Способ определения гепарина в крови Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

ю

со

Изобретение относится к медицине И может быть использовано для раннег выявления нарушений противосвертываю |цей системы кротки, связанных с иэме- нением величины резервного внутриклеточного гепарина, способного вы- |делиться в кровоток у больных с раз- йичной патологией (сердечно-сосудис- той системы, органов дыхания, почек и др.) ,

Цель изобретения - повшление точности способа за счет выявления резерва гепарина в клетках крови.

Способ осуществляют следующем образом,

i В две силиконированные пробирки с ОрЗ мл раствора цитрата натрия (0,11 М) набирают 3,0 мл венозной крови, свободно вытекающей из иглы, и тщательно перемешивают трехкратным переворачиванием пробирки прикрытой полиэтиленовой пробкой, В первую пробирку добатзляют 0,3 мл: лактобакте рина в концентрации 10 мг/мл во вто рую 0,3 мл физиологического раствора и вно1 ь пробиркИ тщательно перемешивают Пробирки помещают us. 30 мин в

; термостат при J/ С, После инкуоации : пробирки с кровью центрифугируют при ; 1000 об/ккн в течгпие 10 мин„ В полу- I чеиньж образцах плазмь парвой и вто- рой пробирок определяют содержание i гепарина по методу С -1рмаи 3, ,дя это- I го в агггот;1Щ1Оиную пробирку отмери- I кают О„05 м.л ф 1зиологического расткл плазмы.

Пробирку по- , о ,

в ор а и О.

в :1:1оцяную баню при , через 30 с прибцвллют мл раствора тромбина (производства Каунасского пред- приятия бггктериологических препаратов при Научнр-исследовательском институте эпидемио,пог ии, микробиологии и гкгкены) р. коидентра5ДЖ1 мг/мл и отмечают свертываи.ия плазмьзо Раствор тромбина в такой концентрации долисен свертывать О мл Шгазмы здорового человека, разбавленной в 0,05 мл физиологического раствора, за 30 с, В другую аггютационную пробирку отмеривают О,, 1 мл ш;азмы и OfOS мл раствора толуидинового синего в концентрации 1 мг/мл„ Пробирку помещают в водяную баню при , через 30 с добавляют мл рабочего раствора тромбина и отмечают время свер т ЫБ ани я пл а 3 MI. о

Разница во времени свертывания в первой и во второй аггютационных про

,-

о - с д

15

20 25 ; 30

35

Qдз50

5f5

бирках указывает на количество .япбод- ного гепарина в крови,

В плазме крови первой пробирки, куда был добавлен лактобактерин определяется величина всего гепарина крови, участвующего в регуляции состояния противосвертывающей системы гемостаза, а в плазме крови второй пробирки (без лактобактериана) - величина свободного гепарина крови. Разницу количества- гепарина плазмы крови первой и второй пробирок составит резервный внутриклеточньй гепа- - рин.

Гепарин определяли двумя способами: известным (С.Э.Сирмои) и предлагаемым.

Одновременно ставили паракоагуля- ционные пробы: /3-нафтоловая проба по методу Cummine Н., Lyons R.A. (1948 г), зталоновая проба по методу Вгееп F.A., Tallis G.L. (1969 г), общий фибриноген по Р.А.Рутбергу (1961 г), записывали тромбоэласто- грамму на приборе Гемокоагулограф .ГКГМ 4.

Пример 1. Исследовали кровь здоровой женщины 25 лет. Величина гепарина плазмы, определенная по известному способу, составили 4 с, а плазмы, полученной из крови, подверг- нутс1Й действию лактобактерина, 7,4 с. Следовательно, величина всего гепарина крови.,определяющего состояние противосвертывающей системы, равна 7,4 с, количество свободного гепарина 4с, а содержание резервного внутриклеточного гепарина 7,4-4 3,4 с. Паракоагуляционные пробы были отри- цательньми, величина общег о фибриногена составила 2,7 г/л, время R тромбоэластограммы 6 мин 38 с.

Пример 2. Исследовали кровь больного 63 лет с диагнозом: ишеми- ческая болезнь сердца, стабильная стенокардия напряжения 2 функционального класса, Н ст. Величина гепарина плазмы крови. Не по двергнутой действию лактобактерина, составила 4,2 с, а плазмы, полученной из крови, подвергнутой действию лактобактерина, 11 с. Следовательно, величина всего гепарина крови, участвующей в регуляции состояния противосве ртывания, будет равно 11 с, свободного гепарина крови с, а резервного внутриклеточного 11-4,,8 с. Этанолова проба (одна и:-; паракоагуляционных проб) была положительной на 2 плюса, величина общего фибриногена составила 4,8 г/л, а время R тромбоэластограммы 4 мин 45 с.

Из приведенных примеров видно, что в сравнении со здоровым человеком у больного (пример 2) наблюдалась активация свертывания крови: положи- тельный результат зтаноловой пробы.

с.

ом к1429025

лягаемому способу позволяет установить активацию противосвертывающей системы за счет повьпления синтеза внутриклеточного гепарина.

Формула изобретения

Способ определения гепарина в кро

Изобретение относится к медицине, предназначено для раннего выявления нарушений противосвертьшающей системы крови, связанных с изменением величины резервного внутриклеточного гепарина, способного вьщелиться в кровоток у больных с различной патологией. Цель изобретения повышение точности способа за счет выявления резерва гепарина в клетках крови. Для этого пробу венозной крови обрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мл, отделяют плазму инкубированием и центрифугированием. Затем добавляют раствор тромбина и измеряют время свертывания плазмы в сравнении с контролем. Разница во времени указывает на количество свободного гепарина в крови. S (Л

высокая концентрация общего фибрино- Q ви путем отделения плазмы, инкубап.ш

гена, сокращенное время R тромбоэластограммы. Однако по величине свободного гепарина, исследованного по известному способу трудно отметить

ее при 37 С, добавления раствора тром бина с последующим измерением време} н свертывания плазмы в сравнеини с контролем5 о т л и ч а 0 щ и и с я

изменение состояния противосвертываниЯ|5 тем, что, с цепью повьгшет я точност

крови у больного: содержание гепарина у больного не отличалось от такового у здорового человека (пример 1).

Оценка состояния противосвертывающей системы крови больного по пред20

спосйба за счет выявления резерва гепарина в клетках крови, перед отделением плазмы кровь обрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мп.

ее при 37 С, добавления раствора тромбина с последующим измерением време} н свертывания плазмы в сравнеини с контролем5 о т л и ч а 0 щ и и с я

и

спосйба за счет выявления резерва гепарина в клетках крови, перед отделением плазмы кровь обрабатывают лактобактерином в концентрации не менее 0,33 мг/мп.