Штамм микромицета FUSаRIUм SамвUсINUм FUск. VaR мINUS для оценки устойчивости картофеля к фузариозной гнили Советский патент 1992 года по МПК A01N63/04 C12N1/14 

Изобретение относится к защите растений от болезней и может быть использовано в селекции сортов картофеля, устойчивых к фузариозной гнили.

Известен штамм Fusarium oxysporum (Schlecht) Snyd.et Hans,var.orthoceras(Appt. et Wr.) - возбудитель фузариозного увядания люпина.

Однако этот штамм не является возбудителем гнили картофеля и не может быть использован для определения устойчивости картофеля к фузариозу.

Наиболее близким к предлагаемому штамму Fusarium sambucinum var.minus ВНИИСХМ-ВИЗР № 42 для оценки устойчивости сортов картофеля к фузариозной гнили является штамм Fusarium sambucinum Fuck. Ns 34.

Недостатками известного штамма являются

низкая вирулентность, заключающаяся в слабом поражении различных сортов картофеля, слабый линейный рост колонии;

слабая спорообразующая способность (2,4х хЮ5 макроконидий в 1 мл на 10-е сутки), требующая культивирования штаммов для получения необходимой концентрации (106/мл) на картофельном агаре минимум 14 сут.

Цель изобретения - получение нового штамма Fusarium sambucinum Fuck, var minus, для1 оценки картофеля на устойчивость к фузариозной гнили, обладающего более высокой скоростью роста мицелия, вирулентностью и интенсивным спорообразованием.

Поставленная цель достигается тем, что для оценки устойчивости картофеля к фузариозной гнили используется штамм Fusarium sambucinum Fuck. var. minus № Д 42, депонированный в объединенной коллекции микроорганизмов ВНИИСХМ-ВИЗР 27 апреля 1990 года под регистрационным номером Д 42. выделенный из клубня сорта Лорх. пораженного сухой фузариозной гнилью, отобранного в Тамбовской области.

сл

С

V

V4 О О

Идентифицирование штамма проводилось по определителю В.И.Билай Фуза- рии(1977).

Штамм Fusarium sambucinum Fuck. var. minus № Д 42 относительно к классу Deuteromycetes, порядку Hyphomycetes, роду Fusarium Lk. ex. Fr., секции Discolor Wr. emend Bilai.

Штамм имеет следующую характеристику-.

Описание культурально-морфологиче- ских признаков штамма Fusarium sambucinum Fuck. var. minus N Д 42 на разных средах проводили при 25°С на 10-й день культивирования.

Культу рал ьно-морфологические признаки штамма Fusarium sambucinum Fuck. Var. minus № Д 42.

На плотных средах штамм № Д 42 образует зонированную колонию, на картофель- но-глюкозном агаре окраска ее беловато-охряная. Воздушный мицелий пушистый, рыхлый, поднимается над субстратом на 3 мм, строма кофейно-коричневая.

На сусло-агаре мицелий пышный, светло-коричневый, строма темно-красная; на картофельном агаре мицелий стелющийся, телесно-розового цвета, строма бледно-розовая; на среде Чапека мицелий пышный, палевого цвета, поднимается над субстратом на 3 мм, строма сверло-коричневая; на овсяном агаре мицелий стелющийся, бледно-ржавого цвета, строма телесно-розовая

Макроконидии образуются в воздушном мицелии и пионнотах, веретеновидно- серповидные, с короткой, внезапно суживающейся в виде сосочка верхней кареткой, с ясно выраженной ножкой у основания. Преобладают макроконидии с тремя перегородками.

