Способ оценки антигипоксической активности химических соединений Советский патент 1989 года по МПК G01N33/68 C12Q1/00 

1

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, фармакологии, нейрохимии и может быть использовано для оценки эффективности антигипоксической активности химических соединений.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Экспериментальным животным вводят исследуемое соединение, создают гипок сические условия, затем животных забивают, вьщеляют мозг и в гомогенате мозга определяют активность гексокина зы. При отсутствии снижения активности гексокиназы относительно нормы определяют наличие у химического соединения антигипоксической активности. При снижении активности гексокиназы химическое соединение не является эффективным антигипоксантом. 5 Пример 1. При оценке антиги- поксического действия гутимина и соединения № 3 (спиро-2-тиоксо-5,6-тет- раметилен-1,2,3,4-тетрагидропиримидин- 4,1-циклогексана) бьши исследованы 3

10 крысы: 1 - контрольная, 2 - опытные). Первому опытному животному вводили внутрибрюшинно (в/бр) 1 МП стерильного раствора, содержащего 1 дозу г гутимина, равную 50 мг/кг. Второму

опытному животному вводили в/бр 1 МП стерильного) раствора,содержащего 1 дозу соединения №3,равную 50мг/кг. Контрольному животному вводили 1 МП

.

СЛ

ел

оо

31455320

:терильного раствора (физиологичесв

Полученные результаты представлены в табл, 1 ,

Таким образом, гутимин, введенный перед гипоксией, является эффективным антигипоксическим химическим соединением, а введение соединения № 3 неэффективно.

Пример 2, При оценке эффективности антигипоксического действия ГОМК при ишемии мозга .бьли исследованы 2 крысы: контрольная и опытная. Опытной крысе в/бр вводили 1 мл сте- риального раствора, содержащего 1 докого), Животных выдерживали в нормо- сических условиях при комнатной тем- Ьературе в течение 60 мин (экспозиция, необходимая для всасывания препарата и создания эффективной концентрации) . Затем животных поместили в барокамеру проточного типа. Разреже- ие создавалось двумя вакуумными на- ю :осами РВН-20, производительность которых достаточна для того, чтобы полностью исключить накопление двуокиси углерода в газовом пространстве баро самеры и стабильно поддерживать в те- 15 зу ГОМК, равную 100 мг/кг, и прово- |чение длительного времени заданный дили перевязку 2 общих сонных арте- |уровень разрежения. Условия высоты родъема контролировали двумя прибора- |ии альтиметром и вакуумметром, Живот ых поднимали со скоростью 0,5 м/с 20 общих сонных артерий под эфирным о высоты 12000 м, что соответствова- наркозом,.Животных выдерживали в нор- |1о разрежению 143,5 мм рт.ст. Данное Ьазрежение вызывает тяжелую гипоксию. Время пребьшания животньк на высоте |составило 30 мин. Сразу же после спус-25 щего исследования брали головной мозг а животных декапитировали. Для даль- гомогенизировали его в среде ньще- Йейщего исследования брали головной ления и определяли активность гексо- Цозг и гомогенизировали его в среде киназы в гомогенате. Р,25 М сахарозы, трис-НС1, рН 7,4) на Полученные результаты представле- II г ткани+9 мГ1 среды вьщеления.Полу- 30 ны в табл,2.

kjeHHbm гомогенат разводили средой вы Таким образом, предварительное вве- |целения в 10 раз и брали 0,05 мм для дение ГОМК перед ишемией является эф- пределения актив ности гексокиназы, I Определение активности фермента Проводилось в системе следующего сое- 5 Б табл,3 представлены статистичес- Тава: 60 мМ трис-НС1 рН 8,0; 2 мМ глю- ки обработанные данные по активности козы 2 мМ АТФ; 5 мМ MgCl2; 1,5 мМ НАДФ; 0,4 МЕ/мл глюкозо-6-фосфатде- гидрогеназы. Активность фермента рас- считьшали по формуле:

рий. Контрольному животному в/бр вводили 1 мл стерильного физиологического раствора и проводили перевязку 2

моксических условиях при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем животных декапитировали. Для дальнейфективным антигипоксическим мероприятием.

