Гидрохлорид 4-амино-3-окси-3-фенилбутановой кислоты,обладающий гипертензивной активностью Советский патент 1988 года по МПК A61K31/197 A61P9/12 

СП С

Изобретение относится к классу аминокислот, к производному гамма- аминомасляной киел оты, а именно к гкдрохпориду 4-амико-3-окси-3-фе- . j нилбутановой кислоты, который обла-- дает гипертезивной активностью

Известно соединение, имеющее близкую структуру к данному веществу, - гидрохлорйд А-амино-3-фенилёутанс- to вой кислоты (фенибут), который не обладает эамёттлч действием на уровень артериального давления. Кроме того, предлагаемое соединение обладает в 2-3 раза меньшей токсичностью, чем ts фенибут. Синтез, этого соединения яв- ляется двухстадийным и заключается . S пблучеюш этилового эфира 2-этрк- сикарбонил-4-ацётиламино-З-ркси-З- -фенилбутановой кислоты путем взаимо- 20 действия бронмалонового эфира ссо- -ацетиламиноацетофеноном в присутствии lotmcosoft аьши в безводном орга- ническом растворителе при нагревании с последуюцим воделением продукта 25 и поеледуяяцни гидролизом его соляной кислотой

П р и и е р t. Стадия 1. Этиловый эфир 2-этоксикарбоннп-4-ацетил амино 3-окси-3-фенилбутановой KHCjfo- 36

.ТЫ.; ,, ; . - / . . , ;. , ., ,

Смесь 3,59 г (0,015 моль) бромма- V лонового эф1ра и 1,45 г цинковой пы- ; ли в 12 МП безводного бензола нагре- вают на водяной бане. К нагретЫ смеси приливают-несколько миллилитров 2,5 г (0001 моль) Ф-аце-птамл- нсацетофеноиа 012 мл безводного тет- рагидрофурана. После / чала реакция

постепенно прикатывают весь раствор лп («)-ацетиламиноацетофенона,выяерда1ва-

ют смесь при нагревании на водяной . бане в течение 1,5 ч, затем охлаждают до и разлагают- 40 мл 2%-ной : ,уксусной кислоты, &«есь экстрагируют .

эфиром, эфирные ийтяжки промывают хо; лодкой водой, 5%-ным pacTlBopoM KaHCOj, снова холодной водой и сушат яад безг водным MgSp. Растворитель отгоняют. Ваделяют 3,33 г (64%) зтипового эфира 2-этоксикарбонил-4-ацетиламино- 3 50 6кси-3-фенилбутановой кислоты с

Т.ПЛ. 75; С. . . . ., ; :

Найдено,%: С 60,82, 60, 6,94; N 4,40, 4,36.

С„Нг,НОб Вычислено,: С 60,50; 6,81

N 4,15. - .., .

J5

5

. j

tots . 20 25

36

,

V ;

лп

: .

, 50

.

J5

5

ИК-спектр, см : 1690, 1740 (); 3200-3650 (ОН, NH).

Стадия 2. Гчцрохлорид 4-амино-З- -окси-4-фенипбутановой кислоты.

0,1 г (0,005 мЬдь) этилового зфира 2-этоксикарбонилг4-ацеТш1амино-3- Ок- си-3-фенклбутановой кислоты кипятят с 10 мл разбавленной НС1,(1:1) с обратным холодильником в течение 9 ч. Гидролизат фильтруют через поркетый стеклянный фильтр, упаривают в в.ку уме 10-15 мм рт.ст. Вьделкгот 0,06 г (88%) гидрохлорида 4-амино-З-окси-З- -фенилбутановсй кислоты ст. Ш1. 172 с (разложение).

Найдено, С 52,13; Н 6,14; N 6,01.

C,oH,4NO,Cl

Вычислейо,; С 51,83; Н 6,04; N 6,04..

ИК-спёктр (перфтор, масло),см : 1720 (С ;0); 2700-3700 (ОН, NH).

Гидрохлорид 4-амино-З-окси-З-фё- нйлбутановой кислоты обладает отчетливым гипертензивным свойством,способностью повышать насыщение мозговой ткани кислородом, снижает тонус моз . ; говых- состоов к увеличивает мозговой . кровоток.

Это вещество среди аналогов ГАМК единственное, которое имеет относительно высокую гнпертензивную а ктнв-: ность и НИЗКУЮ токсичность ( 2084 мг/кг).

