СРЕДСТВО ДЛЯ ЗАЖИВЛЕНИЯ РАН "ЦЕЛЛЬГЕЛЬ", СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ РАН РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ ПОЛУЧЕННЫМ СРЕДСТВОМ Российский патент 2013 года по МПК A61K35/48 A61P17/02 

Изобретение «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ лечения ран различной этиологии полученным средством» относится к области медицины и ветеринарии, а именно к фармакологии, и предназначено для получения средства для ускорения заживления дефектов кожи и слизистых различного генеза.

Известен крем для увядающей кожи лица "Плацео" (См. патент РФ №2056834, МПК А61К 7/48, опубликовано 27.03.1996), содержащий белковые полипептиды, полученные селективной ультрафильтрацией суммарных белков плаценты, которые оказывают на кожу лица гериатрическое действие, при этом отмечается повышение содержания белка и витаминов В и Е в коже, стабилизирующие повышение тургора и эластичности.

Недостатком известного крема для кожи лица является низкая эффективность его регенерирующего действия на кожу.

Данный недостаток обусловлен тем, что полипептиды, повышающие содержания белка и витаминов В и Е в коже, способствуют увеличению влажности кожи и снижают тем самым регенерирующее действие.

Известно также косметическое средство для ухода за кожей с использованием развивающихся эмбрионов животных, содержащее основу в виде геля и компоненты на основе экстракта развивающихся эмбрионов (зародышей) животных, например крупного рогатого скота (заявка Франции N 2530466, МКИ А61К 7/48, опубл. 27.01.84 г.). Для экстрагирования используют не весь эмбрион животного, а только его зобную железу. Состав содержит (10-30)% экстракта эмбриона животного и (90-70)% основы в виде геля. Препарат наносят на кожу лица и тела для омоложения клеток кожи, защиты от морщин, повышения сопротивляемости кожи и замедления старения тканей.

Однако известное косметическое средство имеет недостаточную эффективность регенерирующего действия на кожу.

Эти недостатки обусловлены тем, что экстракт эмбриона животного обладает узким спектром их воздействия на кожу человека. Кроме того, использование экстракта развивающихся эмбрионов животных крупного рогатого скота ведет к гибели зародышей, что повышает себестоимость данного средства.

Известно также принятое за прототип регенерирующее косметическое средство для ухода за кожей (см. патент РФ №2142783, МПК А61К 17/02, опубликовано 20.12.1999), содержащее основу в виде геля полиэтиленоксида или желатина и компоненты на основе эмбрионов животных, в качестве которых используют гомогенат развивающихся эмбрионов птиц, в частности кур, в качестве биологически активных веществ природного происхождения используют масло апельсиновое, настойку подорожника, экстракты майских листьев березы и черемухи, сок алоэ, масло соевое или кукурузное, пчелиный воск, масляный раствор шиконина, сок черемухи Маака, сок черноплодной рябины, а в качестве биологически активных веществ химического происхождения используют глицерин, неорганические соли, например соли Хенкса, и двузамещенный фосфат натрия при следующем количественном соотношении всех компонентов косметического средства, мас.%:

Гомогенат развивающихся эмбрионов кур 0,5-5,0 Масло апельсиновое 0,05-0,1 Настойка подорожника 0,5-2,0 Экстракт майских листьев березы 1,0-4,0 Экстракт майских листьев черемухи 1,0-4,0 Сок алоэ 0,1-1,0 Масло соевое или кукурузное 3,0-7,0 Пчелиный воск 0,1-0,7 Масляный раствор шиконина 0,1-0,5 Сок черемухи Маака 0,1-0,5 Сок черноплодной рябины 1,5-3,5 Глицерин 1,0-3,0 Соли Хенкса 0,5-2,0 Фосфат натрия (двузамещенный) 0,5-1,5 Гель полиэтиленоксида Остальное

Однако гомогенат развивающихся эмбрионов птиц, в частности кур, в качестве известных составляющих косметического средства для ухода за кожей дают лишь узкий спектр их воздействия на кожу или волосы человека, так как в указанных препаратах используются лишь отдельные вещества (мукополисахариды или вещество, ингибирующее меланогенез или водорастворимое биологически активное вещество с молекулярной массой 100-10000 против морщин или вещества, стимулирующие рост волос и т.п.), не способствующие заживлению дефектов кожи и слизистых различного генеза, нарушений кожного покрова человека или животных.