Размеры конидий на разных агаризованных средах на 10-й день роста: на картофельно-глюкозном агаре - с тремя перегородками 12-45 х 3-5,5 мкм, с пятью - 20-50 х 3-5,5 мкм; на сусло-агаре - с тремя перегородками 19,2-44,8 х 3-5,5 мкм, на картофельном агаре - с тремя перегородками - 12,8-38,4 хЗ-5,0 мкм, с пятью - 19,2- 44,8 х 3-5,5 мкм; на среде Чапека - с тремя перегородками 19,2-38,4 х 3-5,5 мкм; на овеянной агаризованной среде - с тремя перегородками - 12,8-41,6 х 3-5,5 мкм.

Линейный рост колоний на агаризованных средах: на картофельно- глюкозном агаре - на 5-й день роста - 83 мм, на 10-й - 90 мм; на сусло-агаре - на 5-й день - 37 мм; на 10-й - 64 мм; на картофельном агаре - на 5-й день - 64 мм; на 10-й - 90 мм; на среде Чапека - на 5-й день - 62; на 10-й

-90 мм; на овеянной агаризованной среде

-на 5-й день - 60 мм; на 10-й - 90 мм.

Спорообразование штамма на разных агаризованных средах: на картофельноглюкозном агаре на 10-й день 7,9 х 105 макроконидий в 1 мл; на сусло-агаре - 3,1 х 105 макроконидий в 1 мл, на картофельном агаре-2,5 хШ макроконидий в 1 мл; на среде Чапека - 1,9 х 10 макроконидий в 1 мл, на

0 овсяной агаризованной среде-4,6 106 макроконидий в 1 мл.

Спорообразование начинается на картофельном агаре с 2-го дня роста, максимум спорообразования на 21-й день.

5 Физиолого-биохимические свойства штамма Fusarium sambucinum var. minus № Д42.

Из источников углерода усваивает глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, фрукто0 зу, арабинозу, рамнозу. Хорошо усваивает нитратный, нитритный и аммонийный азот. Растет в широких пределах рН - от 2,0 до 9,0.

Признаки штамма устойчивые. Штамм

5 хранят при температуре 20-25°С на твердых агаризованных средах, периодически пересевают.

Штамм Fusarium sambucinum var. minus № Д 42 не вирулентен для теплокров0 ных животных.

Пример Использование штамма Fusarium sambucinum var. minus № Д 42 для определения устойчивости сортов картофеля к фузариозной гнили.

5 Оценку устойчивости сортов картофеля к фузариозной гнили проводят путем искусственного заражения клубней суспензией конидий гриба в концентрации 1 х 106в 1 мл воды 10-14-дневной культурой гриба, выра0 щенной на картофельном агаре (вместо кар- тофельно-глюкозного агара) В пробирку с культурой гриба добавляют стерильную воду до верхнего уровня среды и делают смыв с косяка с помощью микробиологической

5 петли Подсчет конидий в полученной суспензии проводят в счетной камере (Горяе- ва), после чего доводят концентрацию до 106 конидий в 1 мл воды.

Промытые, обработанные спиртом и

0 обожженные над спиртовкой клубни повреждают штаммом на глубину 10 мм в пу- повинной части. В полученные углубления пипеткой вводят до полного наполнения приготовленную суспензию. Для каждого

5 образца берут 10 клубней. В контрольные образцы с механическими повреждениями вводят стерильную воду. Клубни укладывают в выстланные фильтровальной бумагой эксикаторы, нижняя часть которых заполнена стерильной водой Эксикаторы накрывают крышками и помещают в термостат или помещение с температурой 23-25°С.

Учет загнивания на клубнях проводят через 20 дней после их продольного разреза путем измерения диаметра и глубины загнивания.

Индекс поражения рассчитывают по формуле

d h

X

100

где d -.эметр зоны загнивания, мм; rf- глубина зоны загнивания, мм.

