Способ получения полициклического эфирного антибиотика или его фармацевтически приемлемой катионной соли Советский патент 1989 года по МПК C07D493/10 A61K31/35 A61P31/04 C07D407/14 C07H17/04 

мулы

ОСИ,

соон

СН,

qHbJ

СНз

Изобретение касается получения гетероциклических веществ , в частности, полициклического антибиотика формулы @ или его фармацевтически приемлемой соли, проявляющих антикоккидиальную активность, что может быть использовано для лечения инфекционных заболеваний животных. Цель изобретения - создание нового, более активного и менее токсичного соединения указанного класса. Синтез ведут контролируемым гидролизом антибиотика ИК-58852 под действием 1,1 мол. эквивалента п-толуолсульфоновой кислоты на 1 мол. эквивалент антибиотика в среде растворяющей смеси, содержащей 95% ацетонитрила и 5% воды. Если необходимо, свободную кислоту переводят в нужную соль. Новый антибиотик ИК-61689 более активен, чем ИК-58852, при меньшей в 10 раз токсичности. 1 табл.

Изобретение относится к способу получения нового полициклического эфирного антибиотика ИК-61.689 Г(ЗК, 4S, 5S, 6R, 7S, 22S, 2S, 5S, 6R)- /22,27-дидеметокси-2,6,22-тридеметил- 5,11-ди -0-диметил-6-метокси-22-/-(тет-,. рагидро 5-метокси -6-метил-2Н-пиран-2ил)-окси-ломомицина А7, который проявляет сильную антикоккидиальную активность и может быть использован для лечения многих инфекционных болезней животных.

I Цель изобретения - получение нового антибиотика, обладающего ценными

см

315107184

биологически активными свойствами1,25 ч. Реакционную смесь выливают в

и меньшей токсичностью.сепарационкую воронку, нижний масляПример 1. К раствору 15,0 гный слой удаляют и смешивают с допол(0,0147 оля) чистогр антибиотика нительным количеством смеси ацетонИК-58.852 в смеси ацетонитрил/водаитрил/вода 95:5. Ацетонитрил-водные

() (400 мл) добавляют 3,07 гслои объединяют и обрабатывают насы(0,0161 моля) п-толуолсульфоновойщей йым водным бикарбонатом (400 мл),

кислоты. Реакцию контролируют с помо-Смесь затем концентрируют до плотного

щью тонкослойной хроматографии до TextOсиропа под вакуумом, растворяют в

пор, пока не будет достигнут оптималь-смеси диэтиловий эфир/этилацетат

ный выход целевого продукта (около3:1 (21) и промывают насыщенным вод3 ч). Реакционную смесь обрабатываютным бикарбонатом натрия. Органичеизбытком твердого или водного бикарбо- ский слой высушивают над сульфатом

ната натрия и выпаривают под вакуумом 15натрия и концентрируют до полного кодо сухого остатка. Образующееся твер-ричневого масла. Очистку обычно продое вещество растворяют в диэтиловомводят с помощью противоточной экстракэфире и промывают насыщенным воднымции. При экстракции используют смесь

раствором бикарбоната натрия, бикар-гексан/этилацетат 1:1 в качестве небонатные промывки экстрагируют диэти- 20полярной фазы и смесь метанол/вода

ловым эфиро и все эфирные слои объе-3:2 в качестве полярной водной фазы.

диняют и промывают последовательноВыпаривание органических экстрактов водой и насыщенным хлористым натрием. дает пластичное твердое вещество, коЭфирный раствор высушивают над без- торое растирают в порошок с изопропиводным сульфатом натрия и выпаривают 2$ловым эфиром, получая ИК-61.689 в

под вакуумом до сухого остатка. Обра-форме натриевой соли, 10 г, т.пл.169зующийся сьфой реакционный продукт170 С. Полученный продукт идентичен

содержит ИК-61.689 в качестве главно-соединению ИК-61.689, полученному

го компонента, но загрязнен исходнымспособом по примеру 1, как показьшаИК-58.852 и другими побочными продук-30ет сравнение данных тонкослойной хротами. Сырой продукт очищают хромато-матографии и ЯМР.