Известен способ получения мази на основе комплексного гидролизата сырья животного происхождения для лечения кожных заболеваний, заключающийся в том, что костный спинной и головной мозг свиней, коров, овец и северного оленя, а также желтка куриного, перепелиного яиц смешивают в соотношении 10-30 вес.% с половинным объемом дистиллированной воды в миксере, делят на 4 равные части; одну кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота или углекислого газа с 2-3% соляной кислотой до получения аминного азота 500-600 мг%, вторую часть кипятят с обратным холодильником с 1-2% гидроокиси лития или гидроокиси калия, или гидроокиси натрия или их смеси в атмосфере азота до получения аминного азота 500-600 мг%, в третью часть добавляют трипсин кристаллический до 1% и ведут гидролиз при 37-40°С и рН 8,0-8,5 до получения аминного азота 500-600 мг%; в четвертую часть добавляют папаин бактериологический до 1% и ведут гидролиз при 37-50°С и рН 6,0-8,0 до достижения аминного азота 500-600 мг%; после окончания гидролиза смеси объединяют, доводят до рН 4,5-4,7 и кипятят 30-40 мин, после чего охлаждают до 5-10°С и фильтруют к осадку, содержащему 35-45% липидов, добавляют консервированную смесь из этилового, изопропилового спиртов, глицерина и демитилсульфоксида 15-35% каждого и 1-2 мг/мл метилпарабена в количестве 18-20% по весу от осадка и перемешивают (см. патент РФ №2372072, А61К 9/06, А61К 35/30, А61К 35/28, А61К 35/12, А61Р 17/02, опубл. 10.11.2009).

Недостатками известного способа и полученной этим способом мази являются высокая себестоимость и низкие эксплуатационные возможности.

Данный недостаток обусловлен большим количеством видов сырья животного происхождения, как то: костный спинной и головной мозг свиней, коров, овец и северного оленя, а также желтка куриного, перепелиного яиц.

Известен также принятый за прототип способ получения регенерирующего косметического средства для ухода за кожей с использованием десятидневных эмбрионов птицы, описанный в патенте РФ №2142783, МПК А61К 17/02, опубл. 20.12.1999, реализованном при получении косметического средства, в котором вначале приобретают или приготавливают отдельные компоненты средства для приготовления гомогената развивающихся эмбрионов птицы. Для этого берут свежие яйца птицы, например куриные, проверенные на сальмонеллез, т.е. имеющие ветеринарный сертификат, и закладывают в инкубатор для получения десятидневных эмбрионов. Десятидневные эмбрионы гомогенизируют в миксере в течение 10-15 минут. Далее продукт фильтруют и используют для получения косметических средств, для чего в реактор с мешалкой при комнатной температуре загружают в указанных выше концентрациях гель полиэтиленоксида, глицерин и растительные масла. Смесь гомогенизируют 20-30 минут. В полученную эмульсию при перемешивании добавляют биологически активные вещества животного и растительного происхождения (гомогенат развивающихся куриных эмбрионов, экстракты майских листьев черемухи и березы, настойку подорожника, соки черноплодной рябины и черемухи, сок алоэ и т.п.), а также добавляют соли Хенкса (Na⁺, K⁺, Са²⁺ и Mg²⁺) и фосфат натрия двузамещенный. Перемешивание всех компонентов средства осуществляют при комнатной температуре в течение 20-30 минут. В случае добавления в косметическое средство пчелиного воска его предварительно растворяют в растительном масле при интенсивном перемешивании при комнатной температуре или, подогревая до 30-40С. После перемешивания всех компонентов состава измеряют рН смеси. Если рН продукта оказывается ниже 7,0-0,2 (гель полиэтиленоксида имеет кислую среду), то в состав вводят едкое кали в количестве, достаточном для обеспечения в составе рН 7,0-0,2. Далее смесь еще раз гомогенизируют в реакторе в течение 20-30 минут, готовое косметическое средство расфасовывают в тару и хранят при температуре +(73)°С.

Недостатком известного способа является высокая себестоимость и низкие эксплуатационные возможности.

Данные недостатки обусловлены тем, что большое количество составляющих компонентов известного средства готовится очень долго, а некоторые соки, входящие в состав известного средства, сохранить без замораживания очень тяжело, например экстракт майских листьев черемухи и березы готовится в мае, настойка подорожника готовится в конце июля - начале августе, сок черемухи готовится в августе, а сок черноплодной рябины - в октябре.

Известен способ заживления лечения гнойных ран, описанный в патенте РФ №2257211, МПК А61К 33/00, опубл. 27.07.2005, включающий ежедневное покрытие раны средством, состоящим из гомогената свиной селезенки и оксигенированного перфтораном в следующих количествах: 100 г и 10 мл оксигенированного перфторана.

Недостатками известного способа лечения являются низкие эффективность и эксплуатационные возможности.

Этот недостаток обусловлен тем, что гомогенат свиной селезенки не обладает свойством улучшения кислородообеспечения тканей зоны воспаления, а с использованием повязок с перфтораном в первой фазе раневого процесса положительный эффект не наблюдается, а общие сроки заживления ран остаются большими.

