Изобретение может быть исрользовано в животноводстве и птицеводстве при выращивании на мясо продуктивного скота и птицы. Известны способы усиления роста животных и птиц путем использования различных препаратов антибиотиков, например антибиотика Х-5108 и его физиологически активной соли { или производных спирамицина (2. Препара ты антибиотиков вводят в корм в смеси с жидкими или твердыми кормовыми носителями, равномерно распределяя их в массе корма или пойле. Однако препараты антибиотиков еще сравнительно дороги, а в некоторых случаях не всегда эффективны,, что вы зывает необходимость дальнейшего поиска эффективных средств усиления роста и продуктивности продуктивного скота и птицы. Цель изобретения состоит в повыше нии эффективности способа усиления роста домашних животных и птиц. Это достигается тем, что в качест ве препарата антибиотика используют смесь митрамкцинов, продуцируе1 ую Streptomyces pilosus N CIB 11238,илн загний хелат митрамицина А формулы. (Сд2 Н,024)2 Mg-2H2D ИЛИ хромомицин в количестве 0,00025-0,005% от веса жидкого или твердого кормового носителя. Указанные препараты антибиотиков известны и применяются в медицинской практике и представляют собой соединения из группы золотой кислоты 3, 4. Соединсг ия из группы золотой кислоты орально вводят животным в,качестве дополнения к их питанию, т.е. в смеси с твердой пищей, растворенными в питьевой воде или для молодых животных, например поросят или телят, растворенными в цельном или снятом молоке. Целесообразно вводить соединение в омеси с обычной питательно сбалансированной твердой пищей, такой дополнительный продукт питания, должен содержать от 0,0001 вес.% (1 г на 1 т) до 0,005 вес.% (50 г на 1 т) соединения. Животные могут .питаться такой.дополнительной пищей в течение всего периода их роста или в течение лишь части их периода роста, например на ранней стадии, и/или в течение периода, предшествующего убою. Достигаемоев практике увеличение скорости роста позволяет животным достигать рыночного веса или убойного веса за более короткий период времени.
При оптимальных уровнях ускорения роста не наблюдалось никакого токсичного воздействия на животных.
Предпочтительными соединениями группы золотой кислоты для использования в предлагаемом способе являются натриевые и магниевые соли,хелаты или комплексы митрамицина А и смесь митрамицинов.
Состав для использования в предлагаемом способе содержит соединение группы золотой кислоты вместе с жидким или твердым съедобным нетоксичным разбавителем или носителем. Приемлемым жидким разбавителем или носителем является, например, питьевая вода, цельное молоко или снятое молоко.
Пригодным твердым нетоксичным разбавителем или носителем может быть, например, питательно сбалансированное питание для животных (обычная стандартная пища бройлерных цьшлят из размолотого зерна и зерновых побочных продуктов) и животный протеин дополненный витаминами и минералами, стандартный корм для откорма свиней или другие обычные продукты кормления. Инертным твердым разбавителем или носителем может быть вещество без питательной ценности, например каолин, тальк, карбонат кальция, наполнительная земля, аттапульгитовая глина, размолотые оболочки устриц или молотая известь; кроме того это может быть крахмал и лактоза..
Предлагаемый состав может иметь вид дополнительного продукта питания пригодного для непосредственного питания животных, и в этом случае он в предпочтительном варианте будет содержать 0,0001-0,005% вес.% соединения из группы золотой кислоты в смеси с обычным питательно сбалансированным продуктом питания животных. Он может применяться также в виде концентрированной примеси для разбавления с обычной пищей животных с получением дополнительного продукта питания, пригодного для непосредственного питания животных. В этом случае такая примесь в предпочтительном варианте будет содержать 0,005-50 вес. соединения из группы золотой кислоты в смеси либо с питательно сбалансированной пищей животных, инертным твердым разбавителем, например молотой известью, либо с крахмалом или лактозой. Такая примесь может разбавляться обычным способом, предпочтительно последовательно в две или более ступеней для обеспечения равномерного перемешивания.
Предусматривается способ получения смеси митрамицинов, включающий выращивание митраьмицин-производящегс штамма Streptomyces pilosus в водной
питательной среде, содержащей источники ассимилируемого углерода и азота с перемешиванием, в аэробных услоиях при температуре 15-45®С, фильтование культуры и изоляцию кислой ракции из фильтрата обычными спосоами .