графией на силикагеле с последующей Пример 3. Дистиллированная

рекристаллизацией из изопропиловогодеионизированная вода (200 мл) добавэфира, получая 4,2 г (32%) 1Ж-61.689ляется в соляную кислоту до получения

в форме натриевой соли, т.пл.175- -35Р 2,5. Натриевая соль ИК-61 .689

176 С; ,3(c 0,5, МеОН) ;(0,3б г) растворяется в 100 мл дихлор

С-13 ЯМР (CDClj); М.Д.: 179,15;метана, и промывается нейтральной дис107,45; 103,18; 97,74; 96,96; 86,92;тиллированной водой и концентрирует84,60; 84,20; 82,27; 82,01; 80,88;ся путем сушки под вакуумом до дости80,20; 79,86; 74,80; 74,55; 73,07; дОжения 0,225 г (76,85%) свободной кис70,06; 67,71; 66,89; 39,11; 56,81;лоты в виде небелого твердого вещест45,40; 39,82; 38,93; 36,46; 33,81;ва (тр.133-143). Его инфракрасный

33,71; 33,54; 33,42; 33,13;спектр (КВг) показывает широкую полосу

32,44; 32,26; 30,56; 27,58; 26,90;слабой абсорбции карбоновой кислоты.

26,84; 26,11; 23,23; 18,40; 17,53; .Инфракрасный спектр натриевой соли

16,99; 12,13; 11,04; 10,42.ИК-61.689 показал резкий сильный пик

Пример 2. Неочищенный фер-в отношении карбоксилата при 1600 см. ментационный экстракт (метилизобутил- ИК-58.852:(ЗК, 4S, 5S, 6R, 7S, 22S/2S,

кетон) (11), содержащий антибиотик5S, 6R/) - 22,27-дидеметокси-2,6 22ИК-58.852; (примерно 25 г), концент-трйдеметил-5,11-ди-0-деметш1-6-меток- рируют под вакуумом до 680 г. Плотноеси-5,22-бис/тетрагидро-5-метокси-6темное маслд добавляют к смеси аце-метил-2Н-пиран-2-ил)окси/-лономицинА. тонитрил/вода 95:5 (5,61) и образую- Антибиотик ИК-б1.689 проявляет инщуюся молокообразную эмульсию обраба-гибирзтощее действие на рост большого

тывают п-толуолсульфоновой кислотойколичества грам-положительных микро(78,2 г) за один прием. По мере того, организмов. В табл,1 суммированы рекак идет реакция, эмульсия постепеннозультаты опытов in vitro. Для этих

разделяется на два четких слоя, кото-опытов каждый организм инокулировали

рые энергично перемешивают в течениев ряд тест-пробирок, содержащих пита-,

515

тельную среду и различные концентрации антибиотика ЙК-61.689 для определения минимальной концентрации соединения в мкг/мл, которая ингибирует рост организма на 24 ч (МИК).

Даннные по эффиктивности антибиотика ИК-61 .689 и его солей против кок- кидиальных инфекций у цыплят получены следующим образом. Группы из 3-5- дневных неинфицированных белых петушков леггорнов кормят рационом, содержащим антибиотик ИК-61.689 или его натриевую и/или калиевую соль, равномерно распределенные в корме. После выдерживания на этом рационе в течение 24 ч каждого цыпленка инокулиру- ют per.OS ооцистами испытуемых видов Eimeria. Другие группы из 3-5-дневных цыплят кормят таким же рационом, но без антибиотика ИК-61.689 или его солей. Их также инфицируют через 24 ч и. используют в качестве контрольной группы на инфекцию. Еще одну группу из 3-5-дневньгх цыплят кормят тем же рационом без антибиотика ИК-61.689 и не инфицируют коккидиа. Они используются в качестве обычного контроля. Результаты обработки оценивают через пять дней в случае E.acervulina и щесть дней для всех других видов.

Параметр, используемый для измерения антикоккидиальной активности, представляет собой величины поражения от О до 4 для E.tenella (j.E.Lyuch, NEW Method for the Primary Evaluation of Anticoccidial Activity); и от 0 до 3 для других видов по модификации системы подсчета, разработанной J.Jchuson U W.U.Reid (Anti- coccidial Drugs - Sesion Scoring Techuigues in Battery and Floor Pen Experiment in Chin).

Относительные величины получают делением величины поражения каждой испытуемой группы на величину поражения у контрольной инфекционной группы.

