СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТАТА Д'-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА Советский патент 1973 года по МПК C12P33/02 

1

|Изо|бретен,ие относится к микробиологическим способам получения лака.рствениых ирепарат01В и касается .получения ацетата А-дегидрокортизопа (ацетата нреднизо-на.).

Известные способы получения ацетата А-деги|Дрокортизона путем микробиологичеСК01ГО превращения ацетата кортизона и дальнейшбго выделения целевого продукта малопроизводительны.

Целью изобретения является интенсификация процесса получения конеч1Н01Го продукта.

Эта цель достигается тем, что трансформацию осуществляют с пОМощью 1культуры Mycobacterium globiforme 193, выращенной в присутствии индуктОра ацетата кортизона, а исходный стероид в,носят IB количестве 5 г/л среды И; более.

Ацетат кортизона можно вносить IB виде раствора в горячем метаноле, или шелкоДиоперснш 1В01ДНОЙ суспензии.

Пример 1. Культуру Mycobacterium globiforme 193, сохраняемую на кукурузпо/глюкозиом агаре (1% кукурузного экстракта, 1% глюкозы, 3% aira.p-airapa, рН после стерилизации 6,8-7,2), выращивают ,па этой же среде в течейие 4-5 суток и .полученной вод«ой бактериаль-ной суспензией засевают колбы емкостью 0,5 л со 100 мл среды того же состава, но без агар-агара. Вместе с бакте(риальной суснензией вносят 15 мг ацетата

кортизона. Через 24 часа, когда концентрация биомассы достигает значения 1,6-1,7 г/л (сухой вес), вносят горячий метанольный раствор ацетата кортизоиа (500 мг в 16 мл

метанола) при энергичном перемешивании. Концентрация исходного стероида составляет 5 г/л среды. Трансформацию осуществляют при 28°С на качалке при 200-220 об/мин в течение 9-12 час. Ход реакции дегид)рироваиия контролируют методом .хроматографии на тонкослойных пластинах Silufol ,UV 254 в системе |бензол-ацетон (3:1), а также с помощью полярографии. iB получонной культуральной жидкости содержание ацетата преднизона составляет 90-92%, ацетата кортизона 3-4%, преднизона 4-5%, 2|0р-оксицроизводного преднизона (на исходное количество ацетата кортизона). Выделение ацетата преднизона проводят .периодической

экст(ракцией. 500 мл культуральной жидкост трижды экстрагируют хлористым метилено-м (по 250 мл), растворитель отгоняют ie вакууме, а остаток перекристаллизовывают из 43 мл абсолютного изопропилового спирта с

0,2 г активированного угля. Кристаллизацию проводят нрц 0° в течение 16 час. Осадок отфильтровывают, промывают 2-3 мл охлажденного изопропиловаго спирта п сушат при 100°С. Выход 2,01 г препарата с т. пл. 237-

238°С (86% от теоретического количества).

Из ма,точ.но1ГО раствора можно дополнительно выделить О ,07 г препарата.

Прнмер 2. Культу|ру, выращиваемую, как это о.писано в примере , через 28 час роста .разводят iB 2 раза водопроБОДной Водой и вносят раствор ащетата кортизона в горячем метанольном pacTBiOpe из расчета 5 г/л среды. После траиофорМащии в тех же условиях в течение час и о,бра,бот.ки, аналогично оплсан.ной в примере 1, получают 2,34 г ацетата преднизола (84,2% от теоретического) ,

Пример 3. Исходную ;культу.ру хранят и выращи.вают, как это описано в примере 1. Затем 0,5 г ацетата кортизона растворяют в 16 мл горячего 1метанола и смешивают с 16 мл холодной ,вО|Ды. Из полученной смеси отгоняют метанол под вакуумом и сме.ши1вают .полученную водную суспензию с культу.ральной жидкостью. Трансформацию проводят в «олбал емкостью 250 мл в условиях, описанных iB тримере 1, в течение .18-20 час. 300 мл культуральной жидкости обра.батьгвают тремя порциями по 0,5 мл хлороформаj а дальнейшую обра.ботку хлоро-форменного экстракта ведут, ка.к это описано в примере 1. Получают 2,35 г ацетата лреднизона. (83% от теоретического)..

Предмет изобретения

П. Способ получения ацетата Д-дегидрокортизояа путем микробиологического превращения ацетата кортизона и выделения конечного продукта известяымИ методами, отличающийся тем, что, с целью интенсификации процесса., трансформацию осуще1ст1Вляют с помощью культуры Mycobacterium globiforme 193, выращенной ,в присутствии ИНдуктора ацетата кортизона, а исходный стероид вносят в количестве 5 г1л среды и более.

12.Способ по п. 1, отличающийся тем, что ацетат кортизона вносят в виде раствора, в горячем |метаноле.

13.Способ по п. 1, отличающийся тем, что ацетат кортизона вносят в виде мелкодисперсной водной су:спензии.