Питательная среда для выращивания спорообразующих аэробных бактерий BacILLUS SUвтILIS и BacILLUS LIснеNIFоRмIS Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 C12N1/20 C12R1/10 C12R1/125 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использова но при производстве ферментных, антибиотических и бактерийных препаратов.

Цель изобретения - повышение выхода биомассы.

Среду готовят следующим образом.

Питательную среду, предназначенную для выращивания В. subtilis и В. licheniformis, обогащают новым набором аминокислот, полученным при триптическом падролизе мяса (600 мг % аминного азота) и микроэлементами Ып - и Си при следующем соотношении компонентов, г/л:

Пивное сусло 500,0-600,0

Гидролизат мяса 100,0-120,0

Мп

140,05-0,01

0,005-0,003

25,0-30,0

Си

Агар-агар

Дистиллированная

водаОстальное

После тщательного перемешивания среду стерилизуют текучим паром с избыточным давлением 0,5 атмосферы в течение 30 мин.

В качестве источников микроэлементов Мп используют марганцевокалиевую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты, а в качестве источника микроэлемента меди - меднокалиевую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты.

После приготовления питательную среду разливают в 50 бaктepиoлoгиr ческих.матрацев по 0,25 л и стерилиСЛ ts9

QD 4

зуют текучим паром с избыточным давлением 0,5 атмосферы в течение 40 мин.

Засев питательных сред в матрацах роизводят одной и той же маточной культурой В. subtilis и отдельно . licheniforniis, содержащей в 1 мл 1 млрд. микробных тел по оптическоу стандарту. В каждый матрац вносят 10 мл одной из указанных микробных Q звесей, которую равномерно распрееляют по всей поверхности питательной среды. Матрацы помещают в термотат с температурой 28 С. Выросшую икробную пленку на 2-5 - 12-й день 15 роста собирают с каждого матраца отельно с помощью 0,85%-ного раствора хлорида натрия. Полученную взвесь икроорганизмов с хлопьями пленки гомогенизируют. В гомогенной микроб- 20 ной взвеси определяют количество микробных тел с помощью оптического стандарта и делают пересчет количества Ш1кроорганизмов, выросших на 1 мл питательной среды. В дальнейшем 25 вычисляют средние данные по каждой группе исследований.

Пример 1. Используют среду следующего состава, г/л: пивное сусло 500; гидролизат мяса 100; меднока- ,,. лиевая соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,28.; марганцевокалиевая соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,304; дистиллированная вода остальное.

Количество микроорганизмов, выросших на 1 мл среды составляет: на 2-й день Б. subtilis - 0,28 млрд.кл., В. licheniformis - 0,24 млрд. кл.; на 5-й дейь - 0,52 и 0,42 млрд.кл. соответственно; на 12-й день - 0,83 и 0,7 млрд. кл. соответственно.

Пример 2. Для выращивания микроорганизмов используют питательную среду следующего состава, г/л: пивное сусло 550; гидролизат мяса . 110; меднокалиевая соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,023; марганцевокалиевая соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,18; агар-агар 27,5; дистиллированная вода остальное. Получено биомассы с 1 мл среды: на 2-й день В.subtilis - 0,28 - 0,3 млрд.кл., В. licheniformis - 0,24-0,26 млрд. кл.j На 5-й день 0,52-0,58 и 0,42 - 0,5 млрд. кл. соответственно; на 12-й день - 0,83-0,88 и 0,7 - 0,72 млрд. кл. соответственно.

Пример 3. Используют для выращивания микроорганизмов питатель40

50

55

ную среду следующего состава, г/л: пивное сусло 600 гидролизат мяса 120j меднокалиевая соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,017, марганцевокалиевая соль оксиэтиленфосфоновой кислоты 0,64; агар-агар 30; дистиллированная вода остальное.

Количество микроорганизмов, выросших на 1 мл среды, составляет: на 2-й день В.subtilis - 0,3 млрд. кл., В. licheniformis - 0,26 млрд. кл.} на 5-й день - 0,58 и 0,5 млрд. кл. соответственно; на 12-й день - 0,88 и 0,72 млрд. кл. соответственно.

На известной среде выход биомассы на 2-й, 5-й и 12-й дни составляет: для В. subtilis - 0,13 - 0,14, 0,25- 0,3 и 0,44-0,46 млрд. кл. соответственно; для В. licheniformis - 0,11- 0,2, 0,23-0,26 и 0,38-0,4 млрд. кл. соответственно.

Вместо указанных солей можно ис

пользовать и иные источники ионов Си и Мп из расчета, что в питаг+

тельной среде концентрация ионов Ып составляет 0,05-0,01 г, а концентрация ионов 0,005-0,003 г/л среды

Использование предлагаемой питательной среды позволит повысить выход биомассы спорообразующих аэробных микроорганизмов. Кроме того, состав питательной среды способствует повьппению выхода живых микроорганизмов после лиофилизации,

Формула изобретения

Питательная среда для вьфащивания спорообразующих аэробных бактерий Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis, содержащая пивное сусло, агар-агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода биомассы,, она дополнительно содержит гидролизат мяса с содержанием аминного азота 600 мг %, меднокалиевую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты и марганцевокалневую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты, а в качестве воды она содержит дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, г/л:

Пивное сусло 500-600

Гидролизат мяса .100-120

Неднокалиевая

соль оксиэтилендифосфоновойкислоты 0,304-0,064

5 1520094 .и

Марганцевокалие-Агар-агар25-30

вая соль окси-Дистиллированная

этилендифосфо-водаОстальное

новой кислоты 0,028-0,017

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве ферментов, антибиотических и бактерийных препаратов. Цель изобретения - повышение выхода биомассы. Для приготовления среды используют, г/л: пивное сусло 500-600, гидролизат мяса (с содержанием аминного азота 600 мг %) 100-120, меднокалиевую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,304-0,064, марганцевокалиевую соль оксиэтилендифосфоновой кислоты 0,028-0,017, агар-агар 25-30, дистиллированную воду до 1 л. Среду стерилизуют и используют для выращивания. На 12-ые сутки выращивания выход биомассы BACILLUS SUBTILIS увеличивается в 3-4 раза, BACILLUS LICHENIFORMIS в 2-3 раза по сравнению с известной средой.