Известен также принятый за прототип способ заживления ран, описанный в патенте РФ №2142783, МПК А61К 17/02, опубл. 20.12.1999, реализованном при лечении ран путем нанесения средства на поверхность раны тонким слоем один раз в сутки на 25-30 минут.

Недостатком известного способа лечения является низкая эффективность и ограниченность применения.

Данный недостаток обусловлен тем, что рану дополнительно обрабатывают хирургически с предварительным дезинфицированием, тем не менее сроки заживления большие, особенно трофических язв.

Техническим результатом заявляемого изобретения «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством является снижение себестоимости, повышение эффективности, эксплуатационных возможностей и ускорение заживления ран различной этиологии и локализации, дефектов кожи и слизистых различного генеза.

Поставленный технический результат достигается тем, что известное средство для заживления ран различной этиологии, содержащее гомогенат развивающихся эмбрионов птиц и гелиевую основу, согласно изобретению, содержит 1 мл суспензии клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶, полученной из гомогената 3-8 дневных куриных эмбрионов, в 1 мл основы Cellosire HECQP-52/000-H3», при этом применяют способ получения средства для заживления ран различной этиологии, на основе использования гомогената развивающихся эмбрионов птицы, предварительно проверенных на стерильность, согласно изобретению, когда берут куриный эмбрион 3-8 дней гестации, помещают его в криоемкости и замораживают в парах жидкого азота при t°=(-40)-(-45)°C со скоростью 1°-1,5°С в минуту, далее его размораживают в парах азота, отмывают физраствором, после этого удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, при этом добавляют к осадку физраствор, затем полученную тканевую суспензию гомогенизируют стерильным инструментом, далее из тканевой суспензии выделяют клетки, не разрушая их, добавляют физраствор и центрифугируют содержимое в течение 8-12 секунд, осаждают строму и выводят в надосадок фетальные клетки, которые переносят в стерильную емкость, вновь центрифугируют в течение 6-7 минут при 1400-1600 об/мин, далее удаляют супернатант, добавляют к осадку физраствор и ресуспендируют, в полученной суспензии определяют фенотип CD34 CD45 клеток и проводят контроль жизнеспособности клеток, доводят концентрацию клеток в образце от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶, после этого клетки куриных эмбрионов фенотипа CD34⁺ CD45 высевают в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ в 1 мл физраствора с последующей культивацией суспензии клеток в культуральных емкостях в СО₂ инкубаторе при t°=+36,5-37,5°C с содержанием СО₂ в атмосфере 4,5-5,5%, затем среду, содержащую клетки и продукты их жизнедеятельности, переносят в стерильные стеклянные центрифужные пробирки, центрифугируют и отбирают 1 мл супернатанта, содержащего клетки куриного эмбриона фенотипа CD34 CD45'' в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ в мл и вносят в один мл основы в виде геля, причем эмбрионы гомогенизируют в миксере, в качестве криоемкостей используют криопробирки емкостью 2 мл (Coastar), в качестве раствора для замораживания используют 90% Fetal Bovine Serum и 10% DMSO (диметилсульфоксид) в качестве криопротектора, при этом в качестве емкостей с жидким азотом используют сосуды Дюара, а охлажденные криопробирки с материалом хранят в емкости с жидким азотом при t°=(-165)-(-170)°C, в качестве физраствора используют 0,8-1,0% раствор натрия хлорида, а размороженный и очищенный материал гомогенизируют с помощью стерильного стеклянного пестика, концентрацию клеток в образце от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ в 1 мл основы в виде геля доводят физраствором, культивирование суспензии клеток в культуральных емкостях осуществляют в углекислом газе в CO₂ инкубаторе при t°=(+36,5)-(+37,5)°С с содержанием CO₂ в атмосфере 4,5-5,5% в течение суток, в качестве культуральных емкостей используют культуральные флаконы, причем в способе заживления ран различной этиологии, путем нанесения средства на поверхность раны, согласно изобретению, средство для нанесения ран накладывают тонким слоем один раз в сутки до полного заживления без применения или с применением перевязочных материалов на поверхность раны, при этом поверхность раны предварительно хирургически не обрабатывают и не дезинфицируют.

Между отличительными признаками и достигнутым техническим результатом существует следующая причинно-следственная связь.