Пригодным митрамицин-производящим штаммом S. pilosus является штамм, хранящийся в Национальной коллекции промышленных бактерий Министерства сельского- хозяйства, рыбоводства и продуктов питания. По данным исследовательской станции Торри, 135 Эббей Роад, Абердин АВ9 8ДС, Шотландия,подобозначением N CIB 11238, этот штамм S. pilosus имеет следующее описание:
А. Морфология (Дрожжевой солодовый агар, , 8 дней).
Воздушный мицеллий проявляет простое разветвление. Споровые цепи длинные (более 10 спор) в спиралях (spira). Поверхность спор (в электронном микроскопе) ворсистая. В. Вид поросли после 12 дней при25-С на следующих питательных среда с:
Дрожжевой солодовый агар.
Типичная стрептомицетная колония . Воздушный мицеллий вначале белый, становящийся по мере протекания спорилирования серым (серые ряды), Образование спор обильное. Основание мицеллия коричневое. Диффундирующий пигмент отсутствует.
Агар солей крахмала.
Воздушный мицеллий палево-серый, спорилирование слабое. Основание мицеллия цвета буйволовой кожи. Диффундирующий пигмент отсутствует,
Глюкозо-аспарагиновый агар.
Воздушный мицеллий, серый, спорилирование обильное. Основание мицеллия серое. Диффундирующий пигмент отсутствует .
Глицерол-аспарагиновый агар.
Воздушный мицеллий серый, спорилирование обильное. Основание мицеллия цвета буйволовой кожи. Диффундирующий пигмент отсутствует.
Агар из овсянки.
Воздушный мицеллий отсутствует. Основание мицеллия белое. Диффундирующий пигмент отсутствует.
Сахарозо-нитратный агар.
Воздушный мицеллий палево-серый. Спорилирование xopoaiee . Основание мицеллия цвета серой буйволовой кожи. Диффундирукхций пигмент отсутствует.
Тирозиновый агар.
Воздушный мицеллий палево-серый. Спорилирование хорсшее. Основание мицеллия серое. Диффундирующий пигмент отсутствует.
Питательный агар.
Воздушный мицеллий белый. Небольшое спорилирование. Основание мицеллия цвета буйволовой кожи, становящееся почти черным. Диффундирующий пигмент отсутствует. Железо-пептоновый агар. Воздушный мицеллий серо-белый. Спорилирование плохое. Основание мицеллкя коричневое, становящееся черным. Слегка диффундирующий коричневый пигмент (Меланин +, но слабый). Агар из меланоидного пигмента. Воздушный мицеллий отсутствует. Основание мицеллия темно-коричневое Слабый диффундирующий коричневый пиг мент (Меланин +, но слабый). С. Физиологические свойства. Использование в качестве единственного источника углерода (в агаре Придхам/Готтлиба): глюкозы+ ксилозы + арабинозы + + фруктозы + галактозы +. раффинозы маннита + инозита + салицина ± (очень слабый) сг1харозы -t (слабая) Гидролиз: желатина + крахмала + казеина (молочный агар) + Действие в лакмусовом молоке. Пептонизация и образование кислоты. Отверждения не происходит. Температура роста. Прорастание на дрожжевом солодово агаре после 14 дней при температуре (°С) : 2 5 10 15 20 25 30 27 45 5 1 -ь-1- -v-v-t-- - Приемлемым источником асси1Лйлируе мого углерода служит, например, мнегоатомный спирт, например глицерол, глюкоза, ксилоза, арабиноза, рамноза фруктоза, галактоза, маннит или инозит, а предпочтительным источником углерода является глицерол. Глицерол обычно вводят в среду в количестве 2-5% (вес./об.). Приемлемым источником ассимилируемого азота является, например, пептон, который обычно вво дят в количестве 0,5-2% (вес./об.). Питательная среда дополнительно содержит небольшие количества других элементов, например фосфор, в виде, например, первичного кислого ортофос фата калия или кислого диаммонийфосфата; магний в виде, например, сульфата магния или карбоната магния; се ру в виде, например, серной соли сер ной кислоты; калий в виде хлоргада кёшия, карбоната калия или первичного кислого ортофосфата калия; и еледы солей таких элементов, как медь, цинк, железо, марганец и молибден. Пригодная для ферментирования тем пература 32°С, а окисленный продукт может экстрагироваться из фильтрата культуры обычными способами, наприер, путем эксяграгирования из фильтрата несмешивающимся с водой органическим растворителем при нейтральном или щелочном