Способ стимуляции роста культивируемых клеток млекопитающих Советский патент 1988 года по МПК C12N5/00 

4

00

со со

ч1

а

i Изобретение относится к медицине I и биологии, а именно к биотехнологии ;приготовления, диагностических и про- ;филактических препаратов. I Цель изобретения - увеличение вы- :хода клеточной биомассы.

Пример 1. Для стимуляции рос- :та культуры фибробластов эмбрионов

Ткань неоднократно тщательно промыв ют раствором Хенкса с добавлением а тибиотиков и подвергают трипсиниза- ции до полного ее расслоения. Из трипсинизированной ткани готовят кл точные суспензии и переносят их в 250 мл ростовой среды № 1 с добавле нием 1 ампулы коммерческого альфаI человека производят общеизвестную , фетопротеина. Матрасы с биоматериаi этапную обработку абортивного материала, включающую механический отбор кожно-мышечной ткани зародыша, ее измельчение и многократное (5-6 раз) промывание раствором Хенкса с анти- д биотиками, трипсинизацию ткани через 3 дня после ее предварительного посе-г ва на питательных средах и приготов-. ление клеточной суспензии

Полученную суспензию клеток поме- 2о щают в ростовую среду, содержащую 0,5% гидролизата лакт,альбумина на растворе Хенкса с 10% бычьей сывороткой (ростовая среда № 1) из такого расчелом после инкубации в термостате со держат сплошной монослой фибробластов эмбрионов человека через 32-36

П р и м е р 3. Готовят клеточные суспензии из эмбрионального материа ла по примеру 2. Полученные из трип синизированной ткани суспензии клеток добавляют в тот же объем ростовой среды № 2, куда внесен разведен ный в той же среде промьпиленный аль фй-фетопротеин. Далее по примеру 2.

Предлагаемый способ стимуляции роста культуры клеток позволяет сократить время выращивания биоматери

та, чтобы в 1 мл смеси

содержалось.

500-600 тыс. клеток. В качестве ростовой среды можно использовать соле- 1вой раствор Хенкса с 10% аминопептида ;и 10% стерильной лошадиной сыворотки |(рОстовая среда №2).

I Перед разливом в матрасы в росто- |вую среду с клетками добавляют лиофи- |лизированный препарат альфа-фетопроте |ин, разведенный на 2 мл того же раст- JBopa из расчета 1 ампула эмбриональ- JHoro белка на 250 мл среды. Матрасы 1помещают в термостат и клетки выращи- ают в общепринятых условиях. I Пример2.В гинекологическом отделении больницы в стерильные ба- |но«ки получают эмбриональньй материал от абразий на сроках 8-10 недель бе- :ременност-и. Производят отбор и измельчение кожно-мьшечной ткани заро- дьшей для извлечения фибробластов.

Ткань неоднократно тщательно промывают раствором Хенкса с добавлением антибиотиков и подвергают трипсиниза- ции до полного ее расслоения. Из трипсинизированной ткани готовят клеточные суспензии и переносят их в 250 мл ростовой среды № 1 с добавлением 1 ампулы коммерческого альфафетопротеина. Матрасы с биоматериалом после инкубации в термостате содержат сплошной монослой фибробластов эмбрионов человека через 32-36 ч

П р и м е р 3. Готовят клеточные суспензии из эмбрионального материала по примеру 2. Полученные из трипсинизированной ткани суспензии клеток добавляют в тот же объем ростовой среды № 2, куда внесен разведенный в той же среде промьпиленный аль- фй-фетопротеин. Далее по примеру 2.

Предлагаемый способ стимуляции роста культуры клеток позволяет сократить время выращивания биоматериа

а до 32-36 ч, что в 1,5-2 раза быстрее по сравнению с известным. Использование в качестве биостимулятора выпускаемого нашей промышленностью препарата альфа-фетопротеина делают предлагаемую технологию общедоступной для всех лабораторий, работающих с культурами клеток и тканей.

5

Формула изобретения

Способ стимуляции роста культивируемых клеток млекопитающих, включающий выращивание культуры клеток в питательной среде со стимулятором роста, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода клеточной биомассы, в качестве стимулятора используют эмбриональный белок альфа-фетопротеин в концентрации 0,3- 0,5 мкг/мл.

Изобретение относится к медици не и биологии, а именно к биотехнологии приготовления диагностических и профилактических препаратов. Целью изобретения является увеличение выхода клеточной биомассы. Для этого суспензии клеток культивируют в ростовой среде, содержащей эмбриональный белок альфа-фетопротеин.