Способ количественного определения микроорганизмов в тканях Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 C12N5/00 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике гнойных и раневых инфекций.

Цель изобретения - ускорение способа.

Пример 1. Образец ткани весом 1 г переносят в стерильную ступку, размельчают стерильными ножницами, до бавляют 9 мл стерильного физиологического раствора 0,5 г толченого стекла, тщательно растирают пестиком и переносят гомогенат ткани в стерильную пробирку. Гомогенат ткани.

1-,

содержащий 10 микробных клеток в 1 мл помещают в воздушный термостат с температурой 37°С и выдерживают 5 ч. Отбирают пробу объемом 1 мл и добав, ляют 0,01 мл 100 мМ раствора периодата натрия в 5%-ном тритоне Х-100 для получения окончательных концентрац11й 1 мМ и 0,05% соответственно, вьщержи- вают при комнатной температуре 3 мин. Затем из полученной смеси отбирают пробу объемом 0,2 мл и добавляют к 0,8 мл диметилсульфоксида (ДМСО). Полученный препарат используют для определения концентрации АТФ. Для этого в прозрачную пробирку объемом 1,5 мл помещают 0,9 мл биолюминесцентного реагента на основе иммобилизованной люциферазы светляков. Регистрируют фоновое свечение реагента () затем вводят 0,1 мл образца,полученного, : как описано выше, и регистрируют све- чение образца (). Затем в ту же

СЛ

о

QD СП

3150779

пробирку вводят 0,01 ип 10-микромоляр- ного раствора АТФ и регистрируют приращение интенсивности свечения (йТст) Концентрацию АТФ в образце рассчитывают по формуле:

САХФ „м .

1 ст

I П р и м 6 р . 2. Готовят суспензии ю микроорганизмов, наиболее часто встречающихся в медицинской практике (Pseu- idomonas aeriginosa, Escherichia coli, :Proteus vulgaris, Staphilococcus laureus S. epidermis, Klebsiella, En- 5 iterobacter, Acinetobacter, P.malto- Iphilia) в физиологическом растворе с различной концентрацией (от 10 до клеток в 1 мл). Приготовление стерильного образца ткани ведут сог- 20 JiacHo примеру 1, используя вместо физиологического раствора суспензию микроорганизмов. Инкубацию (5 ч) и последующую обработку и измерение АТФ ведут по примеру 1, В таблице приве- 25 дека зависимость концентрации АТФ от содержания микроорганизмов в образце.

.1

Продолжение таблицы

ю 5 0 25

30

35

40

Данные, приведенные в таблице, соответствуют прямолинейной зависимости с коэффициентом корреляции 0,93.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет в 5-10 раз сократить время анализа, упростить процесс,исключив три наиболее трудоемких операции на стадии культивирования, увеличить точность за счет создания специфической среды роста. Способ обладает высокой надежностью и экономичностью.

Формула изобретений

Способ количественного . определения микроорганизмов в тканях путем гомогенизации исследуемого образца в физиологическом растворе с последующим инкубированием и учетом результатов, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, после инкубирования гомогенат последовательно обрабатывают смесью растворов тритона Х-100 в концентрации 0,05-0,08% и периодата натрия в кон-/ дентрации 1-5 мМ на объем гомогената и диметилсульфоксидом при объемном соотнощении 1:4-9, затем в гомогенате определяют количество АТФ биолюминесцентным методом и по ее величине определяют, концентрацию микроорганизмов в образце.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике гнойных и раневых инфекций. Цель изобретения - ускорение способа. Для определения концентрации микроорганизмов исследуемый образец ткани гомогенизируют в физиологическом растворе, инкубируют в воздушном термостате. Затем гомогенат последовательно обрабатывают смесью растворов тритона Х-100 в концентрации 0,05-0,08% и периодата натрия в концентрации 1-5 мМ на объем гомогената и диметилсульфоксидом при объемном соотношении 1:(4-9). Далее в гомогенате биолюминесцентным методом определяют концентрацию АТФ, на основании которой выносят суждение о количестве микроорганизмов в анализируемом образце ткани. 1 табл.