Способ определения количества ДНК в клетках костного мозга Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

(21) (22) (46) (71)

3603409/28-14

09.06.83

30.09.88.

Бюп. W 36

Киевский научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены им. А.Н.Марзеева (72) Е.И.Обухан

(53)615.475 (088.8)

(56)Агроскин Л.С., Папаян Г.В. Цитофотометрия. -Л.: Наука,. 1977, с.. 258.

(54)РПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ДНК В КЛЕТКАХ КОСТНОГО МОЗГА

(57)Способ относится к области медико-биологических исследований,.в частности к онкологии и гематологии.

Цель изобретения - повьшение точности способа цитофотометрического определения количества ДНК в клетках костного мозга. Для этого приготавля- вают мазки по методу Фельгена, опре- деля|Ьт содержание ДНК в клетках костного мозга и распределение хлеток по фазам митотического цикла. Определяют содержание ДНК в клетках костного мозга с использованием в качестве стандарта сравнения ядер малых лимфоцитов костного мозга интактных животных и распределение клеток по фазам Митотического цикла по этому стандарту. Определение проводят мето- ;дом измерения оптической плотности.

ю

со о со

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и гематологии.

Цель изобретения - повьппенне точ- ности цитофотометрического определения количества ДНК в клетках костно го мозга.

Способ осуществляется следующим образом.

Мазки костного мозга окрашивают по методу Фельгена и подвергают фотометрии при использовании в качестве стандарта оптической плотности окрашенных ядер малых лимфоцитов с дип лоидным набором хромосом, находящихс в стадии интерфазы,

Пример. Мазки костного мозга фиксируют в смеси Карнуа (2 ч), гид- ролизуют в 1 и. НС1 (11 мин), окра- шивают основным фуксином (60 мин), обезвоживают и заключают- в бальзам под покровное стекло. Цитдфотометрию ДНК производят двухволновым методом на цитофотометре МУФ-5 при длинах волн 546 и .480 нм. Измерения выполняют по общепринятой методике, используя зонд диаметром 200 мкм, винтовой окуляр-микрометр для измерения

диаметра ядер при увеличении микро- скопа Ок.7-Об.50. Содержание ДНК вычисляют в условных единицах плотности по известной формуле

1

m ( D,).S,

m - .масса ДНК,

k - коэффициент поглощения ДНК

малых лимфоцитов с диплоид- .Q ным йабором хромосом, нахо- .дящихся в стадии интерфазы , Dj - меньшая и брльщая оптические плотности,

S - площадь фотометрируемого . ядра.

Q

5

0 5

0

5

Q

Плоидность клеток в условных единицах рассчитьшают путем отнесения общей плотности их ядер к общей плотности ДНК малых лимфоцитов (стандарта) . Распределение по фазам митоти- ческого цикла производят путем сравнения относительного содержания ДНК . исследуемых клеток и стандарта.

Статистически обработанные результаты показали, что среднее содержание ДНК в стандарте (малых лимфоцитах костного мозга с диплоидным набором хромосом в стадии интерфазы) устрой - чиво и составляет 32,7±0,65 усл.ед.

Положительный эффект от использования в качестве стандарта сравнения малых лимфоцитов костного мозга в стадии интерфазы с диплоидным набором хромосом по сравнению с известным стандартом, приготовленным из спер- миев кроликов, характеризуется данными сравнения коэффициентов вариации содержания ДНК в известном и предлагаемом стандарте (соответственно 13,0711,15 и 9,3810,96%).

Формула изобретения

Способ определения количества ДНК в клетках костного мозга путем приготовления мазков костного мозга по методу Фельгена и измерения оптической плотности окрашенных ядер, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения точности, дополнительно проводят определение оптической плотности ДНК малых лимфоцитов костного мозга, находящихся в стадии интерфазы и имеющих диплоидньй набор хромосом, и определение содержания ДНК в клетках костного мозга проводят путем сравнения обддей оптической плотности их ядер с оптической плотностью ДНК малых лимфоцитов.