значении рН для удаления нежелательных нейтральных и щелочных продуктов, окисления водной фазы и экстракции целевого окисленного продукта несмешивакндимся- сводой органическим растворителем. Используют улучшенный способ очистки окисленного продукта, включающий превращение его в хелат магнйя или его соль путем контактирования раствора окисленного в иесметиивающемся с водой органическом растворителе с силикатом магния. Пример I.S. pilosus NCIB 11238 выращивают как наклонную культуру на четырех уклонах в среде триптондрожжевого агара, в медицине- ких плоскостях, при в течение 7 дней. Мицеллий и споры из уклона смывают стерильной водо{: (100 мл) в двухлитровые склянки, содержащие 1 л среды следуклцего состава, % (вес ./об.) : Глицерол5 Пептон-Дифко0,5 Карбонат Ксшьцкя0,1 Первичный кислый ортофосфат калия0,024 Сульфат магния.7HjO 0,02 Концентрат микроэлементов0,1 Деионизированная вода до 100 Состав концентрата I микроэлементов, % (вес./об.) S Сульфат железа-7Н О0,1 Сульфат меди 5H.jp0,015 Сульфат цинка ,1 Сульфат марганца 4Н2О 0,01 Молибдат калия0,01 Деионизированная вода до 100. Соли добавляют к части деионизированной воды, а смесь окисляют достаточным объемом концентрированной соляной кислоты с деионизированной водой. Загем раствор стерилизуют в автоклаве при давлении 1,05 атм в течение 0,5 ч. Приготовленные таким образом четыре двухлитровые склянки встряхивают при в течение 2 дней на круговом встряхивателе.: Затем содержимое четырех склянок объединяют для прививки ферментера, содержащего 80 л среды следующего состава, % (вес,/об.) : Глицерол5,0 Карбонат кальция0,1 .Первичный кислый ортофосфат калия0,024 Сульфат магния ,02 Концентрат микроэлементов (как описано выше) 0,1 Пептон-Дифко0,5 Деионизированная вода до 100 Затем раствор стерилизуют в автоклаве при давлении 0,05 атм в течение 0,5 ч. Содержание ферментера перемешивают при 32°С в течение. 45 ч, используя мешалку с шестью плоскими лопастями, вращающимися со скоростью 260 об/мин, и аэрируют со скоростью 40 л в 1 мин. Для подавления вспенивания добавляют полипропиленгликоль. Ферментационный бульон профильтровывают и фильтрат (,3) экстрагируют этилацетатом (25 л), который затем сбра сывают. Знамение рН водной фазы доводят до 3,5 с помощью 5 н. соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом (2 X 25 л). Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают сульфатом нат рия и отфильтровывают, а фильтрат концентрируют при пониженном давлении до объема 1 л. Целевой продукт из вы шеупомянутого концентрата может быть получен по следующим методикам. Этилацетатный концентрат промывают разбавленным раствором бикарбоната натрия (500 мл воды, достаточно насыщенный раствор бикарбоната натри с получением рН между 9 и 10). Водную фазу отделяют и промывают хлороформом (1 л), который сбрасьшают. Затем рН водной фазы доводят до 3,5 с помощью добавки разбавленной соляной кислоты промьшают ДИЭТИЛОВ1ЛМ эфиром (2 х 1 л который сбрасывают и экстрагируют эти лацетатом (2 х 1 л). Этилацетатные экстракты объединяют, высушивают сульфатом натрия и отфильтровывают; Фильтрат выпаривают досуха, а остаток растирают в порошок с диэтиловым эфиром с получением сырой смеси митрамицинов в виде желто-коричневого твердо го вещества. Этилацетатный концентрат выпаривают досуха до сырой смолы. Смолу (Иг растворяют в метаноле и раствор адсорбируют на кизельгуре (около 2 г) . Растворитель выпаривают и сухой материал помещают на верх колонны с кизельгуром (40 X 6,5 см), заполненной хлороформом. Колонну элюируют хлороформом и собирают 15 мл фракции. Эти фракции анализируют тонкослойной хроматографией на силикагелевой пластиI не Mezck 254, элюируемой объемной смесью хлороформ (метанол) 98%-ная мурешьиная кислота 84:8:8 по объему на присутствие целевых митрамициновых продуктов и фракции 50-250, содержащие этот продукт, объединяют и выпаривают досуха с получением сырой смеси митрамицинов в виде желто-коричневого твердого вещества (1,9 г). Пример 2. Сырую смесь митра мицинов (3,4 г ) примера 1 в водном растворе метанола помещают на верх предварительно пропитанной поперечносвязанным декстраном Sephadex G-25 колонки (28 X 5 см) и колонку элюируют водой.