ПРОИЗВОДНОЕ 4-ОКСО-1,4-ДИГИДРОПИРИМИДИНА, ОБЛАДАЮЩЕЕ АНТИГИПОКСИЧЕСКОЙ, ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЙ И ИММУНОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2002 года по МПК C07D239/36 A61K31/505 A61P9/10 A61P37/04 A61P9/00 

Изобретение относится к новым синтетическим производным 4-оксо-1,4-дигидропиримидина.

Известны также производные пиримидинов, обладающие психотропным действием [Igrashi, Jim-Etsu, Nishimura.// РСТ Jnt Appl. WO 963/488 A1, 10 Oct. 1996, 116 p.] и соли 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающие психостимулирующей, антидепрессантной [Cashyap M. M.// J. labelled Compd. Radiophann, 1989, v. 22, 12, p. l239,1250; C.A. 1987, v. 106 -18475 а], антиаллергической и иммуностимулирующей активностью [Патент 2015975].

Наиболее близким по структуре к заявляемому соединению является: 2,6-диметил-5-фенил-1-(1 -фенил-1-2,3-диметил-5-оксопиразолил-4)-4-оксо-1,4-дигидропиримидина гидрохлорид, обладающее антигипоксической активностью [Прогноз биологической активности и синтез новых N-гетеропроизводных 4-оксо-1,4-дигидропиримидина. - Пятигорск, 1995, 22 с. - Деп.в ВИНИТИ 2796-В-95, 23.10.95] , но уступающее по уровню данного вида активности заявляемому соединению.

Целью данного изобретения является получение нового производного 4-оксо-1,4-дигидропиримидина, обладающего более выраженной антигипоксической, церебропротекторной и иммуннотропной активностью по сравнению с известными веществами.

Важным преимуществом заявляемого объекта является одновременное проявление, данных видов биологической активности.

Заявляемый объект - производное пиримидина 4-оксо-1,4-дигидропиримидина и его биологические свойства в доступной нам литературе не описаны. Это новое вещество относится к производным пиримидина, содержащим остаток аминокислоты, обладает антигипоксическим, церебропротекторным и иммуностимулирующим действием.

Поставленная цель достигается в результате синтеза соединения следующей структуры;

обладающей антигипоксической, церебропротекторной и иммунотропной активностью.

Описанное соединение получается кипячением N-ацетил-2-фенилацетоацетамида с γ-аминомасляной кислотой в ледяной уксусной кислоте по схеме 1, приведенной в конце описания.

Пример. Получение 4-(2,6-диметил-5-фенил-4-оксо-1,4-дигидропиримидил-1)-бутановой кислоты. В смеси из 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл ДМФА растворяют - 2,18 г (0,01 моль) N-ацетил-2-фенилацетоацетамид и 1,1 г (0,01 моль) г-аминомасляной кислоты. Реакционную смесь кипятят 1 час, затем охлаждают и выливают в 100 мл эфира. Выделившийся осадок отфильтровывают и промывают эфиром. Выход 53% (1,99 г). Т_пл =140-141^oС (из этанола). Найдено, %: С-67,13; Н-6,29; N-9,80; O-16,78. Вычислено %: С-67,17, Н-6,35; N-9,73; O-6,81.

ИК-спектр, см^-1: 1710, 1647, 1590 см^-1 (вазелиновое масло).

Уф-спектр л_max: 225 нм; 254 нм; 276 нм; 305 нм ( С-1•10^-5 моль/л в этаноле).

На модели антигипоксической активности (гипоксическая гипоксия) изучали вещество 1. Эксперимент проводился на 90 мышах линии СВА мужского пола, вес 20-21 грамм по 6 животных в каждой серии. Помещали мышей в закрытое пространство и регистрировали время жизни. Вещества вводили в дозе 10 мг/кг массы тела за 30 минут до начала эксперимента. В контрольных опытах вводили физиологический раствор в том же объеме. Статистическую обработку данных проводили с использованием критерия Стьюдента (см. табл.1).

Таким образом, вещество 1 обладает антигипоксической активностью, которая статически значимо превышает значения контрольных опытов и эталонного препарата.

Исследование противоишемического действия произвольных 4-оксопиримидина воспроизводили на модели однокомпонентной окклюзии обеих сонных артерий у наркотизированных инголяционно (эфир для наркоза) белых крыс обоего пола, весом 180 - 220 г. [Петров И. Р. Кислородное голодание головного мозга (экспериментальные материалы). - Л.: Медгиз, 1949, 48 с.].

Все животные были разделены на 5 групп: 1 гр. - контроль; 2 гр. -препарат сравнения ГАМК /50 мг/ кг; 3 гр. - препарат сравнения ГАМК /75мг/ кг; 4 гр. - вещество 1 в дозе 50 мг/кг; 5 гр. - вещество 1 в дозе 75мг/кг. В каждой группе было проведено 5 серий исследований, в которых использовались по 8 крыс на серию. Для определения циркуляторной активности нового веществ / 1/ и препарат сравнения ГАМК вводили в дозах 50 и 75 мг/кг внутрибрюшинно за 45-60 мин до перевязки сонных артерий.

Выраженность циркуляторной активности оценивали по количеству выживших животных через 72 часа после воспроизведения ишемии.

Контрольные животные получали эквивалентный объем изотонического раствора натрия хлорида внутребрюшинно.

Результаты опытов статистически обработаны и представлены в таблице 2.

Результаты проведенных исследований показывают, что изучаемое соединение вызывает церебропротекторное действие.

Соединение 1 в дозе 75 мг/кг увеличивает выживаемость животных в условиях циркуляторной гипоксии на 65,2% по сравнению с контролем,
Исследование иммунотропного действия производного 4-оксо-1,4-дигидропиримидина проводили на модели реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), которая является одним из наиболее часто применяемых методов для оценки клеточного иммунитета [Иммунологические методы /Под ред. Фримелд Г. - М. : Медицина, 1987, с. 346.] 45 мышей обоего пола линии СВА весом 18-20 г иммунизировали внутрибрюшинно эритроцитами барана (ЭБ) в количестве 2•10⁹ кл/мл. Все животные были разделены на 3 группы по 25 мышей: 1 гр. - контроль; 2 гp. - препарат сравнения - метилурацил; 3 гр. - опыт, т.е. исследуемое новое вещество (1). В каждой группе было проведено 5 серий исследований, в которых использовалось по 5 мышей на серию. Для определения реакции ГЗТ через 4 дня вводили разрешающую дозу суспензии ЭБ в количестве 0,01 мл подкожно в правую задетою лапку, а в другую контрольную, такое же количество стерильного физиологического раствора. Выраженность реакции ГЗТ к ЭБ оценивали по степени отека опытной лапки по сравнению с контрольной путем измерения массы лап и высчитывали индекс реакции (ИР) в процентах

где - Р_о - масса, опытной лапки;
Р_к - масса контрольное лапки.

Введение исследуемого вещества вызывает сдвиг индекса. Исследуемое вещество вводили однократно в дозе 25 мг/кг массы мышей в 1%-ной крахмальной взвеси в желудок с помощью специального зонда за 2 суток до антигенной нагрузки. В качестве объекта сравнения использовали официнальный препарат метилурацил, который является аналогом по строению и обладает иммунотропной активностью [М. Д. Машковский. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1985, с. 138]. Метилурацил вводили в той же дозе и по той же схеме, что и исследуемое вещество.

Контрольные животные получали 1%-ную крахмальную взвесь в соответствующем количестве и иммунизировались по той же схеме, что и опытные животные. Результаты опытов статистически обработаны и представлены в таблице 3.

Влияние вещества (1) на гуморальный иммунный ответ оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей методом безагарового локального гемолиза в монослое эритроцитов [М.Д. Машковский Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1971, с.157].

Эксперименты проведены на 75 мышах линии СВА обоего пола массой 20-22 г. Все животные были разделены на 3 группы по 25 мышей: 1 гр. - контроль; 2 гр. - препарат сравнения - метилурацил; 3 гр. - опыт, т.е. исследуемое новое вещество (1). В каждой группе было проведено 5 серий исследований, в которых использовалось по 5 мышей на серию. Животных иммунизировали ЭБ внутрибрюшинно (2•10⁹ кл/мл). Число АОК в селезенке мышей определяли на пятые сутки после иммунизации и пересчитывали на 10⁶ спленоцитов. За 2 суток до иммунизации мышам в желудок с помощью зонда вводили исследуемое вещество (1) (3-я группа) и метилурацил (2-я группа) в дозах 25 мг/кг массы в 1%-ной крахмальной взвеси. Контрольных животных (1-я группа) иммунизировали по той же схеме, что и опытных животных, вводили им 1%-ную крахмальную взвесь в соответствующем количестве. Результаты эксперимента обработаны статистически и приведены в таблице 4.

Таким образом, соединение (1) угнетает клеточный иммунитет, тестируемый в реакции ГЗТ к эритроцитам барана, на 19,57% по сравнению с контролем.

Значительное повышение гуморального иммунитета проявлялось в увеличении количества АОК в селезенке мышей. Соединение (1) по своей активности стимулировало антителогинез на 59,4% по сравнению с контролем.

Определение острой токсичности и расчет LD₅₀ осуществляли по методу Кербера и установили, что для соединения (1) LD₅₀ составляет 1700 мг/кг массы тела животных. Таким образом, исследуемое соединение (1) обладает малой токсичностью.

Результаты проведенных исследований показывают, что изучаемое соединение обладает антигипоксической, церебропротекторной активностью, оказывает влияние, как на клеточной, так и на гуморальный иммунитет.

Изобретение относится к новому соединению - производному 4-оксо-1,4-дигидропиримидина формулы I, обладающему антигипоксической, церебропротекторной и иммунотропной активностью, и может найти применение в медицине. Соединение формулы I получают кипячением N-ацетил-2-фенилацетоацетамида с γ-аминомасляной кислотой в ледяной уксусной кислоте в смеси с диметилфомамидом. 4 табл.

Производное 4-(2,6-диметил-5-фенил-4-оксо-1,4-дигидропиримидил-1)-бутановой кислоты

проявляющее атигипоксическую, церебропротекторную и иммунотропную активность.