Способ моделирования паркинсонизма Советский патент 1989 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к нервным болезням.

Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Крысу под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) фиксируют в стереотак- сическом аппарате, затем производят срединный разрез кожных покровов черепа, удаляют надкостницу, бормашиной высверливают трепанационные отверстия и вводят направляющую канюлю (внешний диаметр 0,5 мм) по координатам (АР -5,3, L 2,5; Н , 8,0). Фиксацию канюль осуществляют с помощью быстротнердеющей зубоврачебной пластмассы типа Норакрил. Прооперированное животное в течение 10-14 дней находится при обычном содержании и кормлении. Для адаптации животного к условиям эксперимента и предстоящей внутримозговой инъекции препарата его ежедневно в течение 5 мин держат в руках. На 1(|-1А-м день после операции

через имплантированную канюлю с помощью микроинъектора производят введение раствора дельта-сон индуцирующего пептида. При этом в течение 2-3 мин вводят 1-3 мкл раствора (5- 10 нмоль в физиологическом растворе), после введения еще в течение 2-3 мин канюлю оставляют на месте для более полной диффузии препарата и предотвращения его обратного вытекания. После извлечения канюли крысу помещают в прозрачную камеру для визуальной регистрации изменений.

Пример 1. Крысе-самцу линии Вистар массой 275 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксичес- ки билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (АР -5,3, L 2,5; Н 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы Норакрил. Через 10 дней после операции (в течение всего времени животное находилось в обычных условиях содержания и кормления) в условиях

§

(Л

СП

о

Од

и

свободного поведения крысы с помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовленный раствор дельта- сон индущфующего пептида в дозе 5,0 нмоль в 1 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 2,5 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в тече- кие 3 мин. Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х 60 х 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 5 минут после инъекции у крысы отмечается замира- ние, в течение 2,5 мин у животного развивается флексорная установка туловища - голова прижимается к передним лапам, развивается характерная горбатость, задние конечности рас- ставлены в стороны и выдвинуты вперед. Длинник затьшок-основание хвоста составляет 11,8 см (до введения пептида в состоянии покоя 13,5 см). При пассивном отведении конечности ощущается значительное сопротивление Частота сердечных сокрал1ений снижается с 410 до 350 в минуту, а частот дыхания - со 112 до 82 в минуту. Определение двигательной активности ме тодом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика установленного в подвижном полу за 2 мин) показало снижение этого показателя с 817 до 130j отмечается также сниже ние горизонтального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения ДСИ составляло 21 за 2 мин, после введения - 1, а число вepтикaльн JГX стоек - соответственно В и 0. У крысы развивается птоз, движения вибрисс отсутствуют. В период непродолжительной локомоции, провоцируемой болевым раз дражеи11ем, наблюдается скованность движений, уменьшение длины шага.

Таким образом, у крысы воспроизведен остро формирующийся акинетико- ригидный паркинсонический синдром.

П р и м е р 2. Крысе-самцу линии Вистар массой 290 г под гексеналовым наркозом (100 мг/кг) стереотаксичес- ки билатерально имплантируют канюли (наружный диаметр 0,5 мм) в зону черной субстанции (ЛР -5,3, L 2,5; Н 8,0). Канюли фиксируют с помощью быстротвердеющей зубоврачебной пластмассы Норакрил. Через 11 дней после операции (в течение

