СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ А'-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА (ПРЕДНИЗОНА) Советский патент 1962 года по МПК C12P33/02 

Известен сиособ получения А-дегидрокортизона (преднизона) из кортизои-ацетата с помощью его микробиологического дегидрирования и омыления смесью культур Corynebacterium simplex и Bacillus megatherium.

Известен также способ получения А-дегидрокортизона (нреднизона) путем микробиологического дегидрирования с одновременным дезацетилированием ацетата кортизона с помощью смешанной культуры Mycobacterium ИНМИ и Bacillus megatherium (штамм ВНИХФИ-1).

Предлагаемый способ нолучения А-дегндрокортизона (предннзона) позволяет устранить использование спорообразуюн,ей культуры, стандартизировать и упростить процесс ферментации, а также облегчает извлечение и химическую очистку готового продукта.

Отличительная особенность способа нолучения А-дегндрокортнзона (прелТнизона) заключается в том, что нолучсние нредиизопа ведется с помощью стерильного ферментного нренарата, полученного из Bacillus megatherium. Согласно нредлоЛсенному способу, ферментный препарат получают из Bacillus megatherium путем обработки в асептических условиях бактериальной массы 10-кратным объемом охлажденного ацетона с последующей обработкой осадка охлажденной смесью ацетона и эфира (1:1), эфиром и высушиванием на

воздухе. Для нолучения А-дегидрокортизопа (преднизона) из ацетата кортизона с помощью культуры Alycobacterium Sp. N-193 и ферментного препарата из Вас. megatherium в ферментатор загружают раствор стерильного фосфатного буфера, стерильный ферментный препарат и растворенный в ацетоне ацетат кортизона. Процесс ведут при 28°С в течение 20 час, после чего добавляют суточную культуру Mycobacterium Sp. N-193 и ведут процесс еще 2 час. По окончании процесса дегидрирования образовавшийся преднизон извлекают хлороформом и перекристаллизовывают из изопронилового спирта.

Пример 1. Приготовление ферментного препарата из Вас. megatherium.

Для получения нсходной беспоровой культуры Вас. megatherium колбу с питательной средой следующего состава, %: пептон-1, глюкоза - 3, КНоР04 - 2 при рП 6,7, засевают одной 17-19-часовой колонией Вас. megatherium, выращенной на кукурузно-глюкозном агаре нри 28°С. Колбу встряхивают на качалке при 28°С в течение 17-20 час.

Для приготовления стерильного ферментного препарата бактериальную массу собирают центрифугированием и обрабатывают 10-кратным объемом охлажденного до 10-15°С ацетона. Осадок переносят на воронку Бюхнера и промывают последовательио охлажденной

,месью ацетона и эфира (1 : 1) и эфиром. Препарат подсушивают на воздухе 15-20 мин и хранят в холодильнике. Весь процесс получения ацетонового препарата проводят в стерильных условиях (стерильная посуда и кварцевая лампа). Препарат со.крапяет активность, по крайней мере, в течение 3 месяцев (более длительный срок хранения не проверялся).

Пример 2. Проведение процесса дегидрирования и дезацетилирования ацетата кортизона.

В ферментер, снабженный мешалкой, барботером и обогревом и заполненный 5 л стерильного фосфатного буфера (рН 6,7), вносят 7 г стерильного ферментного препарата, после чего добавляют 0,5 г ацетата кортизона, предварительно растворенного в 100 мл ацетона. Процесс проводят при 28°С в течение 20 час, затем добавляют .1 л суточной культуры Mycobacterium Sp. N-193 и продолжают ферментацию еш;е 2 час. Контроль за ходом

процесса осуществляют путем хроматографии на бумаге в системе формамид-бензол и проявления пятен раствором Люголя. По окончании процесса дегидрирования образовавшийся преднизон извлекают хлороформом и перекристаллизовывают из изопропилового спирта.

Получают 0,3 г преднизона с т. пл. 230°С, полностью удоЕлетворяюш,его требованиям Британской фармакопеи 1958 г.

Предмет изобретения

Способ нолучения А-дегидрокортизона (преднизона) путем одновременного микробиологического дегидрирования и дезацетилирования ацетата-кортизона с помош.ью культуры Mycobaclerium Sp. N-193, отличающийся тем, что, с целью устранения использования спорообразующей культуры, процесс ведут с помопгью ферментного препарата, полученного из Вас. megatherium.