итрамицин пропускают книзу колонки в виде зеленовато-желтого, быстро движущегося слоя и собирают соответствующую фракцию элюанта. А). Элюант высушен при температуре ниже 0®С с получением смешанных митрамицинов в виде желтого диофильного твердого вещества (2,5 г). В). Элюант доводят до рН 3,5 с помощью разбавленной соляной кислоты и экстрагируют этилацетато, а экстракт высушивает и выпаривают досуха с получением смешанных митрамицинов в виде желтого порOUJKа (2,3 г), т. пл. 169-172°С. Полученные таким образом смешанные митрамицины конвертируют до основного компонента хелата магния следующим образом : Флорисил торговое название силиката магния. Флорисил. (6 г) добавляют к раствору смешанных митрамицинов (400 мг) в этилацетате, а этилацетат затем выпаривгиот. рисил с адсорбированньоми смешанными митрамицинами помещают на верх колонки (400 см X 2 см), заполненной флорисилом, и колонку последовательно элюируют этилацетатом, 5% (об/об) метанолом в этилацетате, 10% (об/об) метанолом в этилацетате, 15% (об/об) метанолом в этилацетате. Фракции III и IV объединяют, растворители выпариваиот, а остаток кристаллизуют из метлиола/этилацетата с получением хелата-магния в виде желтых кристаллов, т.пл. 210-217С (разложение), Л + 85° (с 0,5 в метаноле). Найдено,%: С 56,0; Н 7,2. Вычислено для (Сд2Н.,5О2и ) Мд X 2Н20, С 56,0%; Н 7,0%. Пример 3. Раствор из сырой смеси митрамицинов (из примера 1) 250 мг растворяют в минимсшьном количестве метанола и помещают на верх колонки из силикагеля (25 х 2 см) с получением в качестве кубовой фазы раствора из смеси ргшных объемов хлороформа, метанола и гидрата окиси аммония. Эту же кубовую фазу исполь- зуют для элюирования колбнки и собирают основную желтую фрешцию. Растворитель выпаривают с полу хением желтого порошка, который, растворяют в воде (10 мл), рН раствора доводят до 3,5 с использованием разбешленной соляной кислоты и экстрагируют этилацетатом (2x15 мл). Этилацетатные экстракты выпаривают досуха с получением смешанных митрамицинов в виде желтого порошка (100 мг) , т.пл. 169-172 С. Пример 4. Группы из 20 выбранных цыплят в возрасте 1 дня помещают в небольшие загоны с настилом, заполненные деревянной стружкой и оборудованные автоматическими роликами. В 16 таких загонах птиц в течение 6 дней кормят питательно сбсшанснрованным контрольным кормом, а птиц в других загонах (четыре загона на разрабатываемую пищу) кормят в течение того же периода времени этим же основным кормом, к которому добсшляют указанный вес смешанных митрс1мицннов полученных по примеру 2 или 3, или известный ускоритель роста цыплят, пенициллин или нитровин, в качестве положительного контроля. В конце испытательного периода определяют сред ний вес кеикдой птицы в контрольной группе и в каждой исследуемой группе и вычисляют процентное увеличение веса для кг1ждой исследуемой группы по сравнению с контрольной группой. Получают результаты, приведенные в табл. 1. Пример 5. При дополнительном испытании повторяют методику, указанную в примере 4. В этом случае вес выражен как средний общий вес загона из 20 птиц. В табл. 2 приведены результаты ис пытаний. Пример 6. При дальнейшем исследовании роста повторяют методику примера 5, но в этом случае все корма были гранулированными. Результаты исследования приведены в табл. Пример 7. Методику примера повтрряют, используя митрамицины, по лученные культивированием S.argilla- ceus А.Т.С.С. 12956 известным способом. Результаты исследования приведе ны в табл. 4. Пример 8. Методику примера повторяют, используя указанный в ко це примера 2 хелат магния. Результа ты даны в табл. 5. Пример 9. Описываемую в при мере 4 методику повторяют с ванием магний хелата митрамицина А, полученного известным способом при ферментации S. argillaceus А.Т.С.