Антибиотик ИК-61.689 и его катион- ные соли обнаруживают высокую актив- ность против коккндиальных инфекций домашней птицы. При введении в корм цыплят в количествах 15 - 120 ч/млн эти соединения эффективны при контроле-инфекции, вызываемых Eimeria tenella, E.acervalina, Е.maxima, E.brunetti u E.uec atrix,

Рацион животных обычно непосредственно определяется при их кормлении.

Согласно методик-е , изучения процесса переваривания пищи у жвачных in vitr изменения, происходящие в пище под действием микроорганизмов, измеряются более быстро и с большей точностью для оценки рациона животных (Патент Великобритании № 1197826). Эта метог дика включает использование устройства, в котором пищеварительные процессы животных проводятся и изучаются in vitro. Корм животных, инокулум . рубца и различные промоторы роста вводятся, и вьшодятся из лабораторного устройства в тщательно контролируемых условиях и происходящие изменения непрерывно фиксируются в ходе потребления пищи микроорганизмами. Возрастание содержания пропионовой кислоты в жидкости рубца свидетельствует, что нужный результат в процессе пережевывания пищи вызван промотором роста, включенным в состав корма. Изменения в содержании пропионовой кислоты выражаются в процентах от содержания пропионовой кислоты в контрольной жидкости рубца. Проводились длительные исследования процесса кормления in vivo, которые показали значимую корреляцию между возрастанием содержания пролионовой кислоты в жидкости рубца и улучшением показателей животных.

Жидкость рубца отбирают из фистулы коровы, которую кормят коммерческим рационом для откармливания и сеном. }Кидкость рубца немедленно фильтруют и 10 мл добавля лт в 50-миллиметрову1о коническую колбу, содержащую 400 мг стандартного субстрата (68 % зернового крахмала + 17% целлюлозы + 15% экстракта из соевых бобов), 10 мл буфера рН 6,8 и испытуемое соединение Колбы наполняют азотом, не содержащим кислорода, в течение примерно 2 мин. и инкубируют во встряхиваемой водяной бане при 39 С в течение примерно 16 ч. Все опыты повторяют три раза.

После инкубирования 5 мл образца смешивают с 1 мл 25%. метафосфорной кислоты. Через 10 мин добавляют 0,25 мл муравьиной кислоты и смесь центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Образцы затем анализи-; руют с помощью газожидкостной хрома-- тографии по методике D.W.Kellog.

Высоту пиков для уксусной, пропио-j новой и масляной кислот определяют

для образцов из необработанной и обработанной инкубационных колб.

При исследовании по данной методике in vitro антибиотик ИК-61,689 при содержании 20 микрограмм на миллиметр дает увеличение на примерно 80% производства пропионовой кислоты по сравнению с полученньм в контрольном растворе без добавки антибиотика ИК-61.689. Соединения, которые стимулируют производство ПКР (пропионовой кислоты рубца), улучшают утилизацию пищи у таких жвачных, как крупный рогатый скот и овцы, а также оказывают аналогичное действие на моногастрических животных, таких как свиньи. Антибиотик ИК-61.689 может быть введен в животное путем включев корм как в форме свободной кис- 20 количество агента в готовом корме мония

лоты, так и в форме соли, например натриевой или калиевой соли, или их смеси. Альтернативно неочрпденный или высушенный ферментационный бульон, содержащий антибиотик ИК-61.689, мо- 25 жет быть введен в корм в нужной кон-; центрации. Антибиотик ИК-61.689 может также применяться в нужной дозе при использовании соответствующего устройства длительной вьщачи препа- .30 рата, предназначенного для отмеривания постоянных доз лекарств.

При использовании для лечения кок- кидиоза домашней птицы предлагаемый антибиотик применяют орально в под-. 35 ходящем носителе. Наиболее удобно просто вводить препарат в питьевую воду или в корм птицы, так что терапевтическая доза агента проглатывается с ежедневной дозой воды или 40 корма. Агент можно непосредственно отмерять в питьевую воду, предпочтительно в форме жидкого водорастворимого концентрата (такого, как водный раствор водорастворимой соли), или прямо добавлять в корм в чистом виде или в форме премикса или концентрата, Премикс или концентрат терапевтического агента на носителе обычно используют для введения агента в, корм. Подходящими носителями могут быть - жидкие или твердые, как требуется, такие как вода, различные пищевые прожет корректироваться путем смешивания соответствующей пропорции премикса с кормом для получения нужной концентрации терапевтического агента.

