Способ получения производных неокарзиностатина Советский патент 1988 года по МПК C07K14/00 A61K31/785 C08F8/32 

Изобретение относится к способу получения производных неокарзиноста- тина - новых биологически активных соединений, которые могут найти при менение в медицине,

Цель изобретения - получение новых производных, неокарзиностатина, менее токсичных, обладающих высокой противоопухолевой активностью при внутриартериальном применении, повышенной жирорастворимостью.

На фиг. l-e приведены кривые, поясняющие предлагаемый способ.

Пример 1. А, Полимеризация сополимера стирола и малеинового ангидрида. 30 л кумола загружают в аппарат высокого давления с внутренним объемом 150 л, в который также подают однородный раствор, содержащий 3,5 кг малеинового ангидри5з;а, 20 л кумола, 3,7 кг стирола и 200 г перекиси бензоила-, подачу осуществляют непрерывно в течение 65 мин, одновременно смесь нагревают до 150 С. После загрузки осуществляют переме- щивание в течение 60 мин при 150°С, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, затем в нее добавляют 30 л н-гексана, чтобы обра- зованный полимер выпал в осадок, жидкую фазу сливают, получая таким образом осажденньй полимер. После измельчения полимера его промывают н-гексаном,а затем сушат. Выход полу ченного полимера составил 7,3 кг. Среднечисловой молекулярный вес (Мч) полимера, измеренный при помощи ос- мометрии давление пара (РДП), составил 1680. Он согласуется с измере- ниями ЯМР-спектроскопии, которые также показывают, что полученный таким образом полимер является сополимером стирола и малеинового ангидрида в молярном отношении 1:1 (фиг.1).

Б. Фракционирование сополимера стирола и малеинового ангидрида.

40 г сополимера стирола и малеинового ангидрида (СМА), полученного на стадии А, растворяют в 1,4 л ацетона, в раствор добавляют 3,8 кг стеклянных шариков (средний размер частиц О,1 мм), поверхность которых предварительно обрабатывают с использованием соединительного агента си- лана. Затем ацетон выпаривают, чтобы осадить СМА на поверхностях стеклянных шариков.

Стеклянные шарики с осажденным СШ и 1,4 л смешанного растворителя ацетона и н-гексана (объемное отношение составляет 8:92 при 25 с) загружают в колонну, имеющую внутренний диамет 80 мм и длину 80 см, при этом температуру системы поддерживают на уровне 25 С, а затем последовательно подают три типа смешанных рителей ацетона и н-гексана (такими смешанными растворителями при 25°С являются О,6 л смеси в отношении 8:92; 3,0 л смеси в отношении 22:78 и 3,0 л смеси в отношении 34:66, растворители подаются в указанном порядке), при этом жидкость вытекает из нижнего выпускного отверстия колонны. Элюат, полученный при применении смешанного растворителя ацетона и н-гексана с объемным отношением 34:66, концентрируют и сушат при пониженном давлении, в результате чего получают пробу в 6,3 г. Эту пробу ,. подвергают гельпроникающей хроматографии (ГПХ) средневесов ой молекулярный вес (Мв) составил 1350, а сред- нечисловой молекулярный вес (Мч) - 1170 (Мв/Мч 1,16). Согл&сно методу ОДП Мч составляет 1170.

В. Частичная полу-н-бутил-зтёри- фикация фракционированного СМА.

6,0 г СМА, полученного на стадии Б. 1,95 г н-бутилового спирта, 15 мл диоксана и 0,06 г ацетата лития помещают в стеклянную пробирку, затем пробирку закрывают и с целью получения однородного раствора встряхивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Затем этот раствор выдерживают при 90 С в течение 17 ч и охлаждают до-комнатной температуры. Далее реакционную жидкость сливают. Слитую реакционную жидкость разбавляют двукратным объемом диоксана и подвергают лиофилизации, затем полученный продукт сушат под вакуумом с целью получения материала в виде светло- желтоватых хлопьев, которые растирают и получают 7,8 г порошка. Инфракрасный спектр поглощения получен методом порошкообразного.), КВг. Он подтвердил через оптические плотности с волновым числом 1780 и 700 , что полученным порошком является частично полу-н-бутил-этерифицирован- ный сополимер стирола и мллеинового ангидрида (БуСМА), в котором содер- жание оставшихся колец малеинового

31428206

нгидрида составляет 30,5 мол.% (кос10 /м а м н вв пр ще щи

лец малеинового ангидрида в одной молекуле 1,7).Согласно ГПХ Мв составляет 1480, Мч - 1290, а Мв/Мч равно 1.15.