В отличие от аналогов и прототипа преимуществами предлагаемой связанной единым изобретательским замыслом группе изобретений «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» являются высокая эффективность заживления ран и слизистых различного генеза, простота использования, атравматичность и безболезненность для пациента, широкий спектр показаний, возможность использования без участия медицинского персонала, отсутствие осложнений и побочных реакций, длительность хранения средства без утраты лечебных свойств. Основными преимуществами предлагаемого способа получения средства «Целльгель» являются техническая простота, поскольку «Средство для заживления ран «Целльгель» содержит только один продукт жизнедеятельности клеток куриного эмбриона именно 3-8 дней гестации в предложенной концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в 1 мл основы в виде геля низкий % разрушенных клеток, низкая степень дифференцировки при высокой жизнеспособности клеток в конечном продукте, все это основано на том, что гомогенат развивающихся эмбрионов птицы, в частности курицы, с последующим получением трех-восьмидневных эмбрионов, которые гомогенизируют и доводят до концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ суспензии клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в 1 мл основы в виде геля, содержит оптимальные соотношения всех компонентов (гормоны, ферменты, факторы роста и др.), необходимых для поддержания активности клеток и стимулирования их деления, а значит и регенерации кожи. Таким образом, заявляемая группа изобретений позволяет получить новое средство для заживления ран различной этиологии и локализации благодаря повышению регенерирующей и репаративной активности средства для заживления ран «Целльгель», способствующего заживлению ран различного генеза. Основным преимуществом предлагаемого средства и способа заживления с его использованием также является высокая эффективность, простота использования, атравматичность и безболезненность для пациента, широкий спектр показаний, возможность использования без участия медицинского персонала, отсутствие осложнений и побочных реакций, длительность хранения без утраты лечебных свойств, что отражено в примерах проведенного лечения на животных и на людях, как с применением перевязочных материалов на поверхности ран различной этиологии, так и без применения перевязочных материалов на поверхности раны, причем поверхность раны предварительно хирургически не обрабатывают и не дезинфицируют, что также подтверждает простоту использования, атравматичность и безболезненность для пациента предлагаемого средства для заживления ран «Целльгель» и способа заживления ран различной этиологии полученным средством «Целльгель». К основными преимуществами предлагаемого способа заживления ран различной этиологии полученным средством «Целльгель» являются не только техническая простота и то, что исключается, в отличие от аналогов и прототипа предварительная, в том числе хирургическая обработка ран, например обрезка рваных краев, а лечение не требует перевязочных материалов, дело в том, что раны, при таком способе заживления заживают очень быстро, исключая образование, рубцов, что также подтверждает его высокую эффективность. Следует заметить, что в предложенном средстве для заживления ран, как и в некоторых известных (аналоги и прототип) косметических и лечебных препаратах, находят широкое применение различные биологически активные вещества, животного, происхождения, которые, активизируя обмен веществ, улучшают физиологическое состояние кожи и регенерируют поврежденные ткани, но в отличие от существующих аналогов и прототипа, содержат биодобавку в виде белкового концентрата плаценты человека или гомогенат развивающихся эмбрионов птиц, в частности кур, в заявляемом изобретении «Средство для заживления ран «Целльгель» содержит только одни продукты жизнедеятельности клеток куриного эмбриона именно 3-8 дней гестации в предложенной концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в 1 мл основы в виде геля, что и способствует, в совокупности признаков, достижению технического результата, т.е. снижению себестоимости за счет быстрого заживления ран при миниминизации компонентов; повышению эффективности, позволяющей быстро заживлять раны без образования рубцов; эксплуатационных возможностей, позволяющих быстро заживлять трофические язвы и травмы кожи и слизистых различного генеза, полученные в результате облучения; ускорению заживления ран различной этиологии и локализации, дефектов кожи и слизистых различного генеза благодаря повышенной регенерирующей и репаративной активности предложенного средство для заживления ран «Целльгель», полученного предложенным способом.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством», позволил установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными совокупности всех существенных признаков заявленного изобретения.

По имеющимся у заявителя сведениям, совокупность существенных признаков заявляемого изобретения «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления различной этиологии полученным средством» не известна из уровня техники, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию "новизна". Определение из перечня выявленных аналогов прототипов, как наиболее близких по совокупности признаков аналогов, позволил выявить совокупность существенных, по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату, отличительных признаков в заявляемом средстве для заживления ран «Целльгель», способе его получения и способе заживления ран различной этиологии полученным средством, изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявленное изобретение «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» соответствует критерию "новизна".

Для проверки соответствия заявленного изобретения критерию "изобретательский уровень" заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявленного средства для заживления ран «Целльгель», способа его получения и способа заживления ран различной этиологии полученным средством для заживления ран «Целльгель». Результаты поиска показали, что заявленные «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» не вытекают для специалиста явным образом из известного уровня техники, поскольку из уровня техники, определенного заявителем, не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявленного изобретения преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, заявленное изобретение «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» соответствует критерию "изобретательский уровень".