Влияние данного соединения на . сердечно-сосудистую систему испытывают на крысах и кошках. Животньк наркотизируют нембуталом (50 мг/кг вйутрибрюшинно). Уровень системного артериального давления (САД) регист- рируют в общей сойной артерии обычным способом. Минутный объем крови (МОК) - определяют методом тер одилюции 06- щее периферическое сопротивление (ОПС) ра ссчитьюают по формуле Виг- герса. Ударный объем (УО), работу левого ж елудочка (РЛЖ) определяют расчетным способом. О работе сердца судит по ЭКГ, которую регистрируют в трех стандартных отведениях. Часть опытов выполнена на ненарко- тизнрованных кошках, которым вживля- .ют два катетера - один в,общую сонную артерию для регистрации САД в свободном поведении, другой в наруя(- ную яремную .вену для введения данного . }й вотных берут в опыт через 2-3 дня после операции. Влия 5

иие соединения на мозговое кровооб ращение изучают методами реоэнцефа- лографии и фпуометрии (РКЭг-2). Регистрацию интенсивности кровотока в срсуда с мозга реографической методикой осуществляют с помощью реогр4- фв типа 4-РГ-1А на 4-канальном энцефалографе (4ЭЭГ-3) Под нембута- ловым наркозом (50 мг/кг) предвари- ю тельно отпрепаровывают мягкие ткани головы, в двух .точках лобной ив двух точках затылочной области выводят игольчатые электроды диаметром 1-2 мм для регистрации суммарного : is кровотока мозга в орбитально-затьточном отведении. Интенсивность кровенаполнения оценивает ся по реографиче скому индексу 1, относительному объемному пульсу (РР%о). О тонусе круп- 20 ньк сосудов судят по показателю А/Тх х100%, т.е. по отношению длительности анакротической фазы реограмм к

. дпитель.ости всего, сердечного цикла, вьфаженному в процентах. Тотальньй 25 объемный кровоток в сосудах мозга изучают методом флоуметрии с использованием электромагнитного расходомера крови РКЭ-2 по двум позвоночным и одной внутренней сонной артерии. зо

В отдельной серии экспериментов изучено влияние соединения на напряжение кислорода в структурах голов- .ного мозга и бедренной мышце крыс. Исследования выполнены на полярогра- фё 1,Р-7. Рабочим электродом слуямт электрод с диаметром рабочей поверхности 0,2 мм, изготовленньй из платины высокой чистоты (99,99%). Элек- тр одазм сравнения (вспомогательным) 40 является каломельный электрод. Изучаемое соединение вводят в дозе 50 мг/кг внутрибркишнно в виде вод- ; ного раствора. В каждом опыте напряжение кислорода определяют в се ми точках (общее количество 210). . В отдельной серии экспериментов изу- . чают кислотно-щелочное равновесие по- еле внутрибрюшинногО введения веще- ,ства в доэе 50 мг/кг в виде водного дд pacTBOpk из расчета 0,1 мл на 10 г веса. Определение-параметров кислотно-щелочного равновесия проводят по эквилибрационной методике Аструпа на анализаторе кислотно-щелочного gg равновесия АВС-1, Acid-Base Cart фирмы Radiometer Copenhagen.nonyr .. ченные данные статистически обраба-

тываются. Острую токсичность (IJ),) .

.35

45

5

ю is

20

25 зо

40

. дд gg

.35

45

определяют в опытах на белых мышах. Данные обрабатывают по методу Миллера и Тейнтера.

Результаты испытаний.

В опытах на наркотизированных крысах отмечают отчетливое продолжитель- . ное повышение САД после внут1зивеяно- го введения соединения № 1868678 в дозах 10, 25, 50, 100 и 200 мг/кг.

Результаты экспериментов в суммар7 ном виде представлены в табл.1.

Влияние соединения на уровень системного артериального давления и про- долз5ительность сосудистого действия изучено также на наркотизированных и ненаркотизированных кошках в свободном поведении

В табл.2 приведены данные об изменении уровня САД у наркотизированных кошек (нембутал 50 мг/кг) под влия- . нием соединения № 1868678. ...

В табл.3 приведены данные об изменении САД у кошек в свободном поведении под влиянием соединений № 1868678 в дозе 50 мг/кг (средние данные 5 наблюдений).. .

Дпя выяснения структуры гсмодина-. мических сдвигов после введения исследуемого соединения были проведе- ны опыты на кошках. В этих экспе- риментах регистрируют: САД, МОК, ОПС, РЛЖ, частоту сердечных сокращений (ЧСС) , УО. Установлено, что в опытах на кошках данное соединение оказывает еще более выраженное гипер- тензивное действие.

Данные о влиянии соединения К 1868678 в дозе 25 и 50 мг/кг на основные показатели центральной гемо- . динамики в опытах на кошках (по 5 на- блюДений с каждой дозой) приведены в табл.4.

Таким образом, полученные данные в опытах на крысах и кошках свидетельствуют о том, что соединение ff 1868678 в дозах 10, .25, 50, 100 и 200 мг/кг обладает отчетливым и продольжитепьным гипертензивным дей- ствием. Доза 100 мг/кг являлась минимальной дозой, при введении которой уже наблюдается выраженное повышение САД. Наибольший гипертенэивный эффект отмечают после введения исследуемогй . соединения в дозах 25,50 и 100 мг/кг особеино при его введе1 ии ненарко- тизироваиным кошкам. Гипертензия .а этих опытах развивается постепейно И сохраняется в течение 3-4 ч. v

Повьшеиие САД при введении соединения № 1868678 происходит вследстви увеличения сердечного выброса. ОПС меняется менее значимо И-, как прави - ло, кратковременно, чес в опытах на кошках практически не меняется, а УО возрастает параллельно изменениям МОК. РЛЖ значительно возрастает в первые 30 мин, а в последующем она уже существенно не отличается от исходной, .-

В отдельной серии экспериментов на наркотизированных крысах изуча ют влияние соединения № 1868678 .на мозговое кровообращение методом ре- оэнцефаяографии.- .