Г. Реакция ИКС с БуСМА. 0,20 г неокарзиностатина (ИКС) растворяют в 5,0 мл 0,8 М водного раствора бикарбоната натрия при охлаждении льдом в темноте. В раствор порциями добавляют порошкообразный БуСМА в количестве 1,02 г. Далее реакцию осуществляют в течение 97 ч при этом рН раствора поддерживают на уровне примерно 8,5, чтобы получить степень превращения первичных аминогрупп ИКС 97,5 мол.%. Степень превращения таких первичных аминогрупп может быть определена методом ТНБС в соответствии с которым небольшое количество пробы, взятой из реакционной жидкости, разбавляют, а затем осуществляют взаимодействие зтой пробы с тринитробензол(моно)сульфо- кислотой с целью получения производного нитробензола, который определяется на основе количества первичных аминогрупп спектрофотометрически с использованием спектрометра поглощения в диапазоне 420 нм.

Полученную реакционную смесь переносят в трубку для диализа (фирма Юнион Карбайд Ко, Лтд, США), которая отсекает молекулярные веса 8000, при этом диализ осуществляют в течение трех дней против водного 5 |мМ раствора бикарбоната аммония при охлаждении льдом в темноте, одновременно иногда заменяют внешний слой жидкости.

Часть частично очищенного раствора разбавляют при помощи 10 мМ водного раствора бикарбоната аммония,, чтобы обеспечить рН 7,9, Снятые ПК- кривые получены с использованием колонны 1-3000 СУ, производтаюй фирмой Тойо. Сода Уо, Отд. Пики (фиг.2а,б) при времени удерживания 16 мин при длинах волн 254 и 280 нм имеют максимумы, примерно равные друг другу и .связаны с производными формулы (I), в то время как поглощение при време- ни удерживания 19 мин в .диапазоне 254 нм связано только с гидролизован ным и с paзopвaнны кольцом продуктом БуСМА.

Д. Очистки НКС-производных формулы (I).

5

Половину количества диализирован- ной реакционной жидкости сливают в колонну, имеющую внутренний диаметр 50 мм, длину 60 см (К 50/60, фирма Фармациа Фанн Кеминэлз АБ, Уппсала, Швеция) и заполненную субстратом Сефадекс G-75, а злюирование осуще ствляют с объемной скоростью 6,0 мл/ 0 /мин при в темноте при помощи 5 мМ водного раствора бикарбоната аммония. Непрерывно осуществляют измерение поглощения элюата в диапазо- , не с длиной волны 254 нм (фиг. 3). Фракцию элюата с 60 по 100 мин после введения пробы прдвергают -затем лио- филизации. Эту процедуру повторяют при тех же условиях. Полученные очищенные НКС-производные, (I) имеют общий вес 186 мг.:

При проведении электрофореза с использованием полиакрил амид ного геля, содержащего додецилсульфат натрия, полученное ИКС-производное дает одно пятно. Как показано на фиг, 4а, ГПХ получен при рН 7,9 с использованием колонны 1-3000 СУ, производимой фирмой Тойо Сода Ко., Лтд, и подвижной фазой - 10 мМ водньм раствором бикарбоната аммония, имеет острый пик, .

Элементарный анализ, вес.%: N 11,43; С 51,99; Н 6,32.

Средний молекулярный вес НКС-про- изводного в пересчете на содержание азота составил 13300. Средний молекулярный вес рассчитьгоался по следующей формуле:

0

5

0

5

Md Мц-NN/Noi,

40

MN NN где Md - средний молекулярный вес НКС-производиого , молекулярный вес ИКС, равный 10700;

содержание азота в соответствии с элементарным анализом ИКС, 14,24 вес,%; Nd - содержание азота (вес,%) в соответствии с элементарным анализом НКС-производного, Средний молекулярный вес НКС-производного, имеющего формулу (I),составляет. 10700 + 1480 X 2 13660 в пересчете на средневесовой молекуляр- нь1й вес Е-СМА (1480), полученный при помощи ГПХ. Так как указанный средний молекулярный вес в пересчете на содержание азота согласуется с этим значением, можно представить,что л полученном НКС-производном два остатка частично полуэтерифициро- ванных остатков сополимера стирола и малеиновой кислоты связаны с одним остатком ИКС, как показано в формуле (I). Средний молекулярный вес (Мч) частично полуэтерифицированного остатка сополимера стирола и малеино- вой кислоты, содержащегося в НКС-про иэводном, определяется из среднего молекулярного веса НКС-прризводных, «определенных по следующей формуле:

Mr

где Mr

(Moi.- Мм)/2,

средний молекулярный вес частично полуэтерифицированного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты в ВКС-производном; Mfti - средний молекулярный вес

НКС-производного; MN -. молекулярный вес ИКС

(10700).

Согласно этой формулы Mr равен 1300, Это значение не очень отличается от средневесового молекулярного веса исходного материала Е-СМА, который равен 1480 и получен при помощи П1Х.

Соединение не имеет явно вьфажён- ных точек плавления, оС1 - 34,3 .

- Ж и УФ-спектры подтверждают структуру НКС-производного формулы (I), являющегося предметом изобрете- ния (фиг. 5а и 6а).

Пример 2. Фракционированный СМА с MB 1480 и Мч 1230 (Мв/Мч 1,20) получают при помощи процедуры, аналогичной в примере 1, за тем исключением, что смешанный растворитель ацетона и н-гексана в отношении 3862 используют в качестве третьей смешанной жидкости ацетона и н-гексана при фракционировании СМА, полученного в примере 1А. 4,0 г фракционированного СМА подвергают этерифи- кации при тех же условиях, что в примере 1В, за исключением того, что при этом используют 0,80 г этанола, 12 мл диоксана и 40 мг ацетата лития В результате было получено 4,9 г частично полу-этил-этерифицированно- го сополимера стирола и малеинового ангидрида (сокращенно именуемого ЭтСМА), содержание колец ангидрида в котором составляет 24,0 мол.% (в среднем 1.,6 колец ангидрида на одну

молекулу). MB 1580 и Мч 1340 (Мв/Мч 1,18)-.

По аналогии с примером 1Г 0,2 г ИКС растворяют в 5,0 мл 0,8 И водного раствора бикарбоната натрия, 1,2 г

ЭтСМА добавляют порциями в получен- ный раствор. Б течение .этой реакции рН раствора поддерживают на уровне примерно 8,5. Спустя 27 ч после начала добавления степень Превращения первичных аминогрупп составила 97,5 мол.%. Сразу после этого реакционную жидкость подвергают диализу, а 38 МП диализата подвергают гелевой

фильтрации. Затем фильтрат подвергают .лиофилизации, в результате чего получают 148 мг очищенного НКС-производного формулы (I).

При электрофорезе полученное НКСпроизводное дает одно пятно. ГПХ приведена на фиг. 4б. Элементарный анализ, вес. %: N 10,74; С 52,90; Н 6,18. Средний молекулярный вес в пересчете на эти данные составляет

14200, а средний молекулярный вес частично полу-этил-этерифицированно- го остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты составляет 1750. Сняты УФ- и ИК-спектры (фиг. 56 и

6б). Эти данные подтверждают структуру НКС-производного, являющегося предметом изобретения, которая описы -. вается формулой (I).