Таким образом, изложенные сведения свидетельствуют о выполнении при использовании заявленного средства для заживления ран «Целльгель», способа его получения и способа заживления ран различной этиологии полученным средством» совокупности условий в том виде, как заявляемый способ охарактеризован в формуле изобретения, т.е. подтверждена возможность его осуществления с помощью технических средств, в описанных в заявке примерах. Средства, воплощающие заявленные средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством при его осуществлении, способны обеспечить достижение усматриваемого заявителем технического результата, а именно снижение себестоимости, повышение эксплуатационных возможностей, повышение эффективности, и ускорение заживления дефектов кожи и слизистых различного генеза, а также снижение процента осложнений, следовательно заявленное изобретение «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» соответствует условию "промышленная применимость".

Сущность заявляемого изобретения «Средство для заживления ран «Целльгель» способ его получения и способ заживления ран различной этиологии полученным средством» поясняется примером конкретного выполнения.

Предложенное средство для заживления ран «Целльгель» содержит продукты жизнедеятельности клеток куриного эмбриона 5 дней гестации в концентрации 1,0×10⁶ клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в 1 мл основы в виде геля, в качестве которого использовали гель Cellosire HECQP-52/000-H3, который сам по себе смягчает и увлажняет кожу, способствует лучшему проникновению биологически активных веществ заявленного средства через кожный барьер и, поскольку является вязкой субстанцией основы «Целльгель», легко наносится на поверхность раны и обеспечивает равномерное распределение ранозаживляющего средства на ее поверхности, не требуя дополнительной фиксации.

Способ получения средства для заживления ран «Целльгель» осуществляли следующим образом.

Вначале приготавливали отдельные компоненты средства. Для приготовления гомогената развивающихся эмбрионов птицы брали свежие яйца птицы, например куриные, проверенные на сальманеллез, т.е. имеющие ветеринарный сертификат, и закладывали в инкубатор для получения пятидневных эмбрионов. После чего эмбрионы пяти дней гестации первоначально проверяли на стерильность, а затем помещали в криопробирки емкостью 2 мл (Coastar) с раствором для замораживания (90% Fetal Bovine Serum и 10% DMSO в качестве криопротектора). После этого материал замораживали в парах жидкого азота t°-40°C со скоростью 1°С в минуту и вслед за этим охлажденные криопробирки с материалом помещали в жидкий азот (t°-170°С) в сосуды Дюара (СДС - 35М ОАО «НПО ГЕЛИЙМАШ» г.Москва). Срок хранения материала в жидком азоте равен трем годам. Ограничивающее условие определено авторами опытным путем на основе анализа жизнеспособности 180 образцов ткани (р<0.05). Для приготовления суспензии фетальных клеток замороженный материал ex tempera размораживали в парах азота для сохранения высокой жизнеспособности клеток и переносили в стерильную стеклянную центрифужную пробирку. После этого отмывали для удаления среды для замораживания (с помощью центрифуги 10 минут при 1500 об/мин). Затем удаляли супернатант (надосадок), после чего омывали физраствором второй раз. В пробирку к осадку доливали 3 мл физраствора - стерильного раствора натрия хлорида 0,9%, тщательно, щадящим способом гомогенизировали стеклянным стерильным пестиком, «выдавливали» клетки из тканевой суспензии, при этом не разрушали их. Вслед за этим повторно удаляли супернатант с помощью центрифуги 10 минут при 1500 об/мин, добавляли к осадку 1 мл раствор натрия хлорида 0,9% и ресуспендировали. В полученной суспензии определяли фенотип клеток и проводили контроль жизнеспособности клеток, при этом считали цитоз. Отслеживали, чтобы жизнеспособность клеток с фенотипом CD34⁺ CD45^dim составляла не ниже 80%. Если этот показатель был ниже, то образец отбраковывали. Раствором натрия хлорида 0,9% (физраствором) доводили концентрацию клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в образце до концентрации 1,0×10⁶ клеток в 1 мл. Затем клетки, выделенные из куриных эмбрионов 5 дней гестации фенотипа CD34⁺ CD45^dim, высевали в концентрации 1,0×10⁶ в 1 мл в 0,9% раствор натрия хлорида. Суспензию клеток культивировали в культуральных флаконах в течение суток в CO₂ инкубаторе при t°=+37,0°С с содержанием CO₂ в атмосфере 5,0%. Затем среду, содержащую клетки и продукты их жизнедеятельности, переносили в стерильные стеклянные центрифужные пробирки, центрифугировали, отбирали 1 мл супернатанта, содержащего продукты жизнедеятельности клеток куриного эмбриона фенотипа CD34⁺ CD45^dim концентрации 1,0×10⁶ в 1 мл и вносили в один мл основы в виде геля, в качестве которого использовали гель Cellosire HECQP-52/000-H3, который сам по себе смягчает и увлажняет кожу, способствует лучшему проникновению биологически активных веществ через кожный барьер и, поскольку является вязкой субстанцией основы «Целльгель», легко наносится на поверхность раны и обеспечивает равномерное распределение ранозаживляющего средства на ее поверхности, не требуя дополнительной фиксации.

