Способ определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях Советский патент 1989 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к биохимии, в частности к определению противо- судорожных препаратов методом жидкостной хроматографии при умеренном (до 50 бар) давлении, и может быть использовано для анализа плазмы крови, спинно-мозгового ликвора или слюны пациентов.

Цель изобретения - увеличение чувствительности определения противо- судорожных препаратов за счет использования кремнезема с размером частиц 11-15 мкм, содержащего привитые к внутренней поверхности пептидные группы формулы глицин-L-лейцин,а в качестве элюента - водный буферный раствор с рН 7,1-7,4. Пример 1 . 1 0 i силикагеля Силасорб Si-ЗОО с диаметром noplQ нм и частицами 15 мкм обрабатывают гамма-глицидоксипропилтриэтоксисиланомв натрий-ацетатном буферном растворе (рН 5,65) при нагревании на водяной бане и перемешивании. Продукт отмывают водой и кипятят 1 ч в 0,01 М НС1 для образования диольных групп. Далее сорбент отмывают водой, ацетоном и 200 мл абсолютированного диок- сана для обработки раствором пара- толуолсульфохлорида в абсолютированном диоксане, которую осуществляют при комнатной температуре в присутствии пиридина или триэтиламина.Полученную активированную гликофазу промывают на стеклянном фильтре 350 мл диоксана, сушат и промывают 0,1 М карбонатным буферным раствором с рН 8,5,- 0,6 г глицин-L-лейцина растворяют в 10 мл того же буферного раствора и добавляют туда актиЈъ 1

О

00

1 1

вированную гликофазу, которую выдерживают при комнатной температуре 2ч, отмывают в стеклянном фильтре и обрабатывают 0,5 М трис-HCl буферным раствором с рН 0,9. Сорбент с привитым пептидом помещают в 1 0 мл раствора, содержащего 0,5 г цистеина и 0,1 г папаина и выдерживают 2 ч для удаления пептида с доступных для фермента мест. Сорбент промывают водой, ацетонитрилом и высушивают.

Пример 2.80 мкл крови пациента смешивают в эппендорфе с 20 мкл цитратного буферного- раствора и центрифугируют 2 мин при 5000 об/мин. Образовавшийся слой плазмы отбирают шприцем и 25 мкл пробы наносят на колонку для жидкостной хроматографии, после чего элюируют 0,2 М фосфатным буферным раствором в градиенте концентрации трис-(гидроксиметил)аминометана от О до 0,015 М. Продолжительность анализа 10 мин, рН 7,4.

На чертеже представлен профиль хроматографического разделения про

тивосудорожных препаратов в плазме крови.

Формула изобретения

Способ определения противосудорож- ных препаратов в биологических жидкостях, включающий центрифугирование анализируемой жидкости, пропускание полученного супернатанта в потоке элюента через колонку, заполненную сорбентом с диаметром пор 6-10 нм, с гидрофильной внешней поверхностью и внутренней поверхностью, модифицированной гидрофобным пептидом, с последующим детектированием белковых и низкомолекулярных фракций, отлич ающийс я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве сорбента используют кремнезем с размером частиц 11-15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пептид формулы глицин-L-лейцин, а в качестве элюента - водный буферный раствор с рН,7,1-7,4.

5

0

5

Изобретение относится к медицине, может быть использовано для определения противосудорожных препаратов в биологических жидкостях. Цель - увеличение чувствительности способа определения. Плазму крови пациента наносят на колонку для жидкостной хроматографии и элюируют буфером с рН 7,1-7,4 в градиенте концентраций трис-гидроксиметиламинометана от 0 до 0,015 М. В качестве носителя используют кремнезем с размером частиц 11-15 мкм, содержащий привитый к внутренней поверхности пептид формулы глицин -L-лейцин. 1 ил.

Редактор М. Петрова

о г ч б в

Время май

Составитель Л. Сабурова

Техред Л.ОлийныкКорректор М. Пожо

Заказ 2150/45

Тираж 790

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное