Способ определения форидона в плазме крови Советский патент 1989 года по МПК G01N33/52 

«Изобретение относится к способам определения лекарственных средств в биологических жидкостях.

Цель изобретения - упрощение способа.

Способ осуществляется следующим

Образом.

.Из локтевой вены берут кровь, получают плазму и помещают .,1 мл плазмы в пробирку со шлифом (контроль) . После взятия контрольного образца крови больноьгу назначает 20 мг форидона и через 3 ч берут , получают плазму крови (рН 7, 2-7,6), 1 мл плазмы помещают в пробирку со шлифом (опыт). В обе пробирки добавляют по 6 мл этилацетата.

встряхивают 20 мин и отстаивают . 30 мин. Верхний слой экстракта помещают в колбу и получают сухой остаток путем отгонки с помощью роторного испарителя. Полученный сухой остаток растворяют в 5 мл диметил- сульфоксида, прибавляют 0,05 мл 1 н.раствора гидроксида калия, инкубируют смесь Б течение 4-6 мин и определяют интенсивность флюоресцен , ции опытного и контрольного образцов клиническим флюорнметром при А возбуждения 436 нм и Д флюоресценции 510 нм. По разнице интенсивности флюоресценции опытного образца и контроля по калибровочной кривой определяют содержание аниона форидона в 1 мл диметилсульфоксида и пере4 СО СП

д

3149

Считывают содержание форидоиа в 1 мл Лпазмы.

Построение калибровочной кривой. В ряд пробирок к 1 МП плазмы мик- р1ошприцем прибавляют стандартный раствор (А или Б) форидона в этаноле Так, чтобы МП 1шазмь1 содержал от 20 до 1000 нг форидона, встряхивают и прибавляют по 6 мл этилацетата,

Далее проводят анализ.

Инте11сивность флюоресценции опыт образца отн. ед. 26,8, интенсив ость флюоресценции контрольного об- азца 24,8 отн. ед. , разница состав- 4яет 2,0 отн.ед.

: По калибровочной кривой находят фколько аниона форидона соответств фт 2,0 отн.ед. интенсивности флюо- 1 есценции. Получают 9,0 нг аниСна форидона в 1 МП диметилсульфоксида. /jna анализа использовано 5 мп диметилсульфоксида 9, А5,0 нг. ; &1едовательно, 1 мл плазмы крсйзи Додержит 45 нг форидона.

Используемые реактивы: этилацетат Дважды перегнанный при 77 С, диметил Сульфоксид, сушенный гидроксидом йалия, перегнанный в вакууме, 1 н.;- раствор гидроксида калия, стандарт- rtbie растворы форидона в этаноле: йаствор А - 0,1 г стандартного с| бразца форидона в 100 мл этанола (JB мерной колбе), раствор содержит IjOOO мкг форидона в 1 мл; раствор Б и 5 мл раствора А в 100 мл мерной йолбе и этанол до метки-, раствор содержит 50 мкг форидона в 1 мп..

Пример -, Больной (. , 58 лет Диагноз: гипертоническая болезнь II, артериальный кардиосклероз .о При Постуштении в больницу жалобы на головокружение, артериальное давлени (АД) 165/105 м рт.ст., частота сердечных сокращений (ЧСС) 71.

По предлагаемой методике больно- biy брали кровь до приема препарата (контроль) и через 3 ч после одноразового приема 20 мг форидока (опытный образец). Получили плазму крови рН плазмы крови 7,2. I мл контрольной и опытной экстрагировали CS 6 мл этилацета-/а, получили сухой остаток, котог.ый растворили в 5 мл диметилсульфоксида, прибавили 0,05 м 1 н.раствора гидроксида калия, инкубировали раствор 5 мин и определили интенсивность флюоресценции опыт- лого и контрольного образцов при

0

5

7

o

5

с

0

5

5

0

1-4

возбуждения 436 им и / флюоресценции 510 им. По разнице интенсивности флюоресценции, используя калибровочную кривую, определили, что 1 мл плазмы крови больного содержит 92,9 13,4 нг форидона. Несмотря на то, что концентрация форидона в крови больного быпа достаточной- для получения гипотензивного эффе:кта, эффект отсутствовал, а именно, артериальное давление через 3 ч оставалось 165/105 мм рт.ст., частота сердечнцх сокращений 78. Следовательно, дальнейшее увеличение дозы форидона не-. целесообразно.и при проведений терапии рекомендовано форидон заменить другим препаратом. Больному назначена терапия празозином, который оказал положительный гипотейзивный эффект,

П р и м е р 2. Больная С., 43 лет.