Высокоэффективные концентраты могут быть получены производителем кормов на белковых носителях, таких, как соевое масло и другие пищевые продукты для изготовления концентрирован- ных добавок, которые пригодны для непосредственного кормления птицы. В таких случаях птица получает обычный рацион. Альтернативно такие концентрированные добавки можно вносить прямо в корм птицы ДЛЯ получения сбалансированного готового питания,, содержащего терапевтически эффективное количество соединения.

Смеси получают по стандартным методикам, например, в двухкорпусном смеслтеле, чтобы достичь гомогенности.

Применяемые дозы предлагаемрго антибиотика могут изменяться в зависимости от различных обстоятельств. 45 Постоянное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыплят, является эффективной профилактической мерой. При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Применяемая в корме поза обычно находится в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы должны быть такими , чтобы обеспечить

50

Применяемые дозы предлагаемрго антибиотика могут изменяться в зависимости от различных обстоятельств. 45 Постоянное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыплят, является эффективной профилактической мерой При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Применяемая в корме поза обычно находится в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы должны быть такими , чтобы обеспечить

дукты, например соевое масло, льняное масло, кукулзузные.початки и мине-55ту же ежедневную дозу приема, т.е. ральные смеси, ка кие обычно исполь- 15-120 ч./млн, с учетом коэффициента, ЗУЮТ.СЯ в кормах для птицы. В особен-равного отношению среднего ежеднев- ности эффективным носителем является,ного потребления пищи к среднему еже- сам корм птицы, т.е. ма.пая порциядневному потреблению воды.

этого корма. Носитель облегчает равномерное распределение активног о материала в корме, с которым смешивается премикс. Это обстоятельство является важным, так как требуется только небольшая концентрация данного сильнодействующего агента. Существенно, чтобы соединение бьто полностью

смешано в премиксе и затем с кормом. Агент может быть диспергирован или растворен в подходящем масляном носителе, таком как соевое масло, кукурузное масло, хлопковое масло и т.п.,

или в летучем органическом растворителе и затем смешан с носителем. Предпочтительно, чтобы пропорция активного материала в концентрате могла изме- няться в широком интервале, так как

жет корректироваться путем смешивания соответствующей пропорции премикса с кормом для получения нужной концентрации терапевтического агента.

Высокоэффективные концентраты могут быть получены производителем кормов на белковых носителях, таких, как соевое масло и другие пищевые продукты для изготовления концентрирован- ных добавок, которые пригодны для непосредственного кормления птицы. В таких случаях птица получает обычный рацион. Альтернативно такие концентрированные добавки можно вносить прямо в корм птицы ДЛЯ получения сбалансированного готового питания,, содержащего терапевтически эффективное количество соединения.

Смеси получают по стандартным методикам, например, в двухкорпусном смеслтеле, чтобы достичь гомогенности

Применяемые дозы предлагаемрго антибиотика могут изменяться в зависимости от различных обстоятельств. Постоянное применение в низкой дозе в течение периода роста, т.е. в пер-. вые 6-12 недель }кизни цыплят, является эффективной профилактической мерой. При лечении установленной инфекции могут быть необходимы более ззысокие дозы. Применяемая в корме поза обычно находится в интервале 15-120 ч./млн. При применении в питьевой воде позы олжны быть такими , чтобы обеспечить

ту же ежедневную дозу приема, т.е. 15-120 ч./млн, с учетом коэффициента, равного отношению среднего ежеднев- ,ного потребления пищи к среднему еже- дневному потреблению воды.

9 пгн Q

СНо. д.

соон

или его фармацевтически приемлемой катионной- соли, отличаю s o OCHj

ОСНз

соон CHj

подвергают контролируемому кислотно-,с содержащей 95 мас.% ацетонитрила и му гидролизу действием 1,1 мол.экви- 5 мас.% воды, и, если необходимо, валента п-толуолсульфоновой кислоты переводят свободную кислоту в ее фар- на 1 мол.эквивалент соединения фор- мацевтически приемлемую катионную .мулы II в среде растворяющей смеси, соль.

..ОСНз

о снз:С з

r xj /,,CHl

)Н СН, СНз

3

щ и и с я тем, что соединение формулы II

..ОСНз

H-iC

ii- CH-i

О

I j и г г LT - л,,

сн,н сн, н н н он

3

.Таблица 2