Способ заживления ран различной этиологии и локализации с использованием средства для заживления ран «Целльгель» осуществляется следующим образом.

На раневую поверхность, например рваной резаной раны на ладони руки, наносили «Целльгель» один раз в течение 3-х суток до полного заживления. Предварительной хирургической или медикаментозной подготовки раны не делали. За счет вязкой субстанции основы «Целльгель» легко наносили на поверхность раны и обеспечивали равномерное распределение ранозаживляющего средства на ее поверхности, не требуя дополнительной фиксации. Частота нанесения заявляемого средства для заживления ран «Целльгель» зависела от целого ряда обстоятельств, в том числе локализации раны, площади, глубины поражения, длительности существования патологического процесса, фиксацию геля повязкой или иными средствами не проводили, хотя, при необходимости, можно было сделать повязку и вести рану «закрытым» способом без снижения эффективности заживления. Через трое суток средство «Целльгель» нанесли повторно в последний раз, поскольку далее рана затянулась и последующего нанесения средства «Целльгель» на рану не потребовалось. Длительность лечения сугубо индивидуальна и зависит от «размера» раны (площади и глубины поражения тканей), локализации, наличия гнойного отделяемого или некротизированных тканей. Так, например, при термическом ожоге первой степени относительно небольшой площади может быть достаточным однократное нанесение заявляемого средства «Целльгель», как можно быстрее после ожога для снятия боли и инициирования процесса репарации. В случае более тяжелого поражения кожи при локализации процесса в местах, где нанесенное средство будет смыто или стерто, необходимо повторное нанесение каждый раз после смывания. При необходимости ведения раны закрытым способом, наложения «Целльгеля» под повязку рекомендуется 1 раз в течение 3-х суток. Основным критерием прекращения лечения является закрытие дефекта.

Экспериментальные исследования эффективности заявляемого средства проводились и на лабораторных животных (экспериментальная гнойная рана у кроликов). Эксперимент выполнен на 80 половозрелых кроликах-самцах в стандартных условиях. Под общим обезболиванием на спине животного по паравертебральной линии формировали инфицированные раны мягких тканей по отработанной методике (Заявка №2006122640, от 23.06.2006).

После формирования инфицированной раны мягких тканей через 3-5 суток начинали лечение. Животные были разделены на 4 группы (по 20 в каждой).

1 - группа - «Без лечения» - лечение не проводилось.

2 - группа - «Традиционное лечение» - после обработки краев раны раствором Люголя, рану промывали 3% раствором перекиси водорода, осушали. В фазу воспаления применяли повязки с водным раствором антисептика, мазями на водной основе, в фазу регенерации и эпителизации - мази на жировой основе.

3 - группа - «Целльгель» - на рану 1 раз в сутки наносили средство «Целльгель», фиксировали повязкой во избежание зализывания раны животным.

4 - группа - «Целльгель» - на рану 1 раз в течение трех суток наносили средство «Целльгель», шею животного фиксировали жесткой повязкой-воротником во избежание зализывания им раны.

Динамику раны оценивали с 1 по 30 сутки. Критериями оценки являлись размеры раневого дефекта, наличие отека, гиперемии, отделяемых выделений из раны и их характер. В эти же сроки под местной анестезией выполняли биопсию раны через все слои на глубину до 1.8-2.2 см. Материал фиксировали в 96% этиловом спирте, заливали в парафин и готовили гистологические срезы, которые окрашивали гематоксилином Майера и эозином с последующим анализом морфологической картины.

До начала лечения во всех группах раны неправильно округлой формы, размер составляет от 3.9 до 4.1 см в диаметре. Вокруг раны очаг инфильтрации до 3.5 см в диаметре. Стенки раны плотные, спаяны с окружающими тканями, дно покрыто плотным налетом фибрина, выделяется до 2-3 мл гнойного отделяемого белесоватого цвета тестоватой консистенции. Глубина язвенного дефекта до 2 см. При гистологическом исследовании определяются очаги некроза в соединительной и мышечной ткани, расширение кровеносных сосудов со стазом крови, экссудация лейкоцитов. Сосочковый слой дермы имеет четкое разграничение на слои: с выраженной клеточной инфильтрацией, представленной моноцитами, единичными макрофагами и рыхлой соединительной тканью с большим количеством фиброцитов, единичными фибробластами, единичными моноцитами, плазмоцитами.