В зависимости от индекса поражения оценку проводят по шкале: 0 - нет загнивания; балл 1 - очень слабое поражение, индекс поражения до 2,0; балл 2 - заражение слабое, индекс поражения 2,1-3,0; балл 3 - заражение среднее, индекс поражения 3,1-i 4,0; балл 4 - заражение сильное, индекс поражения 4,1-6,0; балл 5 - заражение очень сильное, индекс поражения выше 6,0. По полученным результатам устанавливают группу поражаемое™ сортов и сеянцев картофеля: абсолютноустойчивые - поражение отсутствует; высокоустойчивые

-балл 1; относительноустойчивые - балл 2; среднеустойчивые - балл 3; восприимчивые

-балл 4; сильновосприимчивые - балл 5.

В табл.1 приведены данные по выражению 13 сортов картофеля известными штам- мэми Fusarium sambucinum N 34 и предлагаемым штаммом Fusarium sambucinum var.minus N° Д 42.

Двухфакторный дисперсионный анализ данных по индексу поражения клубней картофеля при заражении штаммами Fusarium sambucinum N° 34 и Fusarium sambucinum var. minus N° Д 42 позволяет говорить о достоверности различий и существенно бо- лее высокой вирулентности штамма Fusarium sambucinum var. minus N Д 42.

В табл.2 приведены данные по баллу поражения различных сортов картофеля в зависимости от результатов заражения штаммами Fusarium sambucinum № 34 и Fusarium sambucinum var.minus .

Полученные результаты свидетельствуют о большей поражаемости сортов картофеля штаммом Fusarium sambucinum v.minus N° Д 42.

Пример 2. В сравнении с известным штаммом Fusarium sambucinum N° 34 штамм Fusarium sambucinum var.minus № Д 42 обладает более высокой скоростью роста 5 на разных твердых агаризованных средах на 5-й и 10-й-дни роста (за исключением сусло-агара).

В табл.3 показаны результаты линейного роста Fusarium sambucfnum N 34и

0 Fusarium sambucinum var. minus N° Д 42 на разных агаризованных средах.

Пример 3. В сравнении с известным штаммом Fusarium sambucinum N 34 штамм Fusarium sambucinum var. minus N°

5 Д 42 обладает более интенсивным спорообразованием.

В табл.4 показаны результаты спорообразования штаммов Fusarium sambucinum №34 и Fusarium sambucinum var.minus № Д

0 42 на твердых агаризованных средах.

Данные табл.4 показывают, что штамм № Д 42 образует в 10 раз больше конидий в 1 мл суспензии при росте на картофельной среде на 10-й день роста.

5 Для получения инокулюма, используемого для инфицирования клубней картофеля, предлагается картофельная среда с добавлением 2% агара вместо картофельно- глюкозной агаровой среды, которая реко0 мендуется для штамма F.sambucinum N° 34. У предлагаемого штамма F.sambucinum var.minus N° 42 необходимая концентрация (10 /мл) для инфицирования клубней картофеля установлена уже на 10-й день, что по5 зволяет сократить срок культивирования штамма.

Таким образом, предлагаемый штамм гриба F.sambucinum var.minus N; Д 42 обладает более высокой вирулентностью, скоро0 стью роста и интенсивностью спорообразования по сравнению с известным штаммом N° 34, используемым для оценки устойчивости картофеля к фузариоз- ной гнили.

5

Формула изобретения Штамм микромицета Fusarium sambucinum Fuck var. minus ВНИИСХМ- ВИЗР N° Д-42 для оценки устойчивости картофеля к фузариозной гнили.

Т а б л и ц а 1

Использование: сельское хозяйство, для селекции сортов картофеля, устойчивых к фузариозной гнили. Сущность изобретения штамм выращивают на агаризованной картофельной среде в течение 10 дн Для инфицирования клубней картофеля готовят суспензию концентраций 10 спор/мл. Штамм Fusarium sambuclnum ВНИИСХМ- ВИЗР Д-42 обладает более высокой вирулентностью нежели известный штамм № 34 и более высокой скоростью роста (90 мм на 10-й день против 55 мм соответственно) и спорообразованием (12,5-10 спор/мл против 2.4 105). 4 табл.

Таблица2

ТаблицаЗ

Таблица