Способ получения ацетилхолинэстеразы из мембраны эритроцитов крови человека Советский патент 1989 года по МПК C12N9/00 B01J20/24 

Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов вьщеления ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промьшшенности.

Цель изобретения - повышение удельной активности ацетилхолинэсте- разы.

Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0-1,2 М, а затем проводят об- работку раствором дезоксихолата натрия (ДХН).

Пример 1.К20МГ стромы добавляют 1,0 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5) и 1,0 мл . После вьщерживания в течение 2 ч определяют активность АХЭЧ и концентрацию белка в растворе, проводят центрифугирование при 80000 об/мин в течение 15 мин. В супернатанте определяют

активность фермента. Активность АХЭЧ в супернатанте составляет 1% от исходной.

Пример 2. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5), 0,177 г NaCl и 1,0 мл . После вьщерживания в течение 2 ч определяют активность фермента и концентрахщю белка. Затем проводят центрифугирование раствора при 80000 об/мин в течение 15 мин. В супернатанте определяют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Активность фермента в супернатанте составляет 30% от исходной.

Пример 3. К20мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5) и 1 МП 2%-ного раствора ДХН. Происходит полное растворение взвеси стромы. В растворе измеряют активность фермента и концентрацию белка. После вьщерживания в течение 2 ч

и со to

О5

сохраняется 60% активности АХЭЧ от исходной.

Пример 4. К 20 мг стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5), 0,058 г NaCl и 1 мл 2%-ного . раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После вьщерживания в течение 2 ч и центрифугирования со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин IQ определяют в супернатанте активность фермента и концентрацию белка. В супернатанте сохраняется 100% активности АХЭЧ.

Пример 5. К 20 мг стромы 15 добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рН 7,5), 0,117 г NaCl и 1 мл 2%-ного раствора ДХП. Наблюдается выпадение осадка. После выдерживания в течение 2 ч проводят центрифугиро- 20 вание со скоростью 80000 об/мин в течение 15 мин. В супернатанте определяют активность фермента и концент рацио белка. Сохраняется 100% активности АХЭЧ.-25 ; Пример 6. К 20 мг стромы добавляют I мл 0,2 М фосфатного буфера ;(рИ 7,5), 0,173 г NaCl и 1 мл 2%-ного

меряют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 93% активное ти фермента.

Пример 7.К20МГ стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рИ 7,5), 0,234 г NaCl и 1 мл 2%-ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После вьщерживания в течение 2 ч и центрифугир ова- ния в течение 15 мин со скоростью 8000 об/мин определяют в супернатанте активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 90% активности ОТ исходной.

- Полученные данные приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ получения ацетилхолинэсте- разы из мембраны эритроцитов крови человека, предусматривающий солюбили- зацИю фермента с помощью дезоксихола- та натрия в фосфатном буфере, отличающийся тем, что, с целью повышения удельной активности ацетилхолинэстеразы, солюбилизацию проводят в присутствии хлористого

раствора ДНХ. Наблюдается вьшадение.

осадка. После вьщерживания в течение натрия в концентрации 1,0...1,2 М, 2 ч центрифугируют со скоростью введение которого осуществляют перед 8000 об/мин в течение 15 минут. Из- внесением дезоксихолата натрия.

меряют активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 93% активное ти фермента.

Пример 7.К20МГ стромы добавляют 1 мл 0,2 М фосфатного буфера (рИ 7,5), 0,234 г NaCl и 1 мл 2%-ного раствора ДХН. Наблюдается выпадение осадка. После вьщерживания в течение 2 ч и центрифугир ова- ния в течение 15 мин со скоростью 8000 об/мин определяют в супернатанте активность АХЭЧ и концентрацию белка. Сохраняется 90% активности ОТ исходной.

- Полученные данные приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ получения ацетилхолинэсте- разы из мембраны эритроцитов крови человека, предусматривающий солюбили зацИю фермента с помощью дезоксихола та натрия в фосфатном буфере, отличающийся тем, что, с целью повышения удельной активности ацетилхолинэстеразы, солюбилизацию проводят в присутствии хлористого

Изобретение относится к препаративной биохимии, касается способов выделения ацетилхолинэстеразы и может быть использовано в медицинской и микробиологической промышленности. Целью изобретения является повышение удельной активности ацетилхолинэстеразы. Способ заключается в том, что к взвеси мембран эритроцитов в фосфатном буфере добавляют хлористый натрий до концентрации 1,0-1,2 М, а затем проводят обработку раствором дезоксихолата натрия. 1 табл.