Способ определения В-лимфоцитов крови человека Советский патент 1989 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунного статуса человека, а также при проведении массовых иммунологических обследований.

Целью изобретения является сокращение времени анализа и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом .

В каждую лунку микрокамеры для иммунологических реакций (планшет Терасаки вносят по 0,005 мл лейкоцитов в концентрации 1,0-1, /мл и 0,005 мл суспензии частиц полистирольного латекса с диаметром частиц

2,2 мкм в концентрации 6, 0-7 ,0-1 О/мл. Камеры центрифугируют 5 мин при ; 1000 об/мин, инкубируют 30 мин при 4°С, фильтровальной бумагой удаляют надоеадок, камеры высушивают и окра- щивают по Лейщману. При микроскопи- ровании подсчитывают количество ро- эеткообразующих лимфоцитов на 100 лимфоцитов (за розетку принимают лимфоцит, присоединивщий 3 и более частиц полистирольного латекса).

П р и м е р. У 14 практически здоровых людей определяли количество В-лимфоцитов с использованием предлагаемого способа.

Полученные результаты приведены в табл. 1 .

Для проверки специфичности контакта В-лимфоцитов с частицами полисти- рольного латекса были проведены опыты по сравнению частиц полистирольно го латекса с частицами меламинфор- мальдегицной, ренольной и резольной смол. Для этих целей проводят peaic- цию розеткоьбразования с соответствующими индикаторными частицами, ис- пользуя лейкоциты капиллярной крови 6 здоровых доноров.

Результаты представлены в табл. 2

Из табл. 2 видно, что только час- тицы полистирольного латекса дают результаты, сопоставимые с результатами розеткообразования с эритроцитами мьши.

Кроме того, отдельная серия опы- тов была посвящена выяснению вопроса зависят ли результаты от диаметра частиц полистирольного латекса. Дпя ЭТОГО у 9 здоровых доноров определя- 1ЛИ количество В-лимфоцитов по пред- лагаемому способу, используя полисти рольный латекс с диаметром частиц 2,2 1,95, 1,8 мкм. Было выяснено, что в диапазоне 2,2-1,8 мкм результаты розеткообразования не зависят от диаметра частиц полистирольного латекса.

мя как длительность по известному способу 120-135 мин.

Кроме того, при хранении эритроциты мьнпи (известный способ) теряют свою активность (срок хранения не более 1 сут) , а частицы полистирольного латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков хранения.

Формулаизобретения

Способ определения В-лимфоцитов крови человека, включающий забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их в присутствий индикаторных частиц, подсчет роэеткообразующих клеток, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, в качестве индикаторных частиц используют частицы полистирольного латекса.

Т а б л И ц а 1

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунологического статуса человека, а также при проведении массовых иммунологических обследований. Цель изобретения - сокращение срока анализа и упрощение способа. У обследуемых проводят забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их с частицами полистирольного латекса с диаметром частиц 2,2 мкм в концентрации 6,0 - 7,0^.10⁷/мл, затем препараты высушивают, окрашивают по Лейшману и подсчитывают число розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов и по их количеству определяют B - лимфоциты человека. В сравнении с прототипом сокращено в 2 раза время анализа. В результате использования полистирольного латекса упрощена процедура анализа путем исключения этапов фиксации и отмывки и, кроме того, частицы полистирольного латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков их хранения. 2 табл.

В предлагаемом способе отсутствуют этапы фиксации глутаровым альдегидом (который является сильным канцерогеном) и отмьшания клеток физиологическим раствором. Кроме того, более чем в 10 раз сокращена длительность этапа приготовления суспензии индикаторных частиц. Общая длитель- ность анализа предлагаемым способом составляет не более 60 мин, в то вреТаблида 2