Способ определения активности симпатической нервной системы Советский патент 1984 года по МПК G01N33/48 

vl

ел

р:

ND Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицин ских исследованиях для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний и повьгшевия эффе тивности лечения Известен способ определения состо яния симпатико-адреналоЕОй системы по изменению уровня катёхоламинов (норадреналина и адреналина) в крови и моче l3 Известен также способ определения состояния симпатйческоя нервной системЕз по клиническим признакам, например, потливости, повы.елшю час тоты сердечных сокращений 2 . Недостатком известного способа является то, что этот способ основа на субъективной оценке н специфических признаков и, следовательно; не позволяет количественно определять активность симпатической нервной системы. Целью изобретения является повышение точности способа, Указанная цель достигается тем что согласно способу определения ак тивности симпатической .нервной сист мы, измеряют содержание дофамина и норадреналина .в слезной жидкости до и после введения -диоксифекилалани на, и изменение этих показателей свидетельствует об активности, симпа тической нервной систещд Способ осуществляется следующим образоМо В течение контрольного периода (4-5 ) из пищи обследуемого исклю чают продукты, влияющие на обмен ка техоламинов, а также отменяют медикаментозные препараты. На шестые су ки из конъюнктивального мешка глаза обследуемых лиц забирают микропипет |кой 0,05-0,5 мл слезной жидкости по ле вдьзхания через нос раствора наша™ тарного спирта. К образцу добавл5пот 0,3-0,5 мл ОД% раствора ЭДТА. Затем обследуемому перорально вводят L-ДОФА из расчета 3,8-4,2 мг/кг веса и через 3-5 ч после приема L-ДОФА повторяют отбор слезной жидко;сти, к которой также добавляют то же количество ЭДТА. Оба образца дово дят до рН 8,2-8,5 фосфатным буфером рН .6,5 и 1н NH40H и помещают на колонку с окисью гшюминия, После адсорбции катехоламины элюируют 0,25 н. уксусной кислотой дваж ды ho 3,5 мл. Уксуснокислый элгоат доводят до рН 4,2 1-2 каплями 1 н. раствора аммиака и затем отбирают . по 1 мл в контрольную и опытную пробы, в которые предварительно помещают по Г мл 0,1 М фосфатного буфера .с рН 4,2, Затем оставшееся количе ство элюата доводят до рН 6,2, учитывают- количество аммиака, псяиедшего яа титрование, и в две пробы отбираю количество раствора, соответствующее 2 мл элюата. В эти пробы предварительно помещают по 1 ил 0,1 М фосфатного буфера с рН 6,2. Полученные две опытные пробы уксус.ного элюата с рН 6,2 и 4,2 окисляют 0,1 мл 0,25%-ного раствора феррицианида калия в течение 4 мин и затем добавляют как в опытную, так и в контрольную Пробу 0,5 мл 0,2%-ного раствора аскорбиновой кислоты, свежеприготовленного на 5 н .растворе щелочи. Через 3 мин все пробы доводят водой до 5,0 мл, а в контрольные пробы добавляют по 0,1 j-лл 0,25%-ного раствора феррицианида калия,.Для большей стабилизации флюоресценции опытные и контрольные пробы охлаждают: на льду в период измерения флюоресценции. Обе пробы с уксуснокислым элюатом рН б, 2 и 4,2 измеряют на спектрофлюориметре при длинах волн 410 и 510 нм. Для определения дофамина количество уксуснокислого элюата, доведенного до рН 6,2 и - соответствующего . 1 мл исходного элюата, добавля1от к 1,0 МП 0,1 М фосфатного буфера .с рН 6,2 в опытную и контрольную пробы. Объем опытных и контрольных проб доводят до 3,5 МП водой и окисляют 0,2 мл 0,02 н,раствором йода в течение 4 мин. Затем к опытной пробе добавляют 0,5 мл щелочного сульфита (1 г кристаллического сульфита натрия растворяют в 2 мл воды и доводят 5 н.раствором едкого натра до 20 мл), а в контрольную пробу 0,45 мл 5 н. раствора щелочи. Через 7 мин во все пробы помещают, по 0,7 мл 5 н.раствора уксусной кислоты и тщательно их взбалтывают. Затем пробы облучают кварцевой лампой в течение 15 мин и после добавления в контрольные пробы по 0,05 мл сульфита (1 г кристаллического сульфита на 2 мл воды) из-, меряют флюоресценцию при длинах волн 330 и 380 ммк. Флюоресценцию образцов сравнивают с флюоресценцией стандартных растворов катехоламинов известной концентрации., производят расчеты и выражают результат:ы в нг/0,1 мл слезной жидкости . Количественное определение катехоламинов Б слезе является показателем активности только симпатической нерв-5 ной системы ввиду особенностей нннер. вации слезной железы. Это подтверждается отсутствием увеличения в слезной жидкости адреналина, так как биосинтез катехоламинов в симпатической нервной системе заканчивается на стадии образования норадреналина, ..Пример 1. Обследуемый К. П1эактически ЗДОРОВ. На основании определения катехоламинов в слезной жидкости было установЛено одновременное увеличение содержания дофамина и норадреналина после приема L -ДОФА, что указывает на достаточность их биосинтеза и является количественным выражением активности симпатической нервной системы у здорового человека табл, 1) .

Таблица 1

Пример 3, Больная А. Диагноз - первичный альдостеронизм.

Результаты определения показали, что в этом случае имеет место нормальный уровень активности симпатической нервной системы по высвобождению дофамина и.норадреналина. В то же время в слезной жидкости содержится 17р,4 кг адреналина, котбрый исчезает после введения I, -ДОФА (табл. З).

Таблица 3

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СИМПАТИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕГ-Ы ПО содержанию катехоламинов, отличающийся тем, что, с целью повыи ения точности способа,измеряют содержание дофамина и норадреналина в слезной жидкости до и после введения L -диоксифенилаланина и по изменению этих показателей судят об активности симпатической нервной системы.

П t и м е р 2. Вольной Л. Диагноз - гипертоническая болезнь.

Результаты определения показали, что реакция симпатической нервной системы у данного больного отличается от таковой у здоровых лиц. В ответ на L -ДОФА содержание норадреналина повышает :я так же, как и у здоровых, а дофамина, напротив, значительно понижается (табл. 2).

- Т а б л и ц а 2

20

250,4

170,4

Фон

Через 3 ч после приема L-ДОФА

28,1

410,0

Предлагаемый способ может найти широкое применение в клинических исследованиях, поскольку для точно направленного патогенетического лечения, обладающего наибольшей эффектив ностью, необходимо звание состояния симпатической нервной системл - одной из ведущих систем нейро-гуморальной регуляции. .