В процессе наблюдения установлено, что в группах 1 - «Без лечения» и 2 - «Традиционное лечение» очищение раны от гнойно-некротических тканей происходило к 20-30 суткам, в то время как в группе 3 - «Целльгель» очищение раны от гнойно-некротических тканей происходило уже во 2 сутки лечения. 4 - «Целльгель» очищение раны от гнойно-некротических тканей происходило в течение первых суток.

Полное закрытие раневого дефекта в группе «Без лечения» наблюдалось к 35 суткам, в группе «Традиционное лечение» - к 20 суткам, в обеих группах закрытие раны сопровождалось формированием грубого соединительнотканного рубца, гистологически сохранялись дистрофически-дегенеративные изменения подкожной клетчатки и мышц, дегенеративные изменения нервных стволиков.

В группе 3 - «Целльгель» эпителизация раневого дефекта заканчивается к 10 суткам эксперимента с его оволосением, без образования рубца. Гистологически отмечается пролиферативная активность клеток фибробластического ряда, трубчатая пролиферация фибробластов и эндотелия сосудов. В подкожной клетчатке определяются неповрежденные нервные стволики, гистологическая картина эпителизации раны с сохранением всех функционирующих структур.

В группе 4 - «Целльгель» эпителизация раневого дефекта заканчивается к 5 суткам эксперимента с его оволосением, без образования рубца. Гистологически отмечается пролиферативная активность клеток фибробластического ряда, трубчатая пролиферация фибробластов и эндотелия сосудов. В подкожной клетчатке определяются неповрежденные нервные стволики, гистологическая картина эпителизации раны с сохранением всех функционирующих структур.

Эффективность предлагаемой группы изобретений, связанных единым изобретательским замыслом, подтверждается использованием их для заживления постлучевых язв на онкологических больных.

Пример 1. Пациент М., 69 лет, диагноз: постлучевая язва. Язва сформировалась за месяц до лечения терапией: актовегин в/м, обработка раны анилиновыми красителями, солкосерил на язву, физиотерапия (Дарсонваль) не привела к закрытию дефекта. Проведенное заживление с использованием средства для заживления ран «Целльгель» (гель наносили на поверхность язвы 1 раз в течение трех суток, лечение длилось в течение 15 дней) позволило полностью эпителизировать язву в течение 15 суток.

Пример 2. Пациент X., 63 года, диагноз: постлучевая язва. Пациент получал активное лечение в течение года. Актовегин внутримышечно 3 курса, антисептическая обработка раны, антибактериальные и эпитилизирующие препараты (солкосерил, куриозин, тетрациклиновая мазь), 3 курса физиотерапии. Однако язва не имела тенденции к заживанию, инфицировалась. Наконец назначили терапию с использованием средства для заживления ран «Целльгель», который наносили на язвы 1 раз в течение трех суток и фиксировали повязкой, лечение длилось в течение 14 дней, что позволило добиться очищения значительной части язвы от гнойно-некротических масс и полностью эпителизировать язву. В дальнейшем заживляли с использованием средства для заживления ран «Целльгель», один раз в сутки без фиксации повязкой, что привело к полному закрытию язвенного дефекта без образования рубца и деформации тканей к концу 7 недели от начала заживления.

Пример 3. Пациент Г., 41 год, диагноз: трофическая язва, образовавшаяся после вскрытия абсцесса. Для заживления использовали средства для заживления ран «Целльгель», начато через 1 месяц после безуспешного лечения язвы оперативными и консервативными методами (иссечение краев, повязки с антисептическим растворами, антибиотиками, «солкосерилом»). Динамика эпителизации трофической язвы на фоне заживления с использованием средства для заживления ран «Целльгель» 1 раз в сутки «под повязку» определилась к 17 м суткам с использованием средства для заживления ран «Целльгель».

Пример 4. Пациент П., 49 лет, диагноз: посттравматическая трофическая язва, постлучевая язва. Динамика посттравматичекой трофической язвы правой стопы на фоне терапии с использованием средства для заживления ран «Целльгель» 1 раз в сутки «под повязку» в течение 21 дня показала полное закрытие язвенного дефекта посттравматической трофической язвы.

Из приведенных примеров видно, что заявляемая группа изобретений позволяет получить новое средство для лечения ран различной этиологии и локализации, для заживления ран, дефектов кожи и слизистых различного генеза.

Основным преимуществом предлагаемого средства и способа лечения является высокая эффективность, простота использования, атравматичность и безболезненность для пациента, широкий спектр показаний, возможность использования без участия медицинского персонала, отсутствие осложнений и побочных реакций, длительность хранения без утраты лечебных свойств.

