СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ А-ДЕГИДРОКОРТИЗОНА (ПРЕДНИЗОНА) Советский патент 1972 года по МПК C12P39/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологическим способам получения лекарственных препаратов.

Известен способ получения преднизона путем микробиологического превращения ацетата кортизона с помощью смеси чистых культур Alycobacterium globiforme 193 и Mycobacterium album 726.

Ис.ходная концентрация ацетата кортизона при использовании указанного сиособа сравнительно невелика, что приводит к низкой эффективности ферментационного процесса.

Цель изобретения - интенсификация процесса. Это достигается тем, что культуру Mycobacterium globiforme 193 выращивают в присутствии индуктора в течение 1-2 суток, культуру Mycobacterium album 726 выращивают без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в присутствии поверхностно-активного соединения. В качестве индуктора используют ацетат кортизона или прогестерон в количестве 10 мг на 100 мл среды, а в качестве поверхностно-активного соединения - аитифомсилан в количестве 0,1-0,3 мл 60%-ного раствора в эфире на 100 мл среды.

колбы е.мкостью 250 мл с 50 мл среды, сч)держаи1,ей в 1 л водопроводной воды при 6,8-7,2 (после стерилизации) 1 -1,5% кукурузного экстракта (на сырой вес) и 1%

глюкозы. Mycobacterium globiforme 193 выращивают 20-24 час, затем вносят 1%-ный метапольный раствор ацетата кортизона до концентрации 100 мг/л п продолжают выращивать еще 20-24 час до концентрации биомассы 4-4,5 мг/мл. Mycobacterium album 726 культивуруют без )ндуктора в течение 1 суток до фазы затухающего роста (количество биомассы достигает 3,5-4 мг/мл). По окончании культивирования смещивают

50 мл первой культуры, 100 мл второй и 350 мл стерильной водопроводной воды, добавляют 0,2 мл антнфомсилана, тщательно перемешивают Н добавляют 1 г ацетата кортизона, растворенного в 30 мл кипящего метанола,

при энергичном перемешивании. Трансформацию проводят при 28°С иа качалке при 200 об/мин в течение 26-32 час. Ход реакции контролируют методом бумажной хроматографии в системе бензол-формамид, а реакцию

дегидрирования - методом полярографии. Выход предиизона 90-95%. Выделение преднизона проводят периодической экстракцией. 1,8 л культуральной жидкости экстрагируют равным объемом хлористого метилена 4 раза. испарителе до объема 18 мл, выдерживают в холодильнике 15-20 час, выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают охлажденным хлористым метиленом « сушат над серной кислотой. Получают 2,83 г нредннзона (83,5%) с т. нл. 222°С, а после перекрнсталлнзации нз изопронилового спирта с углем (с последующим испарением растворителя) 2,57 г препарата с т. пл. 225°С. Пример 2. Выращивание культуры Мусоbacterium album 726 происходит, как это указано в примере 1, а для выращивания культуры Mycobacterium globiforme 193 в качестве индуктора применяют нрогестерон, проводят выращивание в течение 1 суток. Полученные культуры смешивают в соотношении 2 : 1 (по биомассе), разбавляют водой в 3 раза и добавляют поверхностно-активное вещество и горячий метанольный раствор ацетата кортизона. Через 32-36 час процесс микробиологической трансформации оканчивается. Выход преднизона (по данным бумажной хроматографии) 85-90%. Предмет изобретения 1.Способ получения Д-дегидрокортизона (преднизона) нутем микробиологического превращения ацетата кортизона с помощью смеси чистых культур Mycobacterium globiforme 193 и Mycobacterium album 726, отличающийся тем, что, с целью интенсификации Процесса, культуру Mycobacterium globiforme 193 выращивают в присутствии индуктора в течение 1-2 суток, культуру Mycobacterium album 726 выращивают без индуктора до фазы затухающего роста, и процесс трансформации проводят в Приоутст.вии поверхностноактивного соедине ния. 2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве индуктора используют ацетат кортизона или прогестерон в количестве 10 «г/ 100 мл среды. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве поверхностно-активного соединения иснользуют антифомсилан в количестве 0,1 - 0,3 мл 60%-ного раствора в эфире на 100 мл среды.