Изобрете}1ие относится к области биотехнологии, в частности к производству препаратов для серологической диагнос тики трихинеллеза у людей и сельск(1хо яйственньгх животных.
Цел п ичобретения - увеличение вы- :хода культурального антигена и повыше н.и е его с п е 1Ц1фи ч н ос ти .
Пример 1. Беспородных белых Mbiiueii маггсп 18-20 г заражают мышеч- трихинелл в лоче 50 личинок на мыть. Через 45-60 дней животных -би)а10т, костно-М|1Пиечную ткань nepi рлривают в растворе искус- стнен ип о ж 1уяочно1 о сока (пепсин
медищ1нский 3,0 г, концентрированная соляная кислота 1,0 мм, дистиллированная вода до 100,0 мл) при 37 С в течение 20-24 ч. Изолированные личинки трихинелл 5 раз отмывают логическим раствором и наслаивают в объеме 5,0 мл в количестве 3,5- 4,010 личинок на градиент плотности глицерина (по 10 мл 60, 50, 40- и 30%-ного глицерина). Центрифуги- проводят при 1 500-2000 об/мин в течение 10 мин. Фракции, расположенные на границе 40-50% и 50-60% Г1П1церина, содержащие только жизнеспособные личинки, собирают, три ра4
СО
САЗ
яа o lMbin.TioT (1 г 1 лнце)ииа раствором )cfiKca с антибиотиками.
В растпоре Хенкса с добавлением канамицина в дозе 100,0 мкг/мл и Ш1- ворииа в дозе 100 мкг/мл добавляют стерильно раствор инсулина до конечной концентрации 0,020-0,030Ед/мл. В приготовленную среду стерильно
путем сопостарлення дан)1ых РИГА с культуральньм и коммерческим антигенами, полученных при исследовании сывороток крови различными паразитарными болезнями (описторхоз, аскаридоз, дифиллоботриоз, анкилосто- мидозы, тениаринхоз, энтеробиоз,лям- блиоз). Результаты этих исследований
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО АНТИГЕНА ПРИ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ | 2006 |
|
RU2322994C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЕННОГО АНТИГЕНА Trichinella spiralis | 2005 |
|
RU2287342C1 |
| Применение белкового экстракта в качестве антипролиферативного и цитотоксического средства | 2017 |
|
RU2671632C1 |
| СПОСОБ ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ ЛИЧИНОК ТРИХИНЕЛЛ МЕТОДОМ ЗАМОРАЖИВАНИЯ В ТУШКАХ НЕКОТОРЫХ ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ | 2012 |
|
RU2489026C1 |
| Способ обеззараживания проб мышечных тканей плотоядных животных, инвазированных личинками трихинелл в лабораторных условиях | 2023 |
|
RU2820538C1 |
| Способ определения количества гликогена в личинках трихинелл для контроля качества обезвреживания инвазионного материала | 2018 |
|
RU2681167C1 |
| АЛЛЕРГЕН ДЛЯ ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРИХИНЕЛЛЕЗА У СВИНЕЙ | 2000 |
|
RU2210985C2 |
| СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ТРИХИНЕЛЛЕЗА ПЛОТОЯДНЫХ И ВСЕЯДНЫХ ЖИВОТНЫХ | 2006 |
|
RU2339038C2 |
| Питательная среда для культивирования личинок ТRIснINеLLа SpIRaLIS | 1989 |
|
SU1689399A1 |
| АДЪЮВАНТНАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ИНЪЕКЦИОННЫХ ВАКЦИН ПРОТИВ ТКАНЕВЫХ ГЕЛЬМИНТОЗОВ | 2007 |
|
RU2348427C2 |
Изобретение относится к биотехнологии ,в частности, к производству препаратов для серологической диагностики трихинеллеза у людей и сельскохозяйственных животных. Целью изобретения является увеличение выхода культурального антигена и повышение его специфичности. Для этого проводят предварительную очистку личинок трихинелл от балластных белков с выделением жизнеспособной фракции личинок центрифугированием в 30-60%-ном градиенте плотности глицерина. Антиген получают при культивировании мышечных личинок трихинелл в течение 48-60 ч при 37°С в растворе Хенкса с антибиотиками и добавлением 0,020 - 0,030 Ед/мл инсулина. Использование предложенного способа позволяет повысить выход трихинеллезного культурального антигена на единицу биомассы трихинелл и увеличить специфичность серологической диагностики трихинеллеза. 2 табл.
15
20
Таким образом, испол ложениого способа позво выход трихинеллезного к антигена в 20-80 раз на массы трихинелл (25-45 личинок) и увеличить сп серологической диагност неллеза.
Формула изоб
вносят жизнеспособные личинки трихи- ю представлены в табл.2. нелл до конечной концентрацди -3.0- 3,5-10 личинок/мл среды. Культивирование проводят при 37 С в течение 48-60 ч при периодическом вст яхива- нии. Среду освобождают от личинок трихинелл центрифугированием при 3000-3500 об/мин в течение 10 мин или фильтрованием. В супернатанте или фильтрате среды определяют содержание белка по методу Лоури, разводят раствором Хенкса до концентрации белка 100,,0 мкг/мл и используют для иммобилизации на фармолинизиро- ванных и танизированных эритроцитах барана по общепринятой методике.
Пример 2. Жизнеспособные фракции личинок трихинелл культивируют в безбелковой питательной среде по примеру 1, но изменяют количество инсулина.
В табл. 1 показана зависимость накопления культурального антигена от дозы инсу.иина.
Пример 3. Сг1е1р1фичность культурального антигена определяют в реакции непрямой гeмaгглютинalI и
Способ получения кул антигена из Trichinella
25 включающий выделение мы нок, их очистку и культ в безбелковой питатель последуюи(им отделением дукта, о т л и ч а ю щ
OQ что, с целью повышения ггна и его специфичнос чинок проводят диффере центрифугированием в 3 диенте плотности глице тельную среду дополнит
инсулин в дозе 0,02-0, Таблица 1
Таким образом, использование пред ложениого способа позволяет повысить выход трихинеллезного культуральногс антигена в 20-80 раз на единицу био массы трихинелл (25-45 мкг на 10 личинок) и увеличить специфичность серологической диагностики трихинеллеза.
Формула изобретения
представлены в табл.2.
редставлены в табл.2.
Способ получения культурального антигена из Trichinella spiralis,
включающий выделение мышечных личинок, их очистку и культивирование в безбелковой питательной среде с последуюи(им отделением целевого продукта, о т л и ч а ю щ и и с я тем,
что, с целью повышения выхода анти- ггна и его специфичности, очистку личинок проводят дифференциальным центрифугированием в 30-60%-ном градиенте плотности глицерина, а в питательную среду дополнительна вносят
инсулин в дозе 0,02-0,03 Ед/мл. Таблица 1
