Способ определения чувствительности форм хвойных пород деревьев к воздействию ростстимулирующего препарата Советский патент 1989 года по МПК A01G7/00 

Изобретение относится к области биологии и может быть использовано в лесном хозяйстве.

Целью изобретения является повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм.

Хвою сеянцев сосны второго года, семена которых замочены перед посевом в течение 24 ч в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере.

Затем проводят гель-электрофорез экстракта. Полученные гелевые пластины окрашивают на мапатдегидрогеназу и малик-энзим. После инкубирования

в растворе краски на геле подсчитывают количество изоферментных полос,

Пример 1, 200 мг хвои сеянцев сосны 2 года, семена которых перед посевом замочены в течение 24 ч в растворе дигидрохлорида 2-метил-4- диметиламинометил-5-оксибензимидазо- ла (препарат БИО-40) в концентрациях

1 (вариант I) и 0,1 (вариант II) мг/л, мелко режут, растирают в ступке на холоде (при С) в 1,5 ш экстрагирующего буфера на основе трис-НС1 (рН 8,0) с добавлением аскорбиновой кислоты, цистеина, сахарозы, Твин-80. Затем экстракт центрифугируют при 10000 g в течение 30 мин.

К экстракту добавляют 0,3 мл 60%- ного раствора сахарозы, содержащего бромфенол. Экстракт подвергают вертикальному электрофорезу а полиакрил- амидном геле с целью идентификации изоферментов. Первые 2 ч электрофорез проводят при напряжении 140 В, затем -его повьшают до 300 В, Для получения специфического окрашивания на малат- дегидрогеназу гель инкубируют с мала- том натрия, НАДФ, трис-НС1 (рН 8,0)$ на малик-энзим - с малатом натрия, НАД, трис-НС (рН 8,0). После получения специфического окрашивания под- считывают количество изоферментных полос.

Контролем служит хвоя сеянцев сосны, .замоченных перед посевом в воде в течение 24-ч, а затем высеянных на опытные делянки.

Среднее- число изоферментных полос в хвое экспериментальных групп сеян- цев сосны приведено в табл.1.

Т а б л и

У сеянцев семьи 2 (особенно -при обработке семян препаратом в концентрации 0,1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектра хвои сеянцев в сравнении со спектром контрольньк сеянцев. Так, например, среднее число изоферментных полос малик-энзима и малатдегид- рогеназы в 1,2-2,0 раза выше, чем в контроле, что объясняется появлением новых зон активности ферментов. При сравнительном анализе числа изоферментных полос малик-энзима и ма- латдегидрогенахы в хвое сеянцев семьи 2 с семьями 1 и 3 выявляются аналогичные закономерности.

I

Пример 2. Семена сосны после

замачивания в течение 24 ч в раствор препарата БИО-40 в концентрациях 1 (вариант l) и 0,1 (вариант II) мг/л и высевают на опытные делянки. Контролем служат семена сосны, замоченны в воде.

Результаты свидетельствуют о наличии стимуляционного эффекта препарата, но величина его варьируется в разных семьях. Наиболее эффективен стимулятор роста для сеянцев семьи 2, особенно в варианте I. Так, например, в этом варианте высота растений составляет 132%, а диаметр ствола 144% по отношению к контролЮф

У сеянцев той же семьи 2 (при обработке препаратом в концентрации О,1 мг/л) обнаружены самые значительные изменения изоферментного спектра хвои сеянцев в сравнении со спектром контрольных сеянцев, а также аналогичные изменения у контрольных сеянцев семьи 2 по сравнению с контрольными сеянцами из других семей.

Таким образом, сеянцы сосны, наиболее отзывчивые на действие стимулятора роста, имеют следующую структуру спектра изоферментных полос (в хвое); не менее 7 полос у малатдегид

5

0

рогеназы и не менее 5 полос у малик- энзима.

Формула изобретения Способ определения чувствительности форм хвойных пород деревьев к воздействию ростстимулирующего препарата, включающий предпосевную обработку семян раствором ростстимулято- ра, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм, из сеянцев на ранних этапах их развития вь;целяют водорастворимые белки, которые подвергают электрофорезу . в поли- акриламидном геле, полученные спектры окрашивают на мапатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с анало- гичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос достоверно возрастает по сравнению с контролем.

Изобретение относится к области биологии и может быть использовано в лесном хозяйстве. Цель - повышение точности определения за счет возможности выявления генетически чувствительных форм. Для реализации способа хвою сеянцев сосны, семена которых перед посевом были замочены в растворе стимулятора роста растений, растирают в экстрагирующем буфере, выделяя водорастворимые белки. Эти белки подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле, полученные спектры окрашивают на малатдегидрогеназу и малик-энзим, подсчитывают количество полос зимограмм и сравнивают с аналогичными данными, полученными в контроле, при этом форму относят к чувствительной, если количество полос достоверно возрастает по сравнению с контролем. 2 табл.