Основными преимуществами предлагаемого способа получения средства «Целльгель» являются техническая простота, низкий % разрушенных клеток, низкая степень дифференцировки при высокой жизнеспособности клеток в конечном продукте, который обеспечивает заживление ран различной этиологии и локализации средством для заживления ран «Целльгель»и способом лечения с использованием этого средства.

Таким образом, применение заявляемой группы изобретений «Средство для заживления ран «Целльгель», способ его получения и способ заживление ран различной этиологии полученным средством» позволило достичь ускорение заживления дефектов кожи и слизистых различного генеза: длительно незаживающих ран различной этиологии и локализации, в том числе трофических и постлучевых язв, эрозий, ран, образовавшихся в результате травм, оперативных вмешательств, ожогов, что обеспечивает значительное (в несколько раз) сокращение сроков заживления, эффективное закрытие дефекта ткани с восстановлением функции, без образования грубого рубца.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для заживления ран различной этиологии. Средство для заживления ран различной этиологии, содержащее суспензию клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim, полученную из гомогената куриных эмбрионов, в гелевой основе Cellosire HECQP-52/000-H3. Способ получения средства для заживления ран различной этиологии. Способ заживления ран различной этиологии, путем нанесения средства на поверхность раны. Вышеописанное средство позволяет ускорить заживление ран. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 пр.

1. Средство для заживления ран различной этиологии, содержащее гомогенат развивающихся эмбрионов птиц и гелиевую основу, отличающееся тем, что оно содержит 1 мл суспензии клеток фенотипа CD34⁺ CD45^dim в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶, полученной из гомогената 3-8-дневных куриных эмбрионов, в 1 мл гелевой основы Cellosire HECQP-52/000-H3.

2. Способ получения средства для заживления ран различной этиологии, содержащего гомогенат развивающихся эмбрионов птицы, предварительно проверенных на стерильность и гелиевую основу, отличающийся тем, что берут куриный эмбрион 3-8 дней гестации, помещают его в криоемкости с раствором для замораживания и замораживают в парах жидкого азота при t°=(-40)-(-45)°C со скоростью 1°-1,5°С/мин и помещают в емкость с жидким азотом для хранения полученных продуктов, далее его размораживают в парах азота, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию гомогенизируют, далее из тканевой суспензии выделяют клетки, не разрушая их, добавляют физраствор и центрифугируют содержимое в течение 8-12 с, осаждают строму и выводят в надосадок фетальные клетки, которые переносят в стерильную емкость, вновь центрифугируют в течение 6-7 мин при 1400-1600 об/мин, далее удаляют супернатант, добавляют к осадку физраствор и ресуспензируют, в полученной суспензии определяют фенотип CD34⁺ CD45^dim клеток и проводят контроль жизнеспособности клеток, доводят концентрацию клеток в суспензии от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶, после этого клетки куриных эмбрионов фенотипа CD34⁺ CD45^dim высевают в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ в 1 мл физраствора с последующей культивацией суспензии клеток в культуральных емкостях в CO₂ инкубаторе при t°=36,5-37,5°C с содержанием CO₂ в атмосфере 4,5-5,5% в течение суток, затем среду, содержащую клетки и продукты их жизнедеятельности, переносят в стерильные стеклянные центрифужные пробирки, центрифугируют и отбирают 1 мл супернатанта, содержащего клетки куриного эмбриона фенотипа CD34⁺ CD45^dim в концентрации от 0,75×10⁶ до 1,25×10⁶ в 1 мл и вносят в 1 мл основы в виде геля Cellosire HECQP-52/000-H3.

3. Способ по п.2, отличающийся тем, что эмбрионы гомогенизируют в миксере.

4. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве криоемкостей используют криопробирки емкостью 2 мл (Coastar).

5. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве раствора для замораживания используют 90% Fetal Bovine Serum и 10% DMSO (диметилсульфоксид) в качестве криопротектора.

6. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве емкостей с жидким азотом используют сосуды Дюара.

7. Способ по п.2, отличающийся тем, что охлажденные криопробирки с полученным продуктом хранят в емкости с жидким азотом при t°=(-165)-(-170)°С.

8. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве физраствора используют 0,8-1,0%-ный раствор натрия хлорида.

9. Способ по п.2, отличающийся тем, что размороженный и очищенный материал гомогенизируют с помощью стерильного стеклянного пестика.

10. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве культуральных емкостей используют культуральные флаконы.

11. Способ заживления ран различной этиологии путем нанесения средства на поверхность раны, отличающийся тем, что средство по п.1 накладывают тонким слоем один раз в сутки до полного заживления без применения или с применением перевязочных материалов на поверхность раны, при этом поверхность раны предварительно хирургически не обрабатывают и не дезинфицируют.