С. 12956. Получают результаты приведенные в табл. 6. Пример 10. Описываемую в примере 4 методику повторяют, испол зуя 4 загона с 30 петушками в каждо для каждого рецепта корма и продлив продолжительность опыта до 4 недель Получают результаты, приведенные в табл. 7. Пример 11. Семьдесят два поросенка весом примерно 20 кг разбивают на 8 соответствуюихих исследуемых групп по 9 поросят по полу и живому весу. Калщую исследуемую группу сажают на одну конкретную дие ту и каждое животное в каждой группе кормят индивидуально соответствующей пищей, точно взвешенной в соответст вии с нормой. Ежедневный прирост живого веса в граммах (DLWG) и относи тельное использование корма (FCR)- отношение (в кг) потребленного корма на 1 кг прироста живого веса определяют для каждой группы в конце девятинедельного испытательного периода. Получают результаты,приведенные в табл. 8. Пример 12, Описываемую в примере 4 методику повторяют, используя хромомицин AJ, полученный от Так еда Индастриес Лимитед, Осака, Япония, взамен смешанных митрамицинов. Получсшзт результаты, приведенные в табл. 9. Пример 13. Кристаллический магний хелат из примера 2 (4,2 г) растворяют в воде (100 i-m) и pli доводят до 3,0, добавляя 0,1 н. соляную кислоту. Затем окисленный раствор экстрагируют этилацетатом (2.х 100 мл) экстракт высушивают (Naj,SOj,) и растворитель выпаривают с получением желтой смолы. После растирания выпороток с эфиром смола дает желтый порсшок {2,5 г), который кристаллизуют из этилацетата и высушивают при под высоким вакуумом для получения материала с т.пл. 173-6°С, который по ИК и ЯМР спектроскопии и жидкостной хроматографии под высоким давлением (HLPC) был идентичен с митремицином А. Пример 14. 1 л;ферментационного бульона, полученного в примере 1, встряхивают с 20%-ным раствором хлорида натрия, рН доводят до 3,5 и смесь экстрагируют метилэтилкетоном (2 X 300 мл). Экстракты объединяют и высушивcUOT, концентрируют до 10 мл и обратно экстрагируют насьвценным водным раствором бикарбоната натрия (2 мл). Затем водную фазу обрабатывают метанолом (5 мл) с получением мелкого осадка натриевой соли митрамицина {30 мг). Пригодные для разбавления с пищей для животньк примеси могут быть получены путем введения 1, 5, 10, 25 или 50 г смешанных митрс1мицинов в стандартный корм бройлерных цыплят, содержащий молотый маис и рыбную муку с добсшками лизина, метионина, витаминов и минералов с доведением конечного веса до 500 f. Аналогичным образом можно получить и другие смеси, заменив смешанные ьштрамицины любым другим соединением из группы золотой кислоты. Пригодная для непосредственного кормления домашней птицы пища может быть получена путем тщательного перемешивания 500 г предварительно приготовленной смеси, как описано в примере 5, с 4,5 кг стандартного корма бройлерных цыплят и затем равномерного перемешивания полученной таким образом смеси с 995кг стандартного корма бройлерных цыплят для получения продукта для кормления птицы, содержащего 1,5, 10 25 или 50 г соединения группы з,олотой кислоты на 1 т в зависимости от концентрации соединения в предварительно приготовленной смеси.
и
73027412
Таблица 1
при уровне ,001.
Основной КОЕ - контроль
Основной корм+смешанные митрамицины 25 ррм
Ос нов и ой к орм+смеша н ные митрамицины 10 ррм
Основной корм+смешанные митрамицины 5 ррм
Основной корм-fсмешанные митрамицины 2,5 ррм
Таблица
Таблица 3
37,2 35,3 18,9 10,4
корм - контроль41,30корм+пенициллин 25 ррм47,9516,1
корм+нитровин 10 ррм45,6710,6
корм магний хелат 10 ррм49,6520,2
корм магний хелат 5 ррм47,9716,2
Р 0,001 0,01.
Основной корл-смешанкые митрамицины 10 ррм
Основной корм-смешанные митрацины 5 ррм
- существенн лй при уровне р 0,01 - существенный при уровне р 0,001
Таблица
V
.Таблица
.Х
1,782
360
XX
1,789
360
KOFW с низким содержанием меди Основной корм - контроль Основной корм+китровин 10 ррм Основной корм+карбадокс 20 ррм
Основной корм+смешанные митр 1мицины 25 ррм
Kopw с высоким содержанием мед Основной корм - контроль Основной корм+нитровин 10 ррм Основной корм+карбадокс 20 ррм
Основной корм+смешанные митрамицйны 25 ррм
- при уровне р 0,05 - при уровне р 0,01
Таблица 8
2,56
2,381
2,292
2,201
2,349
2,308 2,184
2,245
Таблица
