1АЯs^cK^fi Советский патент 1973 года по МПК C07J5/00 

1

Изобретение от нюсится к микробиологии, гоЧиее IK опособа-м получения л &к ар с таенных препаратов, в частности предйизолона.

Известен способ лолучеиия преднизолона с помощью Mycobacterium globiforme 193. Культуру выращивают в течение 24-48 час на кужурузно-глкжазной среде, затем виосят растворенный в этаноле гидрокортизон. Целевой продукт выделяют и перекристаллизовывают. Этот способ позволяет иопользавать концентрацию субстрата ие выше 1 г/л среды.

Цель изобретения - «нтенс-ификация процесса.

Это достигается тем, что культуру выращивают в присутствии ацетата кортизона, пидрокортизон ВНОСЯТ в то1Н1коизмельчеННОм состоянии с раз1мером частиц не .менее 5 1.

Цредлашаемый способ позволяет использовать Исходную 1концентрацию субстрата до 200 г/л среды.

Пример 1. Культуру Mycobacterium gtobiforme хранят на (Ку|курузно-1Глю1козН01М агаре: кукурузный экстракт IVo, глюкоза 1%, агар-агар 3%, BOAonpOiBoaiHaH вода 1 л, рН 6,8-7,2, или на МПА. Культуру выращивают на косом агаре в течение 4-5 суток на этой же среде. Затем водной бактериальной суспензией засевают 50 мл жидкой среды, разлитой в -медицинОКИе 1качалочные колбы. Ислользуют среду следующего состава: 1ку|курузный экстракт 1 % (На сырой вес), глюкоза IVe, зодолрозодная вода 1 л, рН 6,8-7,2.

Вместе с бактериальной суопензией в качестве индуктора вносят ацетат а орт 1зона

(10 мг в 1 мл метанола на 50 мл среды). Через 24 час роста (при биомассе 1,6- 2,5 мг/мл по сухому весу) ,в культур ал ьн у ю жидкость вносят водную суспензию тона оизмельченного гидрокортизона до конечного содержания 10 г/л среды. Гидрокортизон предварительно измельчают до величины частиц менее 5 . Трансформацию проводят при 28- 30° С на качалке 200-220 об/мин в течение 18-24 час. Содержание преднизолона в культуральной жидкости составляет , гидроко ртизона 6,8%, 20 /З-оксипредннзолона 2-

4Vo от исходного количества гидрокортизона.

Пример 2. Выращивают культуру так

же, как описано ,в примере 1. Затем в культуральную жидкость вносят водную суспензию тонкоизмельченного гидрокортизона до конечного содержания 20-50 г/л среды. При внесении субстрата в количестве 75-200 г/л среды увел. биомассу до 4-5 мг/мл

(|по сухому весу). Через 24-28 час роста биомассу собирают центрифугированием, не отмывая клеток от среды, затем суспендируют в .вадосадочной жидкости ;и вносят стероид. Трансформацию проводятВ тех же условиях,

что и выращивание. Через 12-24 час в зависимости от исходной .конценпращии гидро сортизона процесс дегидриравания оканчи.зается. При сверхвысоких .кои цен грациях гидракортизоиа 150-200 дегидрирование идет -медлеинее и не доходит до .конца при 200 . Контроль за ходом трансформации та-,кой же, как отисан в лр1И1мере 1. Содержание преднизолона в культуральной жидкости 90- (от теаретическопо) по данным (количественной хро1матографии на силуфоле-иУ254. Содержание примесей следующее, /о: гидрокортизона 6-8, 20у -преднизолона 1-2. Выделение преднизолона / вариант. Культуральную жиджость из 6 1колб (330 мл) быстро отфильтровывают через пористую BOpoHiKy (фильтр № 1) с одним бумажным и двумя полотняными (бяЗЬ) фильтра:ми. Осадок с фильтра переносят в колбу и кицятят 30 мин с 50-:Кратным объектом изопропилового спирта. Раствор декантируют, а осадок вторично кипятят с 50-кратным количеством изопропилового апярта. Объединенный ,изапропиловоспирто1вой раствор преднизолона обрабатывают 0,3 г активированнОГО угля при комнатной тамнературе. Уголь отфиль11равывают, и спирт упаривают в вакууме до 15 мл. Сконцентрированный раствор охлаждают в течение 16 час лри 0° С. Осадок преднизолона отфильтровывают, пр01мывают охлажденным нзопропило1ВЫ1м опиртОМ и высушивают в сушильном шкафу до постоянного веса лри 60-70° С. Получают 2,48 г лре(дни;золо на, что составляет 83,2Vo (от теоретического), т. пл. 231,5° С, Е« 402 (в .метаноле), (а) +104 (Б диоксане), пр;имесь 20 р-оксипред. низолона 0,5%, гидрокортизона 3-4%. Из культуральной жидкости после отделения кристаллов лреднизолона дополнительно выделяют путем экстракции хлористым метиленом 0,23 г продукта, который лервкристаллизовывают из -изапролилового спирта. Выделяют 0,11 г лреднизолона с. т. пл. 228,0°, EjVi 400, (a)f +102 (IB диоксане). // вариант. Культуральную жидкость экстрагируют 3 раза этилацетатом («по 1 л) объединенный экстракт упаривают до 300 мл, добавляют 0,3 г а-ктиви-рованного угля, килятят 5- 10 мин, уголь отфильтровывают, лромывают горяч:И М этилацетато м и растворитель отгоняют до 45 мл. PacTBOip охлаждают 16 час при 0° С для лолного выделения лреднизолона. Осадок отфильтровывают, промывают охлажденны.м этилацетатом и высушивают до постоянного веса лри 60-70° С. Получают 2,52 г преднизолона с т. лл. 230°, Е J«, 400 (в метаноле) (сс)д° +104 (в диоксане). Примесь 20 -океилредиизолона 0,, гидрокортизона 2-3%. Выход 85Vo (от теоретического). П р е д М е т изобретения Способ получения преднизолона путем выращивания культуры Mycob.acterium globiforme 193 на литателыной среде с после|Дующим внесением гидрокортизона, трансфорМации его с ломощью культуры, выделения и перекристаллизации стер|Оида, отличающийся тем,, что с целью интенсификации процесса, культуру выращивают в орисуиствии ацетата кортизона, а гидрокортизон вносят .в тонкоизмельченном состоянии с размером частиц менее 5 1.