Способ диагностики заболеваний печени Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунодиагностике заболеваний печени.

Целью изобретения является повышение точности способа..

Способ осуществляется следующим образом.

У больного берут 5-8 мл крови, получают из нее 2-3 мл сыворотки. Выделенные от мелкого лабораторного животного, например крысы, тимоци- ты (от одного животного тимоциты можно использовать в течение рабочего дня) инкубируют с сывороткой больного в течение 1 ч при 37°С, встряхивая через 10-15, мин при этом соотноше ние компонентов равно 20х х10 тимоцитов/мл сыворотки. После инкубации клетки осаждают центрифугированием при OOgB течение 5 мин и

ресуспендируют в 1 мл среды 199. Параллельно приготавливают нативные крысиные эритроциты и тимоциты соответственно в концентрациях 0,06 мл и среды 199. Необработанные сывороткой тимоциты (НТ) и эритроциты (НЭ), а также обработанные сывороткой больного тимоциты (ОТ) используют для постановки реакции ауто- розеткообразования (а-РОК), которую проводят следующим образом: смешивают по 0,1 мл эритроцитов и тимо- цитов из исходных приготовленных взвесей (соотношение 50:1), центрифугируют в течение 5 мин при 200.g и инкубируют в 2 ч на холоду, после чего фиксируют глютаральдеги- дом и подсчитывают число а-РОК. При постановке реакции используют следующее сочетание тимоцитов и эритросд

1ч9 tsS

.4

цитов: 1.ИТ+Н9 (контроль), 2, ОТ+НЭ количество образующихся а-РОК расчитывают в % при подсчете на препарате не менее 300 тимоцитов. При использовании тимоцитов, обработанных сывороткой больных с хроническим гепатитом, число образующихся ауто-РОК существенно повыша ется по сравнению с контролем (до )-. Сыворотка больных с цирротическими изменениями печени оказывает .ripo r тивоположный эффект снижается до по сравнению с нормой,

П,р и м е р К Больной Б. А 1 год находился в клинике по поводу хронического персистирующего гепатита в стадии обострения. Предъявлял жалобы на ноющие боли в эпигастрии иррайииру ощие в поясницу при физимес-- кой нагрузке. Болеет с октября 19В г лечился в ста.ционаре. по поводу гепатита. .,

Об-ье ггивно - склеры субэ ггерич ны, пониженного питания, живот болезненный, в правом подреберье печень выступает на 2 см,.

, Лабораторные данные; кровь - эритроциты ,0 ( г/л), гемоглобин 120, цветной показатель. 0,9} лейко циты7,1 (), эозинофилы 2, , лочкоядёрные- 2, сегментоядерные }8, . лимфоциты lO, моноциты 8, СОЭбмм/ч , Общийбелок 83j3 (г/л), альбумины SSjO, глобулины; ,, of,- 7,0, .1,0, У 19.0, соотношение.альбумин/глобулин . Билирубин общий 21,88 (ммоль/л), прямой , непрямой 16,41, Холестерин (ммоль/л) Ферменты: аспарагинтрансфераза . . 0,7 ммоль (4«л)f -аланиятрансфераза 0,9, щеломная фосфатаза 0,5, тимоло вал проба 2 ЕД,.

У больного взято 7 -ш- крови, получена сыворотка, которой обработали тимоциты крысы, и использовали их для постановки реакции ауто-РОК,

У этого больного с выраженной клинической картиной хронического гепатита количество а РОК посл.е обработ- . ки тимоцитов и эритроцитов существенно повышалось (ОТ+НЗ-30 по сравнению с контролем; НТ-ьНЭ-18%), Таким образом, у него подтверждается диагноз хронического гепатита.,

Пример 2. Больной В., 55 лет находился в клинике по поводу портального цирроза печени, стадия сформировавшегося цирроза. Синдром высокой портальной гипертензии, ческая печеночная недостаточность п. смешанно-клеточному типу. Предгйвлял жалобу на ноющие боли в правом подреберье, вздутие живота, слабость, темный цвет мочи, желтуху.

Болеет 5 лет, когда появились боли в правом подреберье. Объективно: склеры и кожа с желтушным оттенком, на коже сосудистые звездочки, печень 4- 3 см, плотная.

Лабораторные данные: кровь - эритроциты 4j1, гемоглобин 130, цветной показатель 0,9, лейкоциты 6,4, эозин филы 1, палочкоядерные 4, сегменто- ядерные 64, лимфоциты 29, моноциты 2 СОЭ 5 мм/ч.

Общий белок 8197, альбумины 43,6, глобулины: о( , aV Л 19) g - , соотношение альбумии/гло- булии - 0,7. Билирубин.общий 24,62, прямой 5,47, непрямой 19,15, холестерин 4,81 о Ферменты: аспарагинтрансфераза 0,65, аланинтрансфераза 0,7, щелочная фосфатаза 0,8, тимоловая проба 2 ЕД.

У больного взято 8 мл крови, получена сыворотка, которой обработали тимоциты крысы и использовали их для постановки реакции а-РОК, получены следующие результаты: ОТ + НЭ-7) . Таким образом, у данного боль нЬго подтвердился цирроз печени.

Предлагаемый способ диагностики заболеваний печени позволяет Достоверно осуществлять дифференциальный диагноз между хронически.м гепатитом и циррозом печени При этом сокращается время для исследования, отпадает необходимость в дорогостоящих, дефицитных реактивах по сравнению с прототипом. Техника выполнения пред латаемого способа значительно доступнее по сравнению с прототипом. Используемые в настоящее время в боль- имнстее лечебных учреждений способы диагностики при нетипично протекающих формах хронических поражений печени не позволяют четко разграничить хронический гепатит и цирроз пемени, поэтому не приводится сравнение с об щепринятыми в (слиниках способами ди- агиостикиа.

С помощью предлагаемого способа правильный диагноз был установлен в 44 (из 50 обследованных - 22 больных с правильно поставленным диагно зон) ,

В сравнительных же экспериментах по исследованию активности ферментов у людей (прототип), сыворотка которых использовалась для постановки а-РОК, было выявлено, что активность аспа ра ги нтра нсферазы, ала нинтранс- феразы и щелочной транеферазы повышалась (причем одинаково) не только у хроническим гепатитом и циррозом печени, но и у людей, отравленных ядохимикатами, и с функциональ- ной гипербилирубинемией. Отмечен также большой разброс показателей (по прототипу) у отдельных людей.

Формула изобретения Способ диагностики заболеваний печени путем выделения сыворотки из крови больного с последующим ее исследованием, отличающийся тем, что, с цепью повышения точности способа, после выделения сыворотки, ею обрабатывают тимоциты мыши или крысы, добавляют аутологичные эритроциты этих животных и подсчитывают количество аутологичных розеткообра- зующих клеток и при снижении количества розеткообразующих клеток до 7- по сравнению с нормой, диагностируют цирроз печени, а при повышении их числа до 28-31 диагностируют хронический гепатит.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунодиагностике заболеваний печени. Цель изобретения - повышение точности способа. У больного берут кровь, выделяют сыворотку и обрабатывают ею тимоциты мыши или крысы, добавляют к ним аутологичные эритроциты и подсчитывают количество аутологичных розеткообразующих клеток. При снижении их количества до 7-11% по сравнению с нормой диагностируют цирроз печени, а при повышении их числа до 28-31% - хронический гепатит. С помощью предлагаемого способа правильный диагноз был установлен в 44% случаях, в то время как по известному способу невозможно было установить правильный диагноз.