Суммарные данные, представленные в табл.5, свидетельствуют о том,что соединение I 1868678 в дозах 50 и 100 мг/кг выраженно увеличивает реографический индекс и относительный объемный пульс f уменьшает тонус П&-

.рёбральных сосудов (уменьшение А/Тх х100% на 20-30%). Указанные измене- ния показателей РЭГ позволяют считать, что соединение 1 1868678 увеличивает кровенаполнение мозга и уменьшает тонус мозговых сосудов.

В отдельных экспериментах, в кото

.рых регистрируется суммарный кровоток в магистральных артериях мозга методом флуометрии, также отмечено, что соединение № 1868678 выраженно

увеличивает мозговой кровоток, что согласуется с РЭГ. В цепях дополнительной оценки влияния исследуемого соединений на мозговое кровообращение изучают его влияние на напряжение кислорода в структу-

pax головного мозга, для сравнения также регистрируют напряжение кислорода в бедренной мышце (табл.6).

Полученные данные свидетельствуют , что после введения соединения f 1868678 выраженно и статистически достоверно пьвьш1ается напряжение кислорода в тканях головного мозга. В то же время повышение напряжения кислорода в бедренной мьш1це выражено менее значительно.

Известно, что на тонус мозговых сосудов с ествениое влияние оказывает изменение рН крови. Для выяснения действия соединений Р 1868678 на показатели кислотно-щелочного равновсия, и газовый состав крови проведена отдельная серия экспериментов, суммарные данные кotopoй при введени соединения в дозе 50 мг/кг представлены 8 табл.7.

Исследуемое вещество вызывает нв- значительные изменения кислотно-ще-. лочного статуса дрга1шзма, статистически недостоверные, находящиеся в пределах йормы.

Таким образок, у/9,-дизамезценнога соединения t 1868678 в сравнении с фенил($утЬм появляются новые фармакологические свойства - отчетливые гипертензивные свойства, способность повышать насыщение мозговой ткани кислородом, сннжйтъ тонус,моз говых сосудов и.увеличивать мозговой кровоток. Это вещество среди аналогов ГАМК ёдииственное, имеет 6т- аоситеяьно высокую гипертензивную активность и низкую токсичность.

Т а б л к ц а 1

100 А +916+1415 +1944, - -18±4,5 415±4 +15i4

: . . - f ., 200 4 -318 +1114 +13±4 +16i3,7 +16+3,7 +14±3

Статистически достоверные изменения САД.

25 50

5

4

+6±5 +813

+14±6

+18+9 +20i4 +20±4 +17i5 +16±7

Исход- iloiB САД, 1ш-рт ет

10849,3 23t6 + +28t7 +28t8 24tl8 -+27110); +t4t9

;ШК

25+3049,2 +324$

1428750

.8 Продолжение табл.1

Таблица 2

+18+9 +20i4 +20±4 +17i5 +16±7

|Т бля1|а 3

Таблица 4;

+8+6

. +9±6

+12i6,3 ,

9

1428750

tt.ip 6 ч а н и ё. + - увеяиче{11 е, - уменьшение - изменения показателей, статистически достоверные (Р г: 0,05).

0 -5,,9 г8,4,3 -11,3,.0 О, 2,,9 3,,08+3,60,,3

50 - -5,,8 -16,,2 -0,,0 -1,,6 ,8-9,,3-3,,,7

/

200, -9,,6-25,,7 4,,14 ,0 4,,,,5-19,,7Ь,,7

{| р в W в ч « н. и i el - угол яаклЪйа .«асА ТвльмоЙ к внакротйчвской фаяе кривой.

10

Продолжение табл.4

т а в л и ц а 5

1

to 2,,6

50 9.3+4,3

200 1,,0

-I,,3

4,,7

22,,7

,,63,,7 . 0,,1 -21,,7 -1,,9 ;

17,,9 3,,7 -11,,12 ,1 . ff,,3 -6,,3 -12,,4 ,,9 23,,6 .23,,1 -0,,3

f

.1

I

34,337,740,942.44},t43,641,541,в43,849.4 46.7 47,S49.2

24,703,473,60 3,60.3,6d3,563,563,03 3.03 4,42 4.«75.1

30,7t42,8243,68.45,,1044.745,139,6742,2441,8 43,3 45.6«5.3

3,415,105,484,54 5,48S,6t5,415,415„76 5,6S 4.86 5.043,9

1428750

J2

Нродолженке табл.5

1 ii в я л и я (

41,9 5,i7

.« а я ц

« « и