Способ криоконсервации спермы птиц Советский патент 1989 года по МПК A61D7/02 

Изобретение относится к биологии размножения животных и может быть использовано в криобиологии и генетике для консервации генетических ресурсов домашних .птиц.

Целью изобретения является повышение числа функционально полноценных спермиев.

Пример. Сравнение известного и предлагаемого способов криоконсер- вации спермы птиц.

Объектом исследований служила сперма петухов пород белый леггорн, род- айланд, полтавские глинистые. Использовалась как смесь, так и индивидуальные эякуляты.

Число поврежденных и функцио- нальн о полноценных спермиев в оттаянной сперме определяли по известной методике.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Свежеполученную сперму разбавляют в соотношении 1:1 при комнатной температуре любой из известных защитных сред, например ЛКС-1, и помещают в холодильник при 2- С на 5 мин. В сперму добавляют криопротектор, например диметилацетамид или ди- метилформамид, и эквилибрируют. В процессе эквилибрации проводят расфасовку спермы, например, в полиэтиленовые пробирки емкостью 0,6 мл, которые при необходимости маркируют, а в одну из них вставляют термопару, подсоединенную к контрольнб-измерир1

ГО

NU

00

00

1 к...- iTijnoopy, например псгснцио- --II i , дли контроля за режима.. иа)1,.,е1 ;ия и замораживания. 06- р... :: . c rii-aidicn на металлическую под- 1-(-::: M,.i ;(:./10, 8 свою очередь, олус Hi ; fc . жидкого азота и охлаждают i.i ...коростью 10-20 град/мин до начала . 4 i-Ч : э кр11C алпизации , затем выдерживают 1-3 мин и замораживают до (, 16)-- -22; С со скоростью 25со ско- 196° с

5U -р-лг..-ии до (-80)-(-90)° с и С ч. I biu jO -/О град/мин и до :о ( f, 1лг .0-50 грс1Д/н1, и , З иоро- женные образцы с учетом маркировки пе ренисят для постоянного хранения в .p. .i зукнчие канистры спермохрани- H iut;ip,i 1- еобходимости используют

i.j ., и-1с;чению для искусственного

) ICyp.

ihi 1 предназначено обосноваI u -urhi;. пределов скорости охт ,,г,,

1

: U;. i: I О L ДО начала

I м i ; i П (ЧчЗЛЦИИ ,

iijt Пред;, i явленные ь табл. i-.v р 101 о том. что от О С до процесса кристаллизации сперму

ора.чио (..хлаждать со скоростью

/

, Ьп.|| I

: --3 ipoii,,a icpHi- ULnni-tda j4c i(j ipouecca отчетливо видно ;,uJ,.|-Jиaмepитeльнoм приборе,

;- нз КГП О приостанавлнвс : , ,.;..., и1-.тение температуры. , , ,.;. i,. :,: ixi ;:ожк спбрмь: В ie- ;:::.... н, юскованием этих пре- .-JRM:-. - У,: .,.ie,o.yio 4 ie энсперимен I ал :.- . . 111 У1.)| ке J течение :и;оце |.о (..;1 1ап11|1.зации спермы до : мин вы/;(.д Ч)унк4иоийльно полноценных спермиев составляет 17,5i5, 1 мин - 33. : 3 ,2 , 2 мин - 27,Si ,5, 3 мин - 2/ ,-,. г - i.iH 15,0+5,0%, 5 мин - i4 J 5ii; i - 1 л.. иI. образом J выдержку спермы в .kie процесса кристаллиза ции целееообоазно проводить не более 3 и не /ченее 1 мин,

В табл, 2,3 и k представлены экспериментальные данные по обоснованию граничных пределов скорости замораживания спермы, а также граничных пре- qe)ji3 с /пензй режима замораживания.

0

5

0

э

О

-5

дь

40

50

Представленные в табл. 2,3 и 4 экспериментальные данные свидетельствуют о том, что наибольший выход функционально полноценных спермиев обес- Г1ечивается при замораживании спермы до (-1б)-(-22) С со скоростью 25- 30 град/мин, затем до (-80)-(-90)°С со скоростью 50-70 град/мин и до -19б°С со скоростью 30-50 град/мин.

В табл. 5 представлены результаты сравнительного испытания эффективности криоконсервации спермы петухов известным и предлагаемым способами.

Таким образом, применение предлагаемого способа позволяет повысить выход функционально полноценных спермиев в 5,5 раза.

Кроме того, при использовании предлагаемого способа важно лишь выдержать указанные параметры охлаждения и замораживания спермы, объем замораживаемых образцов, их форма, тип облицовки спермы не имеют значения. Это позволяет в отличие от известноно способа рационально исполь .зовать полезную площадь спермохра- НИПИ1Ц, проводить криоконсервацию индивидуальных эякулятов, а следовательно использовать предлагаемый способ в селекционно-генетической работе.

Формула изобретения

Способ криоконсервации спермы птиц, включающий ее разбавление, охлаждение, эквилибрацию, замораживание, хранение в замороженном состоянии, отличающийся тем, что, с целью повышения числа функционально полноценных спермиев, охлаждение спермы осуществляют со скоростью 10-20 град/мин до наступления процесса кристаллизации, выдерживают в течение 1-3 мин, а замораживание осуществляют по ступенчатому режиму: до (-1б)-(-22) С со скоростью 25- 30 град/мин, до (-80)-(-90)°С со . скоростью 50-70 град/мин и до -196 С со скоростью 30-50 град/мин.

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к области биологии размножения животных и может быть использовано в криобиологии и генетике для консервации генетических ресурсов домашних птиц. Целью изобретения является повышение числа функционально полноценных спермиев. Способ заключается в ступенчатом охлаждении разбавленной и эквилибрированной спермы до начала кристаллизации со скоростью 10-20 град/мин, а затем выдерживании в течение 1-3 мин и ступенчатом замораживании до температуры от -16 до -22°С со скоростью 25-30 град/мин, от -80 до -90°С со скоростью 50-70 град/мин и до -196°С со скоростью 30-50 град/мин. Использование способа позволяет увеличить выход функционально полноценных спермиев в 5,5 раз по сравнению с известным способом. Табл. 5.

Таблица2

ТвблицаЗ

isziteez8

Таблица Выход функционально полноценных спермиев, в %

ТаблицаЗ