- бирку помешают в кипящую водяную баню на 3-5 мин. По охлаждении раствора до комнатной температуры приливают 0,5 мл тот;о же самого хромогенного реагента. Через 3 мин в случае определения цистина и 15-20 мин при пределении глутатиона окисленного

аствор центрифугируют в течение 5 мин и измеряют оптическую плот- ность при длине волны 510 нм для глутатиона и 540 нм для цистина.

Содержание цистина и глутатиона

определяют по градуировочным графикам зависимости оптической плотности от количества вещества в фотометри- уемом объеме раствора в диапазоне 0-400 мкг.

Приме1)ы определения цистина и глутатиона окисленного представлены в табл, 3.

В табл, 4 приведены данные, подт- верж,цающие выбранные условия определения соединений, содержащих дисульфид- н:ую группу. Как следует из табл. 4, дисульфиды реагируют с Н,М-диметил-п- фенилендиамином только после обработки ацетатом или нитратом ртути« При этом в случае определения диалкилди- сульфидов достаточно обработать пробу O.j5 мл 5%-ного раствора соли ртути при комнатной температуре.

Как видно из табл.5, содержание солей ртути в анализируемом объеме раствора, предназначенного для фото- метрирования (9,0 мл), должна быть не ниже 0,2% при определении диалккл- дисульфидов (пределы 0,2-0,4%, что создается добавлением 0,5 мл 4-6%- ного раствора ацетата (нитрата) рту-

ти) и не ниже 0,9% при определении дию предлагаемому способу: диметйлдисульсульфидов ряда аминокислот (пределы; 0,9-1,2% создаваемые добавлением 2,0 мл 4-6%-ного раствора ацетата или нитрата ртути).

фида 2,5 мкг, диэтилдисульфида

5,0 мкг, дибутштдисупьфида 7,0 мкг,

глутатиона окисленнот и цистина

20 мкг в 9,5 мл фотометрируемого раУвеличение концентрагрш солей рту-15 створа (табл. 7).

ти не .приводит к изменению оптической плотности анализируемых растворов поэтому нецелесообразно.

Максимум оптической плотности ок- решенных растворов диалкилдисульфидов достигается при 500 нм через 15 мий и окраска устойчива по крайней мере в течение 2 ч. При определении цистина и глутатиона максимальная оптическая плотность достигается при обработке проб в 4 раза большим количеством раствора соли ртути (2 мп) при нагревании в кипящей водяной бане в тече ние 3-5 мин. При добавлении хромо- генного реагента появляется слабая опалесценция, вследствие частичного- восстановления двухвалентной ртути до одновалентной, поэтому перед фотомет- рированием растворы следует центрифу«гировать. Оптимальное время экспозиции проб после обработки хромогенным реагентом составляет при определении цистина 8-10 мин и глутатионаз 20- 30 мин.

Оптическая плотность 0,048

0,093 0,181 0,372 0,5600,732 0,925

Относительное стандартноеотклонет : ние, Sf.

0,058

0,051 0,030 0,016 0,0110,008 0,006

В табл. 6 приведены данные, сравнительной оценки известного и предла- гаемого способов.

В табл. 7 даны пределы определения органических дисульфидов в граду- ировочных растворах (конечный объем мл, кюветы с 1 2 см-) .

Чувствительность определения по

9,5

фида 2,5 мкг, диэтилдисульфида

5,0 мкг, дибутштдисупьфида 7,0 мкг,

глутатиона окисленнот и цистина

20 мкг в 9,5 мл фотометрируемого раВ табл. 8 приведена селективность предлагаемого способа определение органических, дисульфидов.

Определение органических дисульфидов селективно в присутствии альдегидов, спиртов, карбоновых кислот, аминов $ диалкилсульфидов, фенола, а также не содержащих серу аминокислот, мешают определению тиолы (табл. 8),

Формула изобретения

Способ количественного определения органических дисульфидов путем обработки раствора анализируемой пробы химическим реагентом и спектрофото метрированием полученного окрашенного соединения, отличающий- с я тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, обработку ведут сначала раствором нитрата или ацетата ртути (II), затем К,,Н-диметил-п-фенш1ендиамином в присутствии хлорида железа (III) и соляной кислоты.

Таблица 1

80

100

2,72-10

.-4

1,0840 4,35-1{Г

8,68-10

л7

Л Т

1,06-10 4,09- 8,19-1СГ

5,610

-7

Дибутилди- сульфид

1,1-10

.-т

Глутатион окисленный85,42,0

25550±580

101804130

40,810,9

81,4±1,0

9,,6

49,8+1,55

9,9±1,15

99,912,36

19,85±1,93

0,018 0,011 0,018 0,011 0,050 0,025 0,093 0,019

Д1

0,078 Таблица 3

I68,8i10,9 84,4±5,5 0,065

Диметилди- сульфид50,0

истин

200,0

0,5

0,5 0,5 1,0 2,0 0,5

0,5 0,5 1,0 1,0 2,0 2,0

2,0 2,0

2,0 3,0

Глутатион 200,0

Таблица 4

0,5

2,0

Примечание. Перед фотометрированием окрашенные растворы

центрифугируют в течение 5 мин, время центрифугирования входит в общее время экспозиции проб после прибавления хромогенного реагента.

Определение диметилдисульфида 0,12,00,,3

0,14,00,2-

0,15,00,18

0,24,00,5

Таблица 5

17

IA25529

метилди- |сульфидО-ТОО2,5

0,027 0,090

Диметилди- сульфид

Глутатион окисленньй

Ацетальдегид200,01:449,8±0,3

Диметиламин 300,0J:1049,8±0,5

Диметяпсульфид 500,0N:1049,9±0,4

Фенол200,01:449,7iO,3

Этантиол 10,05:165,3lO,5

200,0 Этаиол2000,0 1:10 200,1t1,1

18 Таблица 7

1000,925 0,006

(п-10)

Диметил- сульфид

Алании

Глутатион восстановленный

500,0 500,0

1:2,5 199,5i1,0 1:2,5 199,6±1,2

5:1

320,0±2,5