Способ определения инсулинпродуцирующей активности панкреатических клеток Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

(/

Изобретение относится к медицине, а именно к трасплантации панкреатических клеток при лечении сахарного диабета. Цель изобретения - повышение точности способа за счет определения внутриклеточного распределения инсулина. Островковые β - клетки поджелудочной железы окрашивают псевдоизоцианхлоридом, который дает специфическую метахроматическую реакцию с инсулином, и измеряют интенсивность люминесценции в УФ-лучах. При величинах 2,2-3,5 условных единиц у 90% и более клеток культуру считают пригодной для трансплантации.

Ич(Я )ретение относится к медицине и касается трансплантации панкреатически.х кле- гок при лечении са.харного диабета.

Целью и;и)бретения является повышение Т(;чностн способа за счет определения внут- рик-леточного распределения инсулина.

Пример I. Культуру островковых бета- к.леток поджелудочной железы новорожденных поросят, закреиивп ун)ся на слюдинках на 5-й день роста, фиксируют в жидкости , проводят в спиртах убывающей крепости, окисляют перманганатом калия и ок- ра1нивают водным 0,04%-ным раствором нсевдоизоцианхлорида в течение 20 мин. При цитоф. 1уориметрии выявляют 94% островковых клеток с интенсивностью свечения 2,2 и более условных единиц (фон приии- мается за 1 единицу). Культура признана П1)игодной для трансплантации. .10 крысам линии Вистар массой тела 140-170 г с алло- ксановым диабетом вводят внутрипечекочно но 800-- 1000 панкреатических островков этой нартии. У 7 опытных животных на 3 -

4-й день после ксеногенной ip. incii.ian г.чции o6niee состояние улучпл; тся ьпсче..ча

вялость, у 1еныли,1ась жаж.ла и 11(.1иурии, снизился уровень гликемии и порма.чизова, ея на 7-10-е сутки, ве. 1ичп.1ось ко,111Ч(.етно иммунореактивного ипс,тин. в сьп оротке крови. 5 контро. 1ьных крыс погибли на ) 14-й день пос,те иньекции а.ллоксана or нарастающих явлений кетоацпдоза.

Пример 2. Окрашены островковые клетки Fia 3-й день культивирования. При люминесцентной .микроскопии

/0% бета-к,1ето имеют интенсивность свечения 1,5 и менее условных единиц. Культура признана относительно пригодной для транец,;антации. 5 крысам линии Вистар массой тела 150 - 160 г е a,i,-io- ксановы.м диабетом вводят вну 1рицече1и)чно по 800-1000 ocTjjoBKOB. Положите,1ьный эффект отмечен только у одного животного, остальные погиб, 1И через 6 10 дней после имплантации от прогрессирующей недостаточности инсулина и нарушения обменных процессов.

Х

05

со к;)

Пример - 1 Окрашивают K vibiypy огтров- ков1,1 бета-клеток на 10-й день роста. Цито- ф, 14 ()|) и метрическое исследование позволяет обнаружить 92% клеток, интеиси15Н()сть свечения которых соответствует 1.2 ус.товных единиц. Культура панкреатических бета- клеток ири;1нана непригодной для трансплантации, так как не об.чадает достаточной ин- сулинпродуцирующей активностью. Пяти крысам линии Вистар массой тела 145- 160 г введено внутрипеченочно гю 800- 1000 островков этого срока ку.тьтивнрования. (л)ст()яние животных не улучн1илось. и они (югиб.чи спустя 7-12 дней noc. ie подсадки.

Использование изобретения позволит им- и.иштировать функниона. 1ьно активные ост0

5

ровковые к.тетки. ока:(1,1в;1кндие 1оложит1.мь ное в. шяние на течение экснериментально1 о диабета.

Формула и:(1 ч)ег1-нцч

(дюсоб определения инсулиннродуиир К)Н1ей активности напк Н атических клеток путем ок|)аски инсулина в ку. 1ьтуре )в- ковых клеток ноджелудочной желе.зы с но- слс дующс й ,ч ЮМ и нес цен т но и мик)(:)скопией, отличающийся гем. что, с целью новышения точности способа за сче; (1Преде.ления внут рнк.1ет()чного |)аспред1 .:и ния инсулина, в цессе роста ку, 1ьтуры окраску производят псевдоизоцианх.юридом.