Способ диагностики силикотуберкулеза Советский патент 1988 года по МПК G01N33/53 

ilib 1

Ф

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике силикотуберкулеза, возникающего у лиц, работающих в контакте с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью.

Цель изобретения - повьшение точности диагностики силикотуберкулеза.

Способ осуществляют следующим образом.

Выделяют лимфоциты из гепарини- зированной периферической венозной крови обследованных лиц в градиенте 14,5% верографина фирмы Spofa (ЧССР) на физиологическом растворе, рН - 7,35, 6 - 1,076, центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин. Из образовавшихся трех слоев отбирают второй слой (мутное кольцо) в силикони- рованную пробирку и добавляют питательную среду № 199 до 10 мл, дважды отмывают по 2 мин при 1500 об/мин и сливают до 1 мл, смешивают и считывают в камере Горяева в пять и более квадратах и разводят до f lO кл/мл,

В качестве индикаторных частиц применяют зритроциты барана и зимо- зан в виде 0, суспензии Таллинского химико-фармацевтического завода или зимозан для определения пропердина Олайнского БХЗ.Последний растирают в фарфоровой ступке с мер нык количеством физиологического раствора, которьм добавляют по каплям.

В качестве диагностикума применяют конъюгат предварительно окрашеннго зимозана с раствором стандартног туберкулина, содержащего 20000 ТЕ в 1 мл (сухой очищенный туберкулин Предприятия по производству бакпре- паратов Ленинградского НИИ вакцин и сывороток).

Зимозан предварительно окрашиваю в контрастный цвет по способу Хиль- ко Т.Ф.

Далее 5 мл раствора, содержащего 100000 ТЕ смешивают с 5 мл 0,1%-ной взвеси предварительно окрашенного зимозана, инкубируют 60 мин при 37°С, отмывают дважды центрифугированием при 1500 об/мин с физиологическим раствором, приготавливают из осадка 0,17%-ную взвесь, которую используют в работе.

Постановка реакции.

5

5

В силиконированную микропробирку с О,1 мл суспензии лимфоцитов 2-х 10 в 1 мл среды № 199 добавляют 0,1 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, 0,1 мл 0,17%-ной взвеси комплекса зимозан-туберкулин. Смесь инкубируют в течение 5 мин при 37 С, осаждают в течение 2 мин при 1500 об/мин, инкубируют в течение 60 мин при 10°С. После этого фиксируют 0,1 мл 3%-ного глютарового альдегида в течение 20 мин. Далее запивают дистиллированной водой до края пробирки, центрифугируют 2 мин при 1500 об/мин, отсасывают надоса- дочную жидкость пастеровской пипеткой и готовят мазок на предметном стекле из тщательно ресуспендиро- Q ванного осадка. Мазок подсушивают на воздухе, фиксируют в течение 10 мин в метиловом или абсолютном этиловом спирте, отмывают 2 мин в дистиллированной воде, подсушивают затем метиловым зеленым и пирони- ном по Браще.В мазках препаратов подсчитывают при микроскопии под иммерсией 200 лимфоцитов. За розетку принимают лимфоцит, присоединяющий к своей поверхности три и более индикаторные частицы одного типа. При подсчете клеток определяют процентное соотношение восьми субпопуляций лимфоцитов, учитывая, что комплекс зимозан-туберкулин имеет при окраске 5 по Враше синий цвет.

Прием реакции розеткробразования позволяет отдифференцировать субпопуляции розеткообразующих лимфоцитов на основании образования розеток со всеми использованными индикаторами: Л TvS -fJ эЕ+ На основании анализа полученных результатов в группе больных и контрольных лиц выделены в качестве диагностики значимых субпопуляция-лимфоцит только с туберкулиновыми рецепторами. Выявление предлагаемых диагностических показателей возможно только в предлагаемой реакции.

При содержании процента лимфоцитов с рецепторами к туберкулину (Л У 7/37, реакцию считают положительной и диагностируют силикотубер- кулез.

Пример 1. Больной 58 лет, в прошлом в процессе работы длительно подвергавшийся воздействию кварцсодержащей пыли, направлен в клинику

0

0

5

0

5

для уточнения диагноза. На рентгенограмме на всем протяжении легких определялись мелкопятнистые тени, имеющие слева в верхнем поясе различную величину. Клинически симптомов интоксикации не было, температура нормальная. Лабораторные показатели, включающая общий анализ крови и биохимические данные, воспалительных изменений не выявили. Градуированная кожная туберкулиновая проба Пирке была отрицательной во всех разведениях. При иммунологическом исследовании крови в реакции тройного розеткообразования с туберкулином выявлены Л -7,6%. Таким образом, реакция расценивается как положительная, что позволило впервые у больного диагностировать силикотуберкулез и рекомендовать проведение противотуберкулезной терапии.

Пример 2. Вольной 60 лет, в прошлом работал в условиях воздействия кварцсодержащей пыли. Направлен в клинику для обследования и уточнения диагноза. На рентгенограмме легких на фоне диффузно усиленного и деформированного легочного рисунка видны множественные различной величины кольцевидные тени с перифокальным воспалением. Клинически имелись симптомы интоксикации (субфебрилитет, слабость, потливость). В общем анализе крови и при биохимическом исследовании определялись воспалительные изменения в виде ускоренной СОЭ, повышенного содержания гаптоглобина, фибриногена к сиаловой кислоты. Градуированная реакция Пирке отрицательная. При постановке реакции тройного розеткообразования 1,0%. Реакция расценена как отрицательная. Таким образом, на основании комплекса клинико-рентгенолабораторных исследований, включая микробиологическое исследование мокроты, где обнаружены пневмококк и гемолитический стрептококк, у больного диагностирован пневмокониоз, осложненный хронической неспецифической инфекцией с формированием кист и с перифокальным воспалением вокруг них. Проводилась неспецифическая антибактериальная терапия с положительным эффектом.

0

5

0

5

Таким образом, преимуществом предлагаемого способа диагностики является возможность установления диагноза силикотуребкулеза на ранних этапах, в том числе и при клинически не определяемой активности силикотуберку- лезного процесса, а также и при туберкулиновой энергии, что является положительной стороной и важно для своевременного назначения специфического лечения.

Диагностическая ценность изучена у 30 больных с подозрением на силикотуберкулез в возрасте от 45 до 60 лет с длительным стажем работы в пылевых условиях.

По клинико-рентгенологическим критериям диагноз силикотуберкулеза вызывал затруднения у больных с отрицательной кожной туберкулиновой пробой Пирке (14 человек).

Всем больным была проведена предлагаемая реакция тройного розеткообразования, которая окалазась положительной у 11 из 14 больных с отрицательной туберкулиновой IJOжнoй пробой (78,6%), что позволило установить диагноз силикотуберкулеза на ранней стадии его развития, остальные методы этого не позволили и повысить точность диагностики на 28%.

Предлагаемый способ осуществляется in vitro и исключает обострение заболевания в результате диагностического исследования.

Формулаизобретения

0

5

0 Способ диагностики силикотуберкулеза, включающий исследования больного с помощью туберкулина, о т л и чающийся тем, что, с целью повышения точности, у больного вы45 деляют из крови лимфоциты, добавляют эритроциты барана и обрабатывают окрашенным коньюгатом зимозана с туберкулином, подсчитывают розеткооб- разующие клетки и при содержании

50 розеткообразующих туберкулин-зимоза- новых клеток равном 3% и выше по от- ношению к общему числу розеткообразующих клеток диагносцируют силикотуберкулез .

Изобретение относится к медицине, точнее к клинической иммунологии, предназначено для ранней диагностики силикотуберкулеза in vitro у лиц. контактирующих с высокофиброгенной кварцсодержащей пылью. Цель изобретения - повышение точности. В пробе крови проводится иммунологическая идентификация специфических рецепторов к туберкулину на субпопуляциях лимфоцитов в реакции тройного роэет- кообразования и при содержании лимфоцитов с рецепторами к туберкулину 7 3% и лимфоцитов с реце пторами к комплементу и туберкулину /0,5% реакция считается положительной и позволяет провести раннюю диагностику силикотуберкулеза в 78,6% случаев. Предлагаемый способ может быть внедрен в практику отделений профпатоло- гии, а также лечебно-диагностических и фтизиопульмонологическнх стационаров . (Л с