5 0 Q

0

этого времени животное находилось в обычных условиях содержания и кормления) в условиях свободного поведения крысы С помощью микроинъектора билатерально вводят свежеприготовленный раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 7,5 нмоль в 2 мкл физиологического раствора. При этом каждое введение осуществляют в течение 3 мин и после прекращения введения канюли продолжают оставаться на месте в течение 3 мин. Затем крысу помещают в прозрачную камеру (40 х X 60 X 30 см) для визуальной регистрации поведенческих изменений. Через 6 мин после инъекции у крысы отмечается замирание и п течение последующих 1,5 мин у животного развивается флексорная установка туловища - голова прижимается к передним конечностям, появляется характерная горбатость, задние конечности расставлены в стороны и выдвинуты вперед. Длинник затылок - основание хвоста составляет 11,9 см (до введения пептида в состоянии покоя 13,4 см). Отмечается птоз, уменьшается движение вибрисс. При пассивном отведении правой передней конечности ощущается значительное сопротивление. Частота сердечных сокращений снижается с 385 до минуту, а частота дыхания - с 98 до 84 в минуту. Определение двигательной активности методом прямой актометрии (подсчет числа колебаний сейсмодатчика, установленного в подвижном полу, за 2 мин) показало снижение этого показателя с 736 до 57; отмечается также cнIiжeниe горизо - тального и вертикального поведения в открытом поле: число пересеченных квадратов до введения составляло 17 за 2 минуты, после введения - 3, а число вертикальных стоек - соответственно 4 и 0. В период непродолжительной спонтанной локомоции, отмечаемой через 15,5 мин после введения пепт1- да, у животного наблюдается скованность движений, уменьшение длины шага. Животное не реагирует на предъявление воды и ПИ11Ш. Изучение элек- тромиограм а1 камбаловидной М1лшцы и ЭЭГ-изменений показалб, что в период описанных поведенческих нарушений имеет место увеличение мьш1ечного тонуса и развитие пароксизмальной синхронизированной активности в хвостатых ядрах мозга.

, 1506Д71,

jо

Таким образом, у крысы воспроиз- -левой передней конечности ощущается

веден остро формирующийся акинетико-значительное сопротивление. Частота

ригидный паркинсонический синдром.сердечных сокращений снижается с ЗД9

Пример 3. Крысе-самке линиидо 297 в минуту, а частота дыхания - Вистар массой 280 г под гексеналовымс 102 до 89 в минуту. Определение наркозом (100 мг/кг) стереотаксическидвигательной активности методом пря- билатерально имплантируют канюли (на-мой актометрии (подсчет числа коле- ружный диаметр 0,5 мм) в зону чернойбаний сейсмодатчика, установленного субстанции (ЛР -5,3; L 2,5; Н tO подвижном полу, за 2 мин) показало 8,0). Канюли фиксируют с помощьюснижение этого показателя с 895 до быстротвердеющв зубоврачебной пласт-107, отмечается снижение горизонталь- масс,1 Норакрил. Через 14 дней посленого и вертикального поведения в от- операции в условиях свободного пове-крытом поле: число пересеченных квад- дения животного (в течение всего это-15 ДО введения составляло 27 за го времени крыса находилась в обычных2 мин, после введения - 7, а число условиях содержания и корм чения) свертикальных стоек - соответственно помощью микроин7-,ектора билатерально5 и 1 . В период непродолжительной вводят свежеприготовленный растворлокомоции, провоцируемой болевьп раз- дельта-сон индуцирующего пептида в20 дражителем, наблюдается скованность дозе 10,0 нмоль в 2 мкл физиологичес-движений, уменьшение длины шага. Жи- кого раствора. При этом каждое введе-вотное не реагирует на предъявление ние осуществляют в течение 3 мин иводы и пищи.

после прекращения введения канюпиТаким образом, у крысы воспроизве- продолжают оставаться на месте в те-25 ден остро формирующийся акинетико- чение 3 мин. Затем крысу помещают вригидный паркинсонический синдром, прозрачную камеру (40 х 60 х 30 см)Применение способа позволяет по- для визуальной регистрации поведен-высить воспроизводимость модели пар- ческих изменений. Через 8,5 мин послекинсонизма на 55% по сравнению с из- инъекции у крысы отмечается замира- О вестным способом, ние, в течение 3 MVIH у животного развивается флексорная установка туло-Формула изобретения вища - голова прюкимается к передним

лапам, отмечается характерная горба-Способ моделирования паркинсонизма

тость, задние конечности расставленыпутем введения животному химического

в стороны и вьщвинуты вперед. Длинниквещества, отличающийся

затылок - основание хвоста составля-тем, что, с целью повышения воспроет, 11,2 см (до введения пептида визводимости способа, вводят раствор

состоянии покоя 12,9 см). У крысыдельта-сон индуцирующего пептида в

развивается птоз, движения вибрисс,Q дозе 5-10 нмоль билатерально в черную

отсутствуют. При пассивном отведениисубстанцию мозга.

Изобретение относится к медицине, а именно к нервным болезням. Цель - повышение воспроизводимости способа. С этой целью животному билатерально в черную субстанцию мозга вводят раствор дельта-сон индуцирующего пептида в дозе 5-10 нмоль. Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели паркинсонизма на 55% по сравнению с прототипом.