гексокиназы мозга и выживаемости крыс при гипоксии,

Предлагаемый способ прост в испол40 нении и может быть использован для массового исследования в научных лабораториях. Способ позволяет сократить время оценки антигипоксической активности до 15 мин (в известном

Активность -7- :5-™-,мкмоль НАДФН/мин

D л Jна 1 г ткани.

где Е - разница экстинкций;

V - конечный объем пробы; 6,22 - изменение оптической плотности при 340 нм в 1 см кюветы при окислении и восстановлении 1 мкмоль НАДФ, находящегося в 1 мл исследуемой системы , весовое количество ткани

Формула изобретения

Способ оценки антигипоксической 50 активности химических соединений путем введения экспериментальным животным исследуемого химического вещества, создания гипоксических условий и последующего биохимического анализа (мг), которому соответству- 55 ткани мозга животных, о т л и ч а ю- ет объем тканевого гомоге- щ и и с я тем, что, с целью ускоре- ната,. находящегося в кюве- ния способа, в гомогенатах мозга опте;ределяют активность гексокиназы и по Т - время (1 мин).предотвращению вызванного гипоксией

X Полученные результаты представлены в табл, 1 ,

Таким образом, гутимин, введенный перед гипоксией, является эффективным антигипоксическим химическим соединением, а введение соединения № 3 неэффективно.

Пример 2, При оценке эффективности антигипоксического действия ГОМК при ишемии мозга .бьли исследованы 2 крысы: контрольная и опытная. Опытной крысе в/бр вводили 1 мл сте- риального раствора, содержащего 1 дозу ГОМК, равную 100 мг/кг, и прово- дили перевязку 2 общих сонных арте-

зу ГОМК, равную 100 мг/кг, и прово- дили перевязку 2 общих сонных арте-

общих сонных артерий под эфирным наркозом,.Животных выдерживали в нор- щего исследования брали головной мозг гомогенизировали его в среде ньще- ления и определяли активность гексо- киназы в гомогенате. Полученные результаты представле- ны в табл,2.

рий. Контрольному животному в/бр вводили 1 мл стерильного физиологического раствора и проводили перевязку 2

общих сонных артерий под эфирным наркозом,.Животных выдерживали в нор- щего исследования брали головной мозг гомогенизировали его в среде ньще- ления и определяли активность гексо- киназы в гомогенате. Полученные результаты представле- ны в табл,2.

моксических условиях при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем животных декапитировали. Для дальней Таким образом, предварительное вве- дение ГОМК перед ишемией является эф- Б табл,3 представлены статистичес- ки обработанные данные по активности

фективным антигипоксическим мероприятием.

Таким образом, предварительное вве- дение ГОМК перед ишемией является эф- Б табл,3 представлены статистичес- ки обработанные данные по активности

гексокиназы мозга и выживаемости крыс при гипоксии,

Предлагаемый способ прост в исполнении и может быть использован для массового исследования в научных лабораториях. Способ позволяет сократить время оценки антигипоксической активности до 15 мин (в известном

способе 8 ч).

ормула изобретения

51Д553206

снижения сяктивности фермента относи-кую активность химического соединетельно нормы оценивают антигипоксичес- ния.

Таблица 1

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, ней- рохимии, авиационной и космической биологии и может быть использовано для оценки эффективности антигипок- сического мероприятия в эксперименте. Целью изобретения является ускорение способа оценки эффективности антиги- поксического мероприятия. Для этого экспериментальным животным создают гипоксические условия, берут мозг и определяют активности фермента углеводного обмена. Готовят гомогенат мозга,в котором определяют активность гексокиназы (ГК5, затем антигипокси- ческое мероприятие оценивают как эффективное при значении активности ГК на уровне нормы, антигипоксическое мероприятие оценивают как неэффек- тивное при снижении активности ГК относительно нормы. Способ эффективен, достаточно прост по исполнению.3 табл, СЛ