Пример 3. СМА, полученный в

примере 1А, подвергают фракционированию с использованием метода, описанного в примере 1Б, за исключением того, что объемная фракция ацетона во второй и третьей смешанных жидкостях ацетона и н-гексана составляет 23 и 37% соответственно, в результате чего получают 9,1 г фракционированного СМА с MB 1480, Мч 1250 (Мч 123iO при определении методом

ОДП), а Мв/Мч 1,18. 4,0 г полученного фракционированного СМА взаимодействует, как в примере 1В с использованием 1,60 г моноалкилового эфира этиленгликоля в качестве спирта

и 0,04 г ацетата лития. В результате получают 4,9 г частично полу-2-эток- сиэтил-этерифицированного сополимера стирола и малеинового ангидрида (сокращенно именуемого Эт-Селл-СМА),

содержание колец ангидрида в котором составляет 25,4 мол. % (в среднем 1,6 колец ангидрида на одну лу). MB 1700 и Мч 1440 (Мв/Мч 1,19).

По аналогии с примером 1Г Эт- Селл-СМА добавляют и растворяют порциями с общим количеством 1,3 г в 5,0 мл 0,8 М водного раствора бикар- боната натрия, в котором было предварительно растворено 0,2 г ИКС. Поддерживая рН раствора на уровне примерно 8,5, осуществляют взаимодействие. Спустя 98 ч после начала добав- ления Эт-Селл-СМА степень превр ащени аминогрупп составила 97,6 мол.%. Полученную таким образом реакционную смесь подвергают диализу, гелевой фильтрации и лиофилизации. В резуль- тате получают 189 мг очищенного НКС- производного (I).

При электрофорезе полученного НКС производного наблюдают одно пятно. ГПХ приведена на фиг. 4в. Данные эле ментарного анализа, вес. %; N 10,72, С 53,49; Н 6,38. Средний молекуляр- ньй вес в пересчете на эти данные составляют 14200, а средний молекулярный вес частично полу-2-этокси- этил-этерифицированного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты 1750. Сняты УФ- и ИК-спектры (фиг.5в 6в). Эти данные подтверждают структуру НКС-процзводного формулы (I), являющегося предметом изобретения (фиг. 4г, 5г, 6г).

Пример 4. Фракционированный СМАсМв 1480 и Мч 1230 (Мв/Мч 1,2) приготовлен по методике примера 1, за, исключением того, что в качестве третьей смешанной жидкости ацетона и н-гексана в фракционирзтощем СМ, полученном в примере 1, используют смешанный раствор ацетона и н-гексана в соотношении 38:62.

6,0 г фракционированного СМА под- в ергают частичкой полуэтерификации с использованием 1,60 г н-.бутилового спирта, 16 мл диоксана и 0,06 г ацетата лития. В результате получают 6,3 БуСМА, содержание колец ангидрида в котором составляет 44,4 мол.% (в среднем 2,8 кольца ангрщрида на одну молекулу). Мв составляет 1660, а 1Ш - 1390 (Мв/Мч 1,18). Полученный таким образом БуСМА взаимодействует в течение ч, как в примере 1Г,.в результате чего получают степень превращения первичного амина в ИКС 99,3 мол.%. Продукт подвергают диализу, гелевой фильтрации и лиофилизации. В результате получают 182 мг очищенного ИКС-производного

5

Q 5

о

0

5

0

5

0

5

формулы (I). Данные элементарного анализа, вес. %: N 10,67; С 52,06; Н 6,22. Средний молекулярный вес равен 14300, а средний молекулярный вес частично полу-н-бутил-этерйфици- рованного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты равен 1800,

г ,,7.0 „ „о

jc«lj о - J л , 8 ,

Пример 5. Фракционированный СМ подвергают частичной полу-метил- этерификации с метанолом, в результате чего получают частично полу-ме тил-этерифицированный сополимер стирола и малеинового ангилрвда (сокра- именно Ш енуемый МеСМ), содержание колец ангидрида в котором составляет 25,0 мол.% (в среднем это содержание составляет 1,7 колец ангидртвда на одну молекулу), fв 1510 и Мч 1280 (Мв/Мч 1,18). Полученнтлй таким образом МеСМ взаимодействует с ИКС, затем осуществляют очистку по аналогии с примером 2 и выделяют соответствующее НКС-производное формулы (I) . Получают следующие да1-.яые элементарного анализа, вес. %: N 10,87; С 52,81; Н 6,11. Средний моле- кулярньй вес составляет 14000, а средний молекулярный вес частично полу-меткл-этеркфицированного остатка сополимера стирод.а и малеиновой кислотьг - 1650