Жалобы на давление в висках, ус- талрсть. Артериальное давление повышено с 1979 года. Последние 3-4 года АД бьшо повышено до 240/150 мм рт. ст. Диагноз: артериальная гипертензия. Сопутствующие заболевания - бронхиальная астма, легочно-сердечная недостаточность I, энфизема легких.

АД при поступлении 200/1 20 мм рт.ст, ЧСС 80 раз в минуту.

По методике изобретения больной брали кровь до приема препарата (контроль) и через 3 ч после одноразового приема 20 мг форидона (опытный образец). Получили плазму крови, рН плазмы крови 7,6. 1 мл контрольной и опытной плазмь экстрагировали с 6 мл этилацетата, получили сухой остаток, который раствррилк в 5 мл диметилсульфоксида, прибавили 0,05 MI 1 н.раствора гидроксида калия, инкубировали раствор) 5 мин и определили интенсивность флюоресценции опытного (1 контрольного образцов при А возбуждения 436 нм и Д флюоресценции 510 нм. По разнице интенсивности флюоресценции, исгГользуя калибровочную кривую, определили, что 1 мл плазмы крови больной содержит 22,5-i t3,3 нг форидона.

После приема 20 нг форидона через 3 ч, т.е. в пик максимального f HnoTeH3KBHoro действия АД снизилось с 180/120 на мм рт.ст. Однако гипотензивный эффект не достиг желаемого уровня и концентрация форидона (22,3 нг) в крови была ниже оптимальной (ДО нг/мл концентрации).

514975716

С целью увеличения эффекта боль- но, надо было увеличить до досгиже- ной в дальнейшем назначили увеличе- ния оптимальной концентрации ( 4090 нг/мл) форидона в плазме крови. У остальных 22,5% больных с недостаточно выраженным гипотензивным эффектом концентрация форидона в крови была достаточной для получения терапевтического эффекта, им бьшо не- 0 целесообразно далее увеличивать дозу В дальнейшем рекомендовано примене- форидона. Для получения терапе втичесния дозы форидона по 20 нг 4 раза в день, т.е. 80 мг в сутки. После такого увеличения дозы через 8 дней терапии исходное АД до приема препарата было- 160/105, через 3 ч после приема 20 мг форидона 150/100 мм рт.ст. Побочные реакции не отмечались.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения форидона в плазме крови. Целью изобретения является упрощение способа определения форидона в плазме крови для использования в клинических исследованиях. Сущность изобретения состоит в том, что препарат экстрагируют из плазмы крови этилацетатом, выпаривают до сухого остатка, растворяют в диметилсульфоксиде, для повышения чувствительности флюоресцентного анализа переводят форидон в анионную форму добавлением гидроксида калия и определяют интенсивность флюоресценции клиническим флюориметром.

ние форидона по 20 мг 4 раза в день амбулаторно.

По предлагаемой методике было обследовано 49 больных артериальной г пертензией. При обычной дозировке 10 или 20 мг форидона у 60,7% больных через 2-4 ч после приема препарата бьш получен нормальный гипо- тензивньй эффект,, который коррелировал с концентрацией форидона (40- 90 нг/мл) в плазме крови.

У 30,3% больных при этой дозе форидона гипотензивный эффект бьш незначителен или отсутствовал. Опреде- 25 1 н.раствор гидроксида калия при

ление форидона в плазме крови показало, что у 8,1% больных через 3 ч после приема препарата концентрация форидона была недостаточна (ниже

40 нг/мл ). Это явилось причиной от- 30 опытного и контрольного образцов сутствия желаемого терапевтического при длине волны возбуждения 436 нм эффекта. Дозу препарата, следователь- и длине волны флюоресценции 510 нм.

Редактор Л. Пчолинская

Составитель А.В. Скурат Техред Л.Олийнык .

Заказ 4439/47

Тираж 789

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

кого эффекта необходимо было заменить препарат.

Фор мула изобретения

Способ определения форидона в плазме крови путем экстракции, выпаривания и анализа сухого остатка в опытном и контрольном образцах,

отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, экстракцию проводят этилацетатом при рН 7,2- 7,6, сухой остаток растворяют в диме- тилсульфоксиде, добавляют к раствору

соотношении -диметилсульфоксид - гидр- оксид калия I00 : 1, инкубируют смесь в течение 4-6 мин и определяют разницу интенсивности флюоресценции

Корректор с. Шекмар

Подписное