П р и м е р 6. (1 ракционированный СМА подвергают частичной этерифика- ции с использоканием 1,3-диэтокеи- -2-пропанола, в результате чего получают частично полу-1-(этоксиметкл)-2- -зтоксиэтил-этерифицированный сополимер стирола и малеиновогоангидрида,содержание колец ангидрида в котором составляет 25,3 мол.% (в средней колец- ангидрида на одну молекулу)j MB 1960, Мч 1650 (Йв/Мч 1,19). Полученный таким образом сополимер взаимодействует с ИКС. Затем полу- ченньй продукт очищают по примеру 3, чтобы вьщелить соответствукщее производное НКС формулы (I). Данные элементарного анализа, вес.%: N 10,2; С 53,58; Н 6,5К Средний молекулярный вес равен 14900, а анало- гичньй показатель длл частично полу- -1-(этоксиметил)-2-этоксиэтил-атери- фицированного остатка сополимера стирола и малеиноЕой кислоты - 2100. J

Пример 7. НКС-прокэводное формулы (I) получают в соответствии с описанной процедзфой используя

БуСМА (MB 1620, Мв/Мч t,10), который был получен предварительно при услсзвиях, аналогичных в примере 1А- 1ВJ за исключением того, что перекис дикуменилй используют в качестве катализатора полимеризации вместо пе рекиси бензоила.

После того, как 0,67 г ИКС растворяют в 20 мл i ; 0,8 М водного раст вора бикарбоната натрия при охлаждении льдом и без доступа света, в полученный раствор добавляют порциями всего 8,00 г БуСМА при перемешивании затем реакцию осуществляют в течение 50 ч, при этом рН реакции поддерживают на уровне более 8,,3. Степень превращения первичных аминогрупп ИКС составляет 97,8 мол..% (общая концентрация ИКС и, БуСМА 30%) .

Полученную реакционную смесь разбавляют водой до объема 90 мл, а затем сливают в колонну, имеющую внутренний диаметр 50 мм и длину 90 см, заполненную субстратом Сефадекс G-75 (фирма Фармация Фаин Кемикэлз АБ, Уппсала, Швеция). Элюирование осуществляют с объемной скоростью 4,0 мл/мин в темноте при 5 С с использованием 5 мМ водного раствора бикарбоната аммония в качестве несущего растворителя. По аналогии с примером 1 одновременно с получением сп ектра поглощения элюата в диапазоне с длиной волны 254 нм собирают фрак- цию элюата с 1 2/3 ч по 6 2/3 ч после введения пробы. Объем этой фракции составляет 1050 мл. Ее концентрируют до объема 60 мл с использованием мембранного ультрафильтра 6М 14539 (фирма Сарториус БмгХ, Западная Германия: отсекается молекулярный вес 10000) (фиг. 7).

Одну половину концентрированной жидкой фракции, а именно 30 мл,нано- сят на колонну диаметром 50 и длиной 6Х) см, заполненнзто субстратом Биогель Р-60 (фирма Био-Рэд Лаборато- риз США), элюирование осуществляют с. объемной скоростью 1,2 мл/мин в темноте с исцользованием 5 мМ водного раствора бикарбоната аммония. Собирают фракцию элюата с 12 3/4 по 16 1/12 ч после введения пробы, а концентрацию осуществляют с исполъ- зованием мембранной ультрафильтрации, затем проводят лиофилизацию. Выход очищенного продукта, НКС-производно- го формулы (I), составляет 266,5 мг.

j

ю 15 0

5 0 о

j

5

В результате элементарного анализа были получены следующие данные для производного, вес.%: N 11,31; С 52,97; Н 6,40. Средний молекулярньй вес составил 13,470, а средний молекулярный вес частично полу-бутил-этерифици- рованного сополимера стирола и малеи- новой кислоты - 1,385 W -34,3.

Проведены биологические испытания производных неокарзиностатина.

Биологическая активность была измерена для каз8дого из НКС-производ- ных, полученных в примере 1. Порции в двадцать мл НКС-производного, име- няцие различные концентрации, помещают на бумажный диск диаметром 8 мм, который помещают на агаровую пластинку с культуральной средой (Мюлер-Хин- тон), на которую предварительно прививают штамм Sarcina lutea PCI 1001. Спустя некоторое время, необходимое для диффузии (5 ч) при 4 С культивирование возобновляют при 37°С в течение 12° ч. При этом определяют концентрацию разбавленного раствора, необходимую для получения диаметра ингибирования в 13 мм. Такую эффективную концентрацию ИКС обозначают через 1, а определенные концентрации НКС-производных приводятся н виде относительных значений в пересчете на значение 1 ИКС. Полученные относительные значения используют в качестве показателя биологической активности.

Что касается острой токсичности относительно мышей, то разбавленный раствор применяют один раз внутривенно путем введения раствора в хвост самца мьши 1СЯ.(одна группа - 6 мы- ; шей) в возрасте 5-6 недель, затем за упомянутыми мьшами наблюдают в течение 14 дней для определения величины .

Данные относительно биологического анализа с использованием штамма lutea и острой токсичности приведены в табл. 1. Из полученных результатов видно, что НКС-производные, получаемые в условиях предлагаемого способа, обладают биологической активностью, сравнимой с биологической активностью ИКС, но острая токсичность первого гораздо ниже. На фиг, 8 приведена кривая инактивации, получен- ; ная при помощи изменения остаточной биологической активности против lutea НКС-прсизводного.

При инкубировании НКС-проиэводно- го формулы (I) против lutea в концентрации 100 мг/мл в свежей крови человека при температуре 37°С обнаружено, что время потери половины активности в цельной крови составляет 32 мин и 8 мин для НКС-производных, полученных в приведенных примерах. Аналогичный показатель для ИКС, кото- JQ рый используют в качестве контрольного соединения, состайил 2-3 мин. Следовательно, НКС-производные, полученные в условиях предлагаемого способа, являются намного более стабиль-.j5 ными в том, что касается их биологической активности в цельной крови или сыворотке по сравнению с исходным НКС.

20

Кроме того, определяют с использованием НКС-производного из примера 1 противоопухолевую активность против карциномы Эрлиха (твердого типа). Полученные результаты приведены в 25 табл. 2. НКС-производное, полученное по предлагаемому способу, обладает ротивоопухолевой активностью, равной ктивности НКС,

30

Таблица. 1

КонтрольныйНКС

Т,33

Примечание. 1. Используют штамм Sarcina lutea PCI-1001.

2. Концентрация, при которой зона ингибирования имеет диаметр 13 мм на агаровой пластинке, указана в ввде относительного значения, при этом соответствующую концентрацию НКС принимают в качестве стандарта.

Та б л и ц а 2

Опухоль; Карцинома Эрлиха (тверды fHn) .

Привитое количество клеток: 5 х X 10 /мьшь (подкожным способом).

Мыши: ddY , возраст - пять недель

Применение препарата: внутрибрю- шинным способом один раз в день (всего 5 раз): в 1,2, 4, 5 и 6-й день после трансплантации опухоли, Оценка действия препарата: скорость ингибирования опухоли (%) равна /C-T/xlOQ/C, где С - средний размер опухоли (мм) в контрольной группе, Т средний размер опухоли (мм ) в обработанной группе.

Оценка скорости ингибирования опухоли была получена в конце второй недели после трансплантации опухоли ; Долю Выживших мьшей подсчитывают через 4 недели после трансплантации опухоли.

Производные неокарзиностатина общей формулы (I) обладают высокой жи- рорастворимостью (в липйдоле), в то время как неокарзиностатин и его известные производные растворяются только в воде.

Таким образом, получаемые предла- гаемым способом производные неокарзиностатина менее токсичны, чем неокарзиностатин, сравнимой бнологической активностью, в 4 раза дольше сохраняют свою биологическую активность, чем неокарзиностатин, при этом обладают способностью растворяться в воде.

Формула изобретения

Способ получения производных неокарзиностатина общей формулы (I)

БуСМА - ИКС - By СМ,

50

де ИКС - двухвалентный остаток неокарзиностатина, в котором один атом водорода удален из каждой первичной аминогруппы в остатке аланина в N-конце неокарзиностатина и в остатке лизина в 20-й позиции от N-конца неокарзиностатина;

БуСМА одновалентный частично эте- 55 рифицированньй бутанолом сополимерный остаток стирола и малеиновой кислоты.

имеющий средний молекулярный вес Мн 1480-1660 и отношение MB к среднечислово- му молекулярному весу Мч 1,10-1,18 MB и состоящий из следующих структурных блоков: остаток стирола

-012 - СНчастично этерифицированный бутанолом остаток малеиновой кислоты

- сн

-сн

COOCt g СООН

остаток малеиновой кислоты

-сн-сн

1 I

СООН СООН

остаток формулы

-СН- сн - I I

О С СООН

I

где гидроксильная группа одной карбоксильной группы остатка малеиновой кислоты удалена и этот карбоксил соединен с неокарэиностатином, отличающийся тем, что проводят реакцию неокарзиностатина в водной среде с порошкообразным частично этерифицированным бутаноЛом сополимером стиролаи малеинового ангидрида, состоящего из структурных блоков остатка стирола

50

ОН -

- СИ

частично этерифицированного бутанолом остатка малеиновой кислоты

-СИ

I

СИ

COOCiJIg СООН

и остатка малеинового ангидрида

- сн - сн-5

взятым в массовом соотношении 1:5- ю 12 при суммарной концентрации неокарзиностатина и частично этерифицн- рованного бутанолом сополимера, стирола и малеиновой кислоты 19-30%, затем ренкционную массу подвергают диализу, остаток фильтруют через сефадекс G-75 или биогель Р-60, продукт элюируют 5 мМ водным раствором бикарбоната аммония в темноте при со скоростью 4-6 мл/мин rt лио филизуют.

Изобретение относится к способу получения производных неокарзиноста- тина формулы БуСМА-НКС-БуСМА, где ИКС - остаток неокарзиностатина (2+), в котором один атом И:удален из каждой первичной аминогруппы в остатке аланина в N-конце НКС и в остатке лизина в 20-й позиции от 1 -конца НКС. БуСМА(1+) частично этерифицирован- ный бутанолом сополимерный остаток стирола и малеиновой кислоты со средней мол. массой 1480-1660 и отношением мол. массы к среднечисловой мол. массе 1,10-1,18x10 , состоящий из структурных фрагментов: а)стирола.

U9ij XufiuvfCKau fdSue {Оолей на миллион)

«cs

I

/( /2 Г« 1Ъ 1Ь W 22 2Ц 2В 2В W Г2 /4 16 18 20 22 24 Время (/depmt/SoHuff(MUff) Время удер)ниЬания(мин.}

О

50100150

Время удерживания (мин ) Фие.З

Фив. 2

уде01ки6ания. (мин) .

„juLJi. /1Ж;

ii it 16 IB20 гz2 Ч°ЖУ Время ydepmuOoHUR минi д Фик.

Виемй удер кидания (fiuH.)

Jfy IS 18 20 22 lit 26 28

- - J HT

П J6 18 20 22 г 2S 28

Время дЬертиЬани/1(нин)

9

хао. 2SOO 2000 то поо т SOD дш гш

BoflHOioe число (

то то т soo Ваанобое число (fH-ij

t

2800 гооо isoo rzoo soo SBO

3200 uoa - ,, ,,

BoffHoSoe число (

i

|i

I gi

w

mo 2800 mo rsoo izm soo т

3200 2WOSojimioe wcnofcfi- l

Фив. 5

zftQ 280 т Длина долны(нм)

ь

5

т ztfO 2ВО т т too

Длина Волны (HMJ

200 280 320 ЗВО ifOO

Длима Волны (Hff)

«

10 i

Сл

I о 1о

0,7

lfl,ff

I.

gv

I о/

л Y

S . M 2 itQ 280320 360 00

ut.6

Длина Волны-(нп

S

г

12 Ify Г6 f8 20 22 2ft 26

BpCMff удертибония (MUff)

икс-производное (Лр.7)

15 фил,8

Редактор М.Петрова

1(5 60 7590

Вреня инактидоции {fiUH)

Составитель В.Волкова

Техред А.Кравчук Корректор С